转CMV－CP基因的番茄对CMV的抗性表现及遗传分析

本实验表明转ＣＭＶ－ＣＰ（ＣｕｃｕｍｂｅｒＭｏｓａｉｃＶｉｒｕｓＣｏａｔＰｒｏｔｅｉｎ）基因的番茄对ＣＭＶ的侵染有很强的抗性。外源基因在转基因番茄及其后代中的分离比例为３∶１和１∶１．     

侵染新疆辣椒CMV的外壳蛋白基因的克隆和序列分析

从表现黄化的辣椒病株上获得分离物XJ-P,用1对CMV基因引物进行RT-PCR,扩增得到了774bp的特异性核苷酸片段。将PCR产物克隆到pMD18-T载体中再转化到大肠杆菌TOP10。经限制性内切酶酶切鉴定,重组克隆中含有与PCR产物大小相同的774bp的插入片段。cDNA全序列分析表明,所扩增出的774bpCMV基因,含1个657bp开放阅读框架（ORF）,编码218个氨基酸组成的蛋白,所克隆的基因包含完整的CMVCP基因。所测得的XJ-P分离物其CP基因与CMV亚组Ⅰ、亚组Ⅱ各株系之间的核苷酸同源性分别为90.84%-94.22%和74.37%-76.52%,氨基酸同源性分别为94.04%-98.17%和80.37%-82.19%,因此将该分离物鉴定为黄瓜花叶病毒亚组Ⅰ。     

新疆天山北部地区加工番茄上ToMV和CMV的动态分析

为研究加工番茄上ToMV和CMV消长动态,采用RT-PCR方法对新疆天山北部6个地区采集的加工番茄样品进行了分子检测。结果表明:不同地区的138份加工番茄样品中,石河子、奎屯、乌苏的样品在存在CMV和ToMV,并以CMV为主,ToMV次之;从石河子蔬菜研究所,按不同品种不同时间采集的加工番茄660份样品中,CMV的检出率为21.5%,ToMV的检出率为12.1%,2种病毒的复合检出率为8.9%,病毒的检出率明显低于往年;CMV和ToMV分别在6月25和7月11日左右开始发生,CMV比ToMV早发生10-15 d。2种病毒的发生高峰期都在8月中下旬,复合侵染发病期在7月下旬;品种间2种病毒的消长动态没有明显的差异。     

新疆加工番茄条斑坏死病原黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因的克隆和序列分析

从表现花叶、畸形以及坏死症状的加工番茄病株上获得黄瓜花叶病毒分离物，用1对CMV CP基因引物进行RT-PCR，扩增得到了776bp的特异性核苷酸片段。将PCR产物插入到克隆载体PUCm-T中转化大肠杆菌DHSa。经限制酶酶切鉴定，重组克隆中含有与PCR产物大小相同的776bp的插入片段。cDNA全序列分析表明，重组克隆含1个开放阅读框架（ORF），长度为657nt，编码218个氨基酸组成的蛋白。与国内外报道的CMV株系序列比较，所测得的CMV新疆分离物与CMV亚组Ⅰ的核苷酸同源性高达91．0％-98．9％．而与CMV亚组Ⅱ的核苷酸同源性仅在76．4％-78．2％，所测得的CMV新疆分离物与CMV亚组Ⅰ的氨基酸同源性高达94．2％-98．6％；而与CMV亚组Ⅱ的核苷酸同源性仅在79．9％～83．5％．CMV亚组Ⅰ的株系较CMV亚组Ⅱ株系同源关系更密切，所以CMV新疆分离物应该归属于CMV亚组Ⅰ。     

由TMV54＊10^3蛋白基因构建的转基因番茄及其对TMV的 …

通过土壤农杆菌的介导，将烟草花叶病毒的５４＊１０＾３蛋白ｃＤＮＡ转入番茄植物中，得到了转基因植株，这些植株抗卡那霉素，具有胭脂碱合成酶的活性。     

与SMV抗性基因Rsa连锁的一个共显性SCAR标记

将ＲＡＰＤ标记转换为ＳＣＡＲ标记是更到更为可靠而有有标记的有效方法，应用集群分离体分析（ＢＳＡ）方法，筛选了９００个１００个碱基随机引物，得到了２个与单显性大豆花叶病毒抗性基因Ｒｓａ连锁的显性ＲＡＰＤ标记ＯＰＡＳ－０６１８００和ＯＰＷ－０５６００，将与Ｒｓａ连锁距离较近的ＯＰＷ－０５６６０克隆并测定ＤＮＡ序列，根据这个序列的两端设计了１对特异的寡聚核苷酸引物，用这对引物进行扩增，在抗感亲本间观察到     

由TMV54103蛋白基因构建的转基因番茄及其对TMV的抗性

通过土壤农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)的介导,将烟草花叶病毒(TMV)的54103蛋白cDNA转入番茄植物中,得到了转基因植株.这些植株抗卡那霉素,具有胭脂碱合成酶的活性.DNA的PCR扩增及Northernblot分析表明,54103蛋白基因已整合到番茄基因组上.攻毒实验表明,未转基因的对照组接种病毒2周后即出现花叶,并且随着时间的推移,花叶症状更加典型.而转基因的植物接种病毒后一直到开花结果都未见发病,即没有花叶出现.     

