野生一粒小麦着丝粒RCS1相关序列的克隆鉴定

用水稻着丝粒重复序列RCS1为探针 ,与 30 72个克隆进行菌落杂交 ,得到了 32个阳性克隆 ,用RCS1与拟斯卑尔脱山羊草着丝粒重复序列Tcs2 5 0为探针进一步筛选 ,在 32个RCS1相关的阳性克隆中任选 10个克隆进行点杂交 ,分别有 6个和 5个阳性克隆 .为了克隆RCS1相关片段 ,依据RCS1的序列设计了三对引物 ,将引物 3从上述阳性克隆中扩增的一个 5 4 3bp的片段克隆测序 ,发现与水稻RCS1部分片段达到约 83%的同源 ,与大麦的反转座子 (Ty3 gypsy)部分序列同源性达到了 92 % ,与节节麦中着丝粒的整合酶基因部分序列同源性达到了 96 % ,命名为TBRCS1.TBRCS1可能是野生一粒小麦着丝粒区的组成部分     

hIL-2／IFN-1嵌合基因原核表达质粒的构建与表达

为构建hIL 2 /IFN γ 嵌合基因原核表达质粒 ,筛选其高效表达工程菌 ,设计特异性引物 ,PCR扩增目的基因并克隆至pPROEXHTb质粒NcoⅠ /HindⅢ位点 ,经双酶切及序列测定筛选阳性克隆 ,IPTG诱导工程菌后以SDS PAGE电泳鉴定目的蛋白的表达情况 ,并测定其抗原性和生物学活性 ,结果成功构建了工程菌Top10F’[hIL 2 /IFN γ],经优化表达条件后 ,目的蛋白表达量约占菌体总蛋白的 30 % ,分子质量约为 34ku .ELISA和Western blot实验结果表明 ,目的蛋白能特异性结合抗IFN γ 抗体 ,呈阳性反应 ,生物学活性测定显示其IL 2和IFN γ 比活性分别为 1 7× 10 7U/mg与 3 2× 10 6 U/mg .     

克隆含有MT-Ⅰ和MT-Ⅱ基因的染色体DNA片段及其内切酶图谱的鉴定

用小鼠MT-ⅠcDNA作为探针,从129小鼠的基因组库中获得含MT-Ⅰ基因的DNA片段。从6.8×10⁵的噬菌斑中挑出4个阳性噬菌体克隆,分别命名为1-1, 2-1, 1-6和4-3。在这4个克隆中1-1和2-1的阳性信号更强些。应用插入片段的末端引物作为探针进行杂交结合部分酶切的方法,对这2个克隆的插入片段进行了限制性内切酶酶切图谱分析,确定了克隆1-1和2-1的酶切图谱及MT-Ⅰ基因在2个克隆DNA中的位置。并进一步发现和证明了在2个克隆中含有MT-Ⅱ基因。     

hIL-2/IFN-γ嵌合基因原核表达质粒的构建与表达

为构建hIL-2/IFN-γ嵌合基因原核表达质粒,筛选其高效表达工程菌,设计特异性引物,PCR扩增目的基因并克隆至pPROEX HTb质粒Nco Ⅰ/HindⅢ位点,经双酶切及序列测定筛选阳性克隆,IPTG诱导工程菌后以SDS-PAGE电泳鉴定目的蛋白的表达情况,并测定其抗原性和生物学活性,结果成功构建了工程菌Top1O F'[hIL-2/IFN-γ],经优化表达条件后,目的蛋白表达量约占菌体总蛋白的30%,分子质量约为34 ku.ELISA和Western-blot实验结果表明,目的蛋白能特异性结合抗IFN-γ抗体,呈阳性反应,生物学活性测定显示其IL-2和IFN-γ比活性分别为1.7×107U/mg与3.2×106U/mg.     

微波ELISA法在日本血吸虫病流行区现场应用的初步观察

目的观察微波ELISA在日本血吸虫病流行区现场的应用价值。方法用微波ELISA和快速ELISA对江西203例有疫水接触史患者的血清进行检测。结果微波ELISA抗体阳性检出率为12.3%(25/203),快速ELISA为13.3%(27/203)(2χ=0.088,P>0.05),61例杭州市区正常人血清,微波ELISA阳性检出率为3.3%,快速ELISA阳性检出率为1.6%(2χ=0.34,P>0.05),两法无显著性差异。结论微波ELISA与快速ELISA检测日本血吸虫病抗体的敏感性和特异性相近,可应用于血吸虫病的流行病学调查。     

