小鼠肝组织可溶性蛋白质双向电泳条件的建立

研究的主要目的是建立小鼠肝组织可溶性蛋白质组的双向电泳技术,以等点聚焦为第一向,垂直SDS-PAGE为第二向进行双向电泳,并对样品处理方式、蛋白上样量、凝胶浓度和染色方法等关键因素和环节进行了比较研究,通过实验条件的筛选和优化获得了较满意的双向电泳图谱。采取的方法具有较高的分辨率和重复性,为进一步实验打下良好基础。     

人表皮组织蛋白质组双向电泳技术的建立

目的:建立和优化人表皮组织蛋白质组双向电泳技术,为后续的皮肤蛋白质组学研究奠定基础.方法:组织匀浆法制备表皮组织总蛋白,采用固相pH 梯度胶条进行双向电泳,凝胶银染后用PDQuest 7.4软件对电泳图谱进行分析.结果:人表皮组织蛋白质组在7cm pH 5～8 IPG胶条的最佳上样量为200 靏,平均蛋白斑点数为414±19,平均匹配斑点数为346±31,匹配率达83.6%.结论:通过优化双向电泳条件,获得了分辨率高、重复性好的人表皮组织蛋白质组双向电泳图谱.     

小鼠肾脏组织的双向电泳

对小鼠肾组织双向电泳(2-DE)实验中的样品保存、裂解液、胶条泡胀和染色等步骤研究发现：在-73℃，以液态保存的样品仍需尽量以相同的保存时间用于对比，或使用新处理的样品使2-DE图谱反映样品原先的蛋白质组成；优化的裂解液组成是尿素9．8mol／L、Tris 40mmol／L、CHAPS 40g／L、DTT 23mmol／L、CA 5g／L、PMSF 1mmol／L和EDTA 1mmol／L；胶条泡胀采用主动方式有利于大分子量蛋白质的2-DE分离；银染色过程中采用充分的水洗步骤使之获得背景鲜明的2-D图谱。在优化条件下，高分子区及碱性区蛋白质均得到理想分离，获得蛋白质点数达1491个，明显优于已有文献方法。     

玉米蛋白质组学研究进展

玉米是世界上分布较广的作物,是我国三大农作物之一。文章简要介绍了蛋白质组学的基本概念和重大意义,详细综述了有关玉米的蛋白质组学研究进展,并分析了存在的问题和发展前景。     

莽山烙铁头蛇粗毒双向凝胶电泳分析

采用固相pH梯度等电点聚焦-SDS双向聚丙烯酰胺凝胶电泳对莽山烙铁头粗毒进行了分析,通过银染法显色,电脑软件识别出约40个蛋白质点.其中分子量超过130 kD的蛋白质点很少,分子量90 kD~10 kD的区域均有蛋白质点分布,分子量34 kD区域的蛋白质点较为密集,且它们的含量明显较高.从蛋白质点的等电点分布范围分析,偏于碱性端的蛋白质明显多于酸性端的蛋白质,且分布在中性偏碱(pH 7~8)的区域.质谱数据的数据库搜寻结果表明:莽山烙铁头蛇毒中含有类凝血酶组分、纤溶酶组分、血小板聚集蛋白、抗血小板聚集蛋白和平滑肌钙离子通道阻断剂等组分.     

金乌贼视神经节蛋白质组分离方法的初步研究

选用TCA/丙酮沉淀法、缓冲液法、柱层析法、裂解液法和裂解液-超速离心法分别提取金乌贼视神经节蛋白质,其中蛋白质得率较高的方法有裂解液-超速离心法、裂解液法,其次为TCA/丙酮沉淀法.经双向凝胶电泳分离,并采用Melanie 4 Trial软件统计蛋白质斑点数目.发现pH 5~8范围的载体两性电解质适合于分离视神经节蛋白质组,其电泳图谱中多数蛋白质斑点清晰可见,显示出高分辩率、重复性好和易取样供质谱分析的优点,适合于开展视神经节蛋白质组学研究.裂解液-超速离心法是金乌贼视神经节最佳蛋白质提取方法.     

