皱叶莴苣_菜心_胡萝卜及其它几种植物原生质体分离方法的初步探索

近年来,原生质体的分离和培养已获得较大的突破,如烟草、胡萝卜、马铃薯、矮牵牛、石刁柏等多种植物已能从原生质体再生成完整的植株,有些作物已从原生质体诱导出愈伤组织,如水稻、玉米等.分离的原生质体,不但能诱导再生成完整植株,还能通过原生质体的融合或摄入外源核酸或细胞器,使具有不同类型遗传特性的原生质体形成杂交细胞,进而打破有性杂交不亲和性的界限,开辟植物遗传育种的新途径.由此可见,原生质体的制备和培养研究是植物体细胞杂交工作中的首要环节.本文对华南栽种的几种作物,初步探索了其原生质体分离的适合方法.     

烟草原生质体活力检测和细胞核染色方法的研究

本试验以烟草叶片和烟草悬浮系制备的原生质体为材料,采用不同染料对原生质体活力和细胞核进行染色效果比较.结果表明,原生质体活力观察宜采用荧光素双醋酸酯（FDA）染色法,染色效果清晰易于观察,四嘧唑蓝（MTT）法则可定量反映原生质体活力;相对于其他细胞核染料,DAPI对不同来源的原生质体细胞核染色效果均较好,能够清晰地对原生质体进行观察和计数.本研究为今后原生质体的检测提供有用的参考.     

烟草K326叶肉原生质体培养再生植株及影响因素的研究

以烟草K326无菌苗为材料,成功地将烟草叶肉原生质体培养出再生植株.并同时就烟草叶肉原生质体的酶解条件、培养方法及培养基中的激素组成等因素对植株再生的影响进行了研究和探索.     

山东白花烟[Nicotiana tabacum(mutant)]叶肉原生质体培养及植株再生

从烟草属的几个种中已成功地用原生质体培养成株,但是对于一些有价值的遗传标记的突变体的原生质体培养至今还很少见有报道.本文主要研究了以我国选育的普通烟草(N.tabacum)的白花突变体叶肉原生质体培养的条件和方法.     

烟草原生质体的分离纯化

研究从烟草叶片分离原生质体的若干影响因素.通过酶解法降解细胞壁释放出原生质体,利用离心和蔗糖漂浮法从粗提取液中纯化出原生质体,并通过血球计数板计数来比较制备的效果.结果表明:酶的种类、质膜稳定剂、渗透压稳定剂、pH及酶解时间是影响原生质体制备的重要因素.纤维素酶含量2%,果胶酶含量1%,2-N-吗啉乙烷磺酸(MES)浓度50mmol/L,Ca2+与甘露醇作为渗透压稳定剂,pH6左右,温度28℃,酶解时间4h时原生质体的分离效果最佳.     

辅酶Q_(10)生产菌株粟酒裂殖酵母原生质体制备和再生研究

研究对辅酶Q10生产菌株粟酒裂殖酵母原生质体制备和再生条件进行了优化,确定了原生质体制备及再生的最佳条件为:茵龄20 h,蜗牛酶浓度2 g/L,酶溶液pH值6.5,酶解温度25℃,酶解时间2 h.通过对粟酒裂殖酵母原生质体制备及再生条件的研究,建立了制备粟酒裂殖酵母原生质体的方法,以期进一步通过原生质体诱变获得辅酶Q10高产菌株.     

脂质体技术在原生质体融合上的初探

本文研究了制备作为生物大分子载体-脂质体的最适条件和方法.发现脂质体在适当温度下.放置数天后其体积明显增大,为制备适于与原生质体融合的脂质体,提供了一个简便易行的方法.并对脂质体与原生质体的融合,进行了初探。     

烟草种间叶肉原生质体融合方法的研究

利用PEG法、高Ca2 高pH法和PEG-高Ca2 高pH法等三种原生质体融合方法,对普通烟草K326和黄花烟草叶肉原生质体进行融合,结果表明,PEG-高Ca2 高pH法的有效融合率最高,融合效果最好.并同时对影响烟草叶肉原生质体融合的其它因素进行了研究和探讨.     

烟草叶肉原生质体分离和纯化研究

实验比较了从烟草K326叶片分离叶肉原生质体的若干影响因素.结果表明,质壁分离的时间、酶液浓度、渗透压及酶解时间是影响原生质体产量和质量的决定性因素.研究结果对建立高效的烟草原生质体再生系统及其遗传操作有参考价值.     

金色链霉菌原生质体的制备

对金色链霉菌原生质体制备的具体条件进行了优化研究 .发酵培养基中采用蔗糖浓度 12 %、甘氨酸浓度 0 .5 %、酶解条件采用菌龄为 48h的菌丝、溶菌酶浓度 6mg/mL、酶解时间为 1h制备原生质体 ,原生质体制备率可高达 6 0 %以上 .     

紫外诱变原生质体选育高产L-乳酸菌株的研究

以干酪乳杆菌ZZ-L为出发菌株,对其原生质体制备条件进行了优化.结果表明,用为0.4 mg/mL的溶菌酶溶液和0.7 mol/L NaCl溶液作为渗稳剂对菌龄为22 h的干酪乳杆菌ZZ-L酶解时间110 min,原生质体的形成率为89.5%,再生率为47.7%,达到最佳水平.并对原生质体进行了紫外诱变育种.通过平板和静置发酵实验,筛选得到8株突变株产量比出发菌株高的突变株,其中菌株ZZ-06的L-乳酸产量达78.6 g/L,比出发菌种提高了20.7%,突变株ZZ06经12次传代,其遗传性状稳定.     

