促性腺激素释放激素(GnRH)结构与功能及其受体的进化发展

促性腺激素释放激素是下丘脑分泌产生的神经激素,对脊椎动物生殖的调控起重要作用.自1971年从猪和羊的脑分离出GnRH以来,到目前GnRH家族至少已有24个类型,其中14种来自脊椎动物,10种来自无脊椎动物.除章鱼GnRH(octo GnRH)外,所有的GnRH肽都由10个氨基酸组成,其分子长度和部份氨基酸序列非常保守.每种脊椎动物都产生多种GnRH类型.无脊椎动物鉴别的10种GnRH类型、9种来自被囊类,1种是由12个氨基酸组成的章鱼GnRH.生理学研究表明GnRH和无脊椎动物的生殖功能有密切联系;此外,GnRH在一些无脊椎动物还起着性外激素的作用,刺激它们自行产卵.自克隆小鼠GnRH受体转录物以来,已在22种动物克隆32个GnRH受体cDNA,其中11种是哺乳动物,11种是其他脊椎动物.无脊椎动物只在果蝇鉴别出一种类GnRH受体.以鱼类为例,氨基酸序列分析表明鱼类的GnRH-R属于G-蛋白偶联受体家族(GPCRs)中视紫红质亚族中的β-亚群,它们由3个主要功能域组成,包括N-端细胞外功能域,7个跨膜功能域和C-端细胞质功能域.系统发生分析表明鱼类的GnRH-R主要有两个类型,即Ⅰ型和Ⅱ型;每个类型还包括2到3个亚型.编码不同的GnRH-R类型的基因,具有不同的基因结构.GnRH-R基因的表达主要集中在生殖系统及相关的器官与组织,但每种鱼类GnRH-R的不同类型与亚型在组织或细胞中的具体分布有所不同.     

卵黄蛋白原的性质及热休克蛋白90对其合成代谢的调控

卵黄蛋白原(VTG)广泛存在于卵生脊椎动物和无脊椎动物的卵母细胞中,为卵母细胞的生长和胚胎的发育提供营养。VTG一般在卵巢、肝胰脏和(或)脂肪等组织中合成。VTGcDNA具有较强的保守性,为7 kB左右。VTG具有单体、二聚体等多种形式,其中二聚体有同源二聚体和异源二聚体两种形式。脊椎动物体内,热休克蛋白90(HSP90)通过和雌激素受体结合间接诱导VTG的合成,近年来的研究报道表明HSP90同样对无脊椎动物体内VTG合成也具有诱导作用,但其作用机制有待进一步研究。     

4种促性腺激素释放激素抗体的制备、鉴定和纯化

用3-马来酰亚胺基苯甲酸琥珀酰亚胺酯(MBS)法将人工合成的4种不同来源的促性腺激素释放激(GnRH)(即章鱼GnRH、海鞘GnRH-Ⅰ、七鳃鳗GnRH-Ⅰ和七鳃鳗GnRH-Ⅲ)分别与匙孔戚血蓝蛋白(KLH)偶联后作为抗原,免疫新西兰大白兔获得GnRH抗体.用间接ELISA方法检测抗血清效价,并用Western blot鉴定其特异性.制备抗原肽亲和纯化柱,纯化多克隆抗体.结果显示,4种多克隆抗体效价高达1∶500 000(体积比),并能和相应的GnRH多肽特异性结合,纯化后的抗体在SDS-PAGE显示为单一条带.通过上述方法,获得4种高效价、高纯度的GnRH抗体,为低等动物GnRH的研究提供了理论依据.     

青岛文昌鱼硫氧还蛋白基因的克隆及同源性分析

通过对文昌鱼神经胚cDNA文库进行测序 ,获得含文昌鱼硫氧还蛋白基因全部读框的cDNA序列 ,并演绎出对应的氨基酸序列 ,对其可编码蛋白进行了分析预测 ,还与多种脊椎动物和无脊椎动物中同种蛋白的同源性进行比较分析 .发现该蛋白具有典型的硫氧还蛋白活性部位 ,与脊椎动物硫氧还蛋白的同源性大于无脊椎动物 ,说明作为脊椎动物和无脊椎动物之间典型的过渡类型 ,文昌鱼在进化上更接近于脊椎动物 .     