结核分枝杆菌H37Rv株与耐异烟肼菌株间细胞壁蛋白质组双向电泳图谱比较

利用双向电泳技术可以对体外培养的结核分枝杆菌非耐药型菌株和耐药型菌株进行细胞壁蛋白质组学比较,寻找与耐药相关的蛋白质．结核分枝杆菌H37Rv株与耐异烟肼菌株在Middlebrook 7H9 Broth培养基中37℃摇床培养1个月后,从培养物中提取结核分枝杆菌细胞壁蛋白．以pH4～7的IPG预制胶条为第一向等电聚焦,以SDS-PAGE为双向电泳第二向,经过银氨染色,图像扫描后,利用软件分析处理图像．在结核分枝杆菌H37Rv株和耐异烟肼菌株的细胞壁蛋白质凝胶图谱中分别检测出499和582个蛋白质斑点．它们的蛋白质分子质量分布基本相似,其中有102个斑点差异显著．这为研究耐异烟肼菌株的耐药机制提供了蛋白质组学方面的信息．     

中国两性生殖卤虫早期胚胎发育蛋白的双向电泳条件优化

采用双向电泳技术对中国卤虫胚胎发育到5 h时的蛋白组进行研究与分析.考察不同条件对双向电泳结果的影响,分别从上样量、染色方法、分离胶浓度等3方面进行研究.实验结果显示上样量为400 μg时图谱的斑点数较多;采用银染法所得实验结果优于考染;同时分离胶浓度为10%时所得蛋白斑点数较多.优化的实验条件为进一步研究中国卤虫蛋白组奠定基础.     

甘蔗叶片蛋白质组双向电泳技术优化

为了建立适合甘蔗叶片蛋白质组研究的双向电泳技术,对甘蔗叶蛋白质的溶解方法、IEF电泳、上样量等关键步骤进行了优化.结果表明:裂解液中有2 mmol/L的硫脲才能更充分地溶解蛋白;上样量1.0 mg时得到质量较好的凝胶图谱;甘蔗叶片蛋白质主要分布在pH4～7范围.通过对甘蔗叶片蛋白双向电泳技术的优化,提高了双向电泳图谱分...     

肝癌细胞株HepG-2的G1期细胞蛋白质组双向电泳图谱的建立

采用双向电泳分离肝癌细胞株 HepG2 的 G1 期细胞的蛋白质,经考马斯亮蓝染色及图像扫描与分析显示:在 pH3-10,13 cm 的 IPG 胶条上,可分离到 227 个重复性及分辨率均较好的蛋白斑点,蛋白斑点的匹配率为 84%.建立了 HepG2 的G1 期细胞蛋白质组双向电泳图谱,为其蛋白质组学的进一步研究奠定了基础.     

华溪蟹主要组织蛋白质双向电泳技术体系的建立

为深入研究重金属胁迫下华溪蟹主要组织蛋白质的差异表达,对华溪蟹心脏及鳃总蛋白质的双向电泳技术体系进行了初步探讨.通过对样品处理方法、上样量大小以及双向电泳实验条件的比较选择,初步建立了适用于华溪蟹组织蛋白质组分析的双向电泳技术体系.结果表明:选取pH 3～10的24cmIPG胶条,上样量1.0mg,得到了较为理想的华溪蟹心脏及鳃双向电泳图谱;分离到的心脏蛋白质多集中于pH 5.5～9,而鳃蛋白质多集中于pH 4～7.     

Two-dimensional gel electrophoresis analysis of the proteomes expressed in the human hepatoma cell line BEL-7404 and normal liver cell line L-02

Proteome analysis technology has been used extensively in conducting discovery research of biology and has become one of the most essential technologies in functional genomics. The proteomes of the human hepatoma cell line BEL-7404 and the normal human liver cell line L-02 have been separated by high resolution two-dimensional gel electrophoresis (2-DE) with immobilized pH gradient isoelectric focusing (IPG-IEF) in the first dimension and sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) in the second dimension (IPG-DALT). The resulting images have been analyzed using 2-D analysis software. Quantitative analysis reveals that 7 protein spots are detected only in hepatoma BEL-7404 cells, 14 only in L-02 cells, and 78 protein spots show significant fluctuation in quantity in both cell lines (P< 0.01). These protein spots have been displayed on a proteome differential expression map. Analysis for the reproducibility of 2-DE indicates that the positional variability in the IEF dimension is 0.73 mm, while the variability in the SDS-PAGE dimension is 0.44 mm, and the quantitative variability is 17.6%–19.2%. These results suggest that the reproducibility of 2-DE has been suitable for the study of differential expression of proteomes. Proteome differential expression maps can be useful tools for disease diagnosis, drug-target validation analysis and biological process elucidation.     