一株内生真菌的原生质体制备及再生过程研究

通过对酶系组成和酶解条件的研究,得出了制备禾本科植物内生真菌Neotyphodiumsp.原生质体的最佳条件:鲜菌丝由10.3%蔗糖溶液预处理,酶系组成为1.5%崩溃酶、1.0%蜗牛酶、1.0%纤维素酶和2.0%溶菌酶,酶解温度32℃,pH 6.8,酶解5 h,原生质体得率达7.3×103个/mg鲜菌丝.另外,液体再生涂布平板法结合钙离子作用可使原生质体再生率达4.72%,为不含钙离子处理组的2.5倍.     

产辅酶Q10的类球红细菌原生质体制备和再生研究

 辅酶Q₁₀(CoQ₁₀)是人类细胞自身产生的内源性辅酶因子,是一类天然抗氧化剂,目前已广泛应用于医药、食品、化妆品等诸多领域.基因组改组技术的核心内容为原生质体融合,为了提高基因组改组的效率,提高辅酶Q₁₀的产量,本研究对产辅酶Q₁₀的类球红细菌原生质体制备及再生条件进行了优化,通过生长曲线、正交试验等确定了原生质体制备及再生的适宜条件：溶菌酶浓度1mg/mL、作用温度37℃、作用时间1h以及再生培养基蔗糖浓度10%.在此条件下,类球红细菌原生质体形成率可达到96.1%,再生率可达到28.8%.这为进一步对该菌的基因组改组研究奠定了基础.     

2种捕食线虫真菌大量原生质体的快速制备与再生技术

 比较了培养基、菌龄、溶壁酶、配制酶液的缓冲溶液和酶解条件等重要因素对2种捕食线虫真菌原生质体形成的影响.采用优化后的制备条件,用较低质量浓度的酶液(5mg/mL纤维素酶,5mg/mL蜗牛酶),在短时间内(5h)蠕虫节丛孢(Arthrobotrys vermicola)原生质体得率可达0.5×10⁷～1.0×10⁷mL^-1,球状单顶孢(Monacrosporium sphaeroides)原生质体得率为0.8×10⁷～1.5×10⁷mL^-1.原生质体的再生除了受到原生质体制备方法的影响,还与再生培养基的营养成分、渗透压稳定剂及其浓度有很大关系.另外还对原生质体的释放和再生进行了详细的观察和描述.     

大豆根瘤内感染细胞原生质体的分离与活力检测

作者在前人工作的基础上，分离了大豆根瘤中感染细胞的原生质体，分离得到的感染细胞原生质体产量较高。经显微观察和几种细胞化学方法检测的结果表明，原生质体纯度高、破损少、具很强的生活力。对于以其为材料的生化研究具有一定的实际应用价值。     

他克莫司产生菌原生质体制备、再生与诱变

对筑波链霉菌的原生质体制备、再生条件进行了研究,建立了筑波链霉菌的原生质体诱变筛选体系.在此基础上,通过原生质体的紫外诱变处理,筛选得到1株高产菌株,与出发菌株相比,该菌株的平均发酶单位提高51.4%.通过原生质体的紫外诱变来筛选他克莫司高产菌株是一种行之有效的方法.     

柱状田头菇原生质体制备条件的实验研究

对影响柱状田头菇菌株原生质体制备的条件进行了研究,这些条件包括不同的培养基、不同的温度、不同的pH、不同的酶解时间、不同的菌龄以及不同的渗透压稳定剂.结果表明:液体摇瓶振荡培养5 d的菌丝,以0.6 mol/L的甘露醇或MgSO4作为渗透压稳定剂,采用2%的真菌溶壁酶,在pH为6、温度为31℃的条件下酶解2 h,柱状田头菇菌株的原生质体制备率最高,可达到2.31×106个/mL.     

用原生质体融合法优化啤酒酵母的凝絮性和发酵性能

以发酵度较高、凝絮性较差的啤酒酵母菌株H38的原生质体为受体,以凝絮性较强、发酵度较低的啤酒酵母菌株N1热灭活的原生质体为供体进行融合.用正交试验法分别优化两亲株的原生质体制备和再生的条件以及原生质体融合的条件.用制霉菌素抗性为遗传标记选择融合子.融合子初筛时以凝絮性为指标,复筛时以发酵度和发酵液中的主要风味物质的含量为指标.对得到的融合子进行了异核体和遗传稳定性的检验,结果得到两株凝絮性以及发酵特性较好的菌株HN31和HN40.     

灭活原生质体融合技术选育苏云金杆菌新菌种——原生质体融合条件的研究

利用双灭活原生质体融合技术获得了苏云金杆菌新菌株。着重对原生质体制备、再生、灭活及融合的实验条件进行了报道。     

L-甲硫氨酸产生菌M0658原生质体形成及其再生条件的研究

以产L-甲硫氨酸芽孢杆菌M0658为出发菌株，考察了各种因素对原生质体形成和再生的影响．在原生质体形成和再生的最佳条件下，M0658原生质体形成率和再生率分别达到96．4％和75．3％，并在光学显微镜下观察了原生质体和原菌的形态差别．