拟穴青蟹GnRH-R的免疫识别

促性腺激素释放激素(GnRH)及其受体(GnRH-R)对生殖具有重要的调控作用.迄今无脊椎动物GnRH及GnRH-R的研究尚少.本研究采用兔抗人GnRH-R、兔抗果蝇GnRH-R和兔抗海鞘GnRH-R的抗体,应用免疫印迹和免疫共沉淀技术对拟穴青蟹(Scyllaparamamosain)GnRH-R进行了免疫识别,所得结果如下:1)经免疫印迹检测,拟穴青蟹脑、胸神经团、视神经节和精巢中共有的免疫阳性条带分子质量为45~55 ku.脑和胸神经团中另有一条36 ku条带;在精巢中,兔抗人GnRH-R和兔抗果蝇GnRH-R抗体只有一条28 ku条带,而兔抗海鞘GnRH-R抗体显示有28,36和30 ku的条带.2)利用免疫共沉淀技术,分离出与GnRH-R抗体相结合的两种物质,分子质量分别为38.1和54.0 ku,分别与哺乳动物和非哺乳动物GnRH-R的分子质量接近.该发现提示拟穴青蟹体内存在GnRH-R,为深入了解甲壳动物生殖调控机理提供了理论依据.     

封面故事

素有"活化石"之称的文昌鱼( Amphioxus )是头索动物的总称,隶属脊索动物门(Chordata)头索动物亚门(Cephalochordata),全世界现仅存30余种,为我国二级保护动物.作为无脊椎动物向脊椎动物进化过程中的重要过渡类群,文昌鱼是研究脊椎动物起源的理想模型,具有十分重要的教学和科研价值.生存于复杂...     

蓖麻蚕磷酸酶研究

磷酸酶普遍存在于脊椎动物上。过去对脊椎动物特别是哺乳类磷酸酶的研究,广泛而深入。无脊椎动物磷酸酶的研穷还较少,昆虫方面虽曾作研究,但对酶的性质和活力变化,了解还少。本试验以蓖麻蚕为材料,用生化方法检查了碱性磷酸酶(以下简称AKP)和酸性磷酸酶(以下简称ACP)在蚕体内各组织中的分布和性质以及在变态期中的活力变化。希望对这两种酶的性质和变化,能有比较清楚的了解,以便在对它更深一层的研究中,提供资料和根据,并为蓖麻蚕变态机制的研究提供资料。     

外源激素对南方鲶血清促性腺激素水平的影响

南方鲶l龄幼鱼促性腺激素(GTH)分泌调节研究表明：南方鲶幼鱼GTH的释放受到促性腺激素释放激素(GnRH)和多巴胺(DA)的双重调控．但DA不能抑制基础的GTH释放，而只能抑制GnRH刺激的GTH释放，DA对GTH的释放抑制作用是间接通过GnRH实现的．这与研究过的鲤科鱼类不同．而与研究过的其它鲶形目鱼类相似．注射人绒毛膜促性腺激素(hCG)后南方鲶血清GTH水平上升．hCG促使血液GTH水平升高可能与hCG与非洲鲶促性腺激素抗体具有一定的交叉免疫反应有关．hCG与促黄体释放激素类似物(LHRH-A)结合注射后血清GTH水平也显著高于单独注射hCG或LHRH-A后的血清GTH水平，这种升高可能来源于外源GTH(hCG)和LHRH-A刺激脑垂体分泌的内源GTH。     

哺乳动物卵子发生过程中细胞凋亡的研究进展

细胞凋亡是发育过程中的基本生命现象,是多细胞生物体一种重要的自我稳定机制．除各种体细胞凋亡外,生殖细胞在其发生过程中也有细胞凋亡现象产生．对许多脊椎动物和无脊椎动物的研究发现,有大量生殖细胞在其发育的不同阶段丢失．对近10年来哺乳动物卵子发生过程中细胞凋亡的研究进行了综述,主要描述了哺乳动物卵子发生过程中的细胞凋亡及其调控以及凋亡的意义．     

人促性腺激素释放激素及转运肽的表达及生物活性测定

为研究重组人促性腺激素释放激素(GnRH)表达产物及其生物活性,将人促性腺激素释放激素及转运肽基因重组到表达载体PTYB2上,测序结果表明序列正确,未改变读码框架,然后转入大肠杆菌BL21(DE3)PlysS中进行诱导表达,纯化后的表达产物经Tricine-SDS-PAGE电泳分析,以其抑制肿瘤前列腺癌细胞增生作用验证其生物学活性。