对B.t毒素敏感与抗性的昆虫细胞的差异蛋白质肽质指纹分析

采用2-DE技术分析了粉纹夜蛾TnH5对B.t CrglAC毒素敏感和抗性2种细胞总蛋白质,建立了TnH5细胞双向电泳图谱,获得了一些差异蛋白质.对部分差异蛋白质点采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF/MS)测定了其胶内酶解后的肽质指纹图谱(PMF),查询数据库,结果表明,部分差异斑点分别与胞质外周蛋白、脂多糖生物合成蛋白、一种脱氢酶和类免疫球蛋白等类似.     

双向凝胶电泳分析动脉粥样硬化大鼠心肌蛋白表达图谱

采用双相凝胶电泳分离大鼠冠状动脉总蛋白，胶态考马斯亮蓝G-250染色，GS-800凝胶扫描仪获取凝胶图像，并用PDQUEST软件分析，检测出2626个蛋白质斑点，并且得到不同条件下的蛋白质组的差异图谱，在相同的参数设置下，不同谱图间的匹配斑点数为1841，匹配率达70．1％以上，测量了凝胶蛋白斑点的在IEF、和SDS—PAGE方向上的位置偏差；对比分析了两种心肌组织的差异蛋白，发现33个蛋白质斑点只在正常大鼠心肌蛋白检测到表达；46个蛋白点在两种细胞中表达量上有显著变化，为从分子水平上理解心血管类疾病的发病机制，寻找防治药物和药物的构效关系的进一步研究开拓了新的途径，同时为深入研究AS的发病机制和药效研究提供参考数据。     

海生红藻多管藻R-藻蓝蛋白亚基组成及特性

以海生大型红藻多管藻(Polysiphonia urceolata)为材料,经Sephadex G-150凝胶过滤和DEAE-Sepharose FF离子交换层析,从藻胆蛋白提取液中分离纯化出在非变性电泳和非变性等电聚焦中均表现单一条带的R-藻蓝蛋白(R-phycocyanin,R-PC),等电点为5.6.SDS-PAGE、变性等电聚焦及二维电泳分析表明,所得R-PC含有1种分子质量为18.2kD、pI为6.5的α亚基α16.85.2,含有分子质量为20.0kD和20.9kD、pI为5.5和5.6的4种β亚基β52.05.0、β52.05.9、β52.06.0和β250..69.该结果为深化R-PC的结构功能研究提供了有价值的实验依据.     

用Visual FoxPro实现技术指标的统计分析

生产技术指标的统计分析要求技术人员每天都要录入成千上万的数据，传统的人工手写的方式已赶不上生产和技术管理的需要。介绍了一种用Visual FoxPro6．0数据库系统实现技术指标统计分析的办法。     

黒腹果蝇黑条体突变型蛋白质组分析中二维凝胶电泳技术的改进

用黒腹果蝇黑条体突变型为材料,介绍一种改进的蛋白质组分析中的二维凝胶电泳技术。该方法在电解质的配比以及银染过程等方面对传统的二维凝胶电泳技术加以了改进,不仅缩短了实验时间,减轻了实验工作量,而且得到了更好的实验效果;并且该方法对实验条件要求不高,在普通的实验室条件下即可被运用。     

双向电泳技术在蛋白质组学中的应用

双向电泳技术在蛋白质组学研究领域中一直处于核心地位。此文从基本原理、方法、在蛋白质组中的应用以及方法的局限性和相关技术改进等方面做了简要综述,为进一步开发利用该技术提供参考依据。     

Halomonas aquamarina盐敏感质膜蛋白组的研究

革兰氏阴性细菌外膜蛋白对细菌外部环境因素的调节功能已受到高度重视,但有关细菌质膜的作用报道极少.为研究质膜蛋白在抗盐机制中所起的作用,采用蛋白质组学技术比较深海中度嗜盐菌Halomonasaquamarina在生理(0.56mol/LNaCl)、较高(1mol/LNaCl)和高(2mol/LNaCl)浓度下质膜蛋白差异表达的结果.结果表明,高盐浓度下出现2个新蛋白,质谱分析证明其为ABC转运蛋白.这些发现对从细胞膜整体角度了解细菌的抗盐机理具有重要意义.