黄瓜花叶病毒两株系的生物学,血清学及外壳蛋白基因序列比较

对从豌豆和赤豆分离的黄瓜花叶病毒Ｐ１和ＲＢ分离的生物学，血清学及外壳蛋白基因序列进行了比较，两分离在豆科的豌豆，蚕豆，豇豆和菜豆上的症状完全不同，Ｐ１为系统症状，而ＲＢ为局部枯斑，因此将Ｐ１和ＲＢ分别定名为豆科系统感染株系和豆科局部坏死株系。     

农杆菌介导的抗病基因对番茄的遗传转化

通过农杆菌介导法将含有几丁质酶基因和β-1,3-葡聚糖酶基因的双价植物表达载体pBLGC转入番茄子叶外植体。经过共培养、卡那霉素筛选和分化再生,获得了23株卡那霉素抗性植株。PCR检测和Southern Blot检测结果表明,有7株呈阳性检测反应。通过病原真菌接种试验证明,有3株转基因植株表现出较强的抗病性反应。实验结果为进一步研究番茄抗病性和培育抗病番茄新品种奠定了重要基础。     

遗传C^＊-子代数和可补闭子模的关系

本文获得了单均个闭子模为可补闭子模的一些新的特征刻画,进而证明了HilbertC*-模E的每个闭子模B可补的充要条件为B=pK(E)p,p为投影元.     

转Bt基因油菜的抗虫试验

利用小菜蛾对转基因油菜的部分植株进行了抗虫试验。实验结果是芥菜型油菜的最高虫试死亡率是７７．７％，其次从高到低依次是５５．５％，５５．５％，４４．４％，４４．４％，３３．３％，１１．１％等。饲喂十天后各处理组活虫体重与对照比，经秩和检验，５个无性系有显著的差异。表明芥菜型转基因油菜有显著的杀虫、抑虫作用。甘兰型油菜的最高虫试死亡率是７０％，其次是４０％，４０％，２０％，２０％，另有４个无性系均是１０％。有９个无性系饲喂十天后活虫体重与对照比有显著的差异。表明甘兰型转化油菜同样也有显著的杀虫、抑虫作用。     

Generation of transgenic wheat resistant to wheat yellow mosaic virus and identification of gene silence induced by virus infection

The plasmid containing the promoter Act1, the coat protein (cp) gene of wheat yellow mosaic virus (WYMV) and the selectable bar gene, was delivered via particle bombardment, directly into immature embryos of a wheat cultivars. PCR and PCR-RFLP were employed to screen the existence of the cp gene in T0 and T1 generations. Seeds from the positive T1 plants were sowed in fields heavily contaminated with WYMV to detect their resistance. In field trial of virus infection, one of the transgenic wheat lines, P8-T2, exhibited highly disease-resistance. Western blot and RT-PCR analysis showed that the expression level of cp gene in the resistant transgenic line was reduced greatly compared to those susceptible to WYMV infection. This provided evidence to presume that the resistance obtained by the transgenic wheat line was stimulated by the mechanism of the virus induced gene silencing.     

茶刺蛾[Darna trima(more)]颗粒体病毒鉴定及核酸与蛋白质特性的初步研究

1985年从四川珙县分离到的茶刺蛾病原物,经感染试验,组织病理研究,包涵体及病毒粒子超微结构研究,核酸类型鉴别等,定名该病原物为茶刺蛾颗粒体病毒.另对该病毒核酸作了限制性内切酶分析和热变性试验,测得该病毒核酸为双链DNA分子,分子量为64.11×10~6d,93.87kb,Tm值为67.3℃,(G+C)含量为32.7％,包涵体蛋白的氨基酸组分中Asp、Glu和Arg含量高,占氨基酸总量的34.12％,His,Cys和Met含量很少。该病毒对茶刺蛾幼虫有很强的感染力,氨基酸在生物防治上有潜在应用前景.     

转基因鱼研究概况

基因转移的研究为鱼类遗传育种开辟了一条新的途径。目前已有十多个国家对十几种鱼类进行了这一研究。本文介绍了基因转移的方法和转基因鱼的研究进展。目前，显微注射和电穿孔仍是有效的转移外源基因的方法。外源基因的构建则向“全鱼基因”方向发展，使用鱼类自身的启动子和结构基因。生长激素基因和抗冻蛋自基因的转移是现阶段研究的重点。本文还提出了转基因鱼研究中必须加以解决的一些问题。