在肽库中筛选β_2糖蛋白I的小肽配体

以β2 GP 为目标分子 ,在噬菌体表面展示肽库中进行亲和性筛选 ,经过 4轮筛选后 ,噬菌体的收率从 2 .4× 10 -5 %提高到 1.1× 10 -3 % .随机挑取噬菌体克隆 ,测定其与 β2 GP 的结合活性 ,选取其中结合力较强的克隆进行 DNA序列测定 ,得到一组保守序列( YFSAF) ,经与人凝血酶受体前体序列 ( 2 71～ 2 78)比较 ,发现它们具有明显的相似性 .经竞争性 ELISA分析实验 ,含有该序列的噬菌体克隆能够抑制β2 GP 与抗磷脂抗体的结合 ,抑制率可达 2 0 %左右     

内蒙古部分地区猪圆环病毒2型(PCV-2)感染的血清学调查

应用酶联免疫吸附实验(ELISA)方法对内蒙古部分地区猪场的182份猪血清进行猪圆环病毒2型(PCV-2)感染的抗体检测,其中包括母猪、种公猪、哺乳仔猪、生长育肥猪、保育猪.平均阳性感染率为39.6%(72/182),母猪阳性感染率为44.9%(22/49),种公猪阳性感染率为73.7%(14/19),生长育肥猪阳性感染率为38.8%(19/49),保育猪阳性感染率为40.5%(17/42),哺乳仔猪全部为阴性(15).实验检测结果证实,内蒙古地区养猪场存在猪圆环病毒II型(PCV-2)感染,而且比较严重.     

藏羚羊(AAC)_n微卫星富集文库构建与引物筛选

基于磁珠富集法,利用生物素标记的寡核苷酸探针(AAC)8从藏羚羊(Tibetan antelope)基因组酶切的300~1000bp片段中筛选微卫星位点,纯化的富集片段连接到pCR@2.1载体和转化到Trans5α感受态细胞.随机挑取180个白斑克隆,PCR检测到条带数大于或等于2的阳性克隆为56个,阳性率为31.1%.对阳性克隆测序,获得43条含微卫星座位的序列,微卫星重复次数在5~20次之间.舍弃不适宜设计引物的微卫星座位,试验设计并合成了20对微卫星引物;以3个样点(青海、新疆、西藏)的24个藏羚羊基因组为模板进行PCR扩增,获得8对可得到稳定扩增产物的微卫星引物,其中4对引物的扩增产物具有多态性,座位分别为AAC050、AAC056、AAC165和AAC477.上述引物可用于藏羚羊及近缘物种的遗传多样性、种群遗传结构等研究.     

烟草尼古丁去甲基酶基因CYP82E4启动子结合蛋白的鉴定与分析

 以尼古丁去甲基酶编码基因（CYP82E4）上游的启动子功能元件作为诱饵,使用酵母单杂交方法从喷施乙烯利叶片的cDNA融合表达文库中钓取与之相互作用的结合蛋白.研究结果表明,诱饵载体pHIS2/pE4和cDNA融合表达载体pGADT7-Rec2共转化到酵母细胞中的效率为1×10⁶.对文库的筛选结果表明,本研究共获得39个阳性克隆,且阳性克隆的插入片段在850～2500bp之间.将获得的39个阳性克隆进行测序,其中发现1个可能参与基因(CYP82E4）表达调控的锌指蛋白转录因子.下一步将对其功能进行分析,为通过分子育种手段培养低含量去甲基尼古丁的烟草提供实验基础.     

绿色荧光蛋白融合人核糖核酸酶抑制因子逆转录病毒载体pLNOX-EGFP-C1-hri的构建及鉴定

构建表达重组绿色荧光蛋白融合人核糖核酸酶抑制因子的逆转录病毒载体pLNCX—EGFP-c1-hri，为探讨人核糖核酸酶抑制因子抗肿瘤作用机制打下基础．用亚克隆法，将目的片段egfp-c1—hri从表达载体pEGFP-C1-hri克隆到pLNCX上，用酶切筛选得到阳性克隆后，用脂质体法将其转染到小鼠黑色素瘤细胞B16中，用800mg／L G418筛选2周后，在荧光显微镜下检测其表达．双酶切鉴定得到pLNCX-EGFP-C1-hri阳性克隆，荧光显微镜显示绿色荧光在B16细胞质中高效表达．成功构建逆转录病毒表达载体pLNCX—EGFP-C1-hri．     

婴幼儿哮喘与肺炎支原体感染的关系

目的 通过分析婴幼儿哮喘发病情况，探讨婴幼儿哮喘与肺炎支原体感染的关系．方法 对75例婴幼儿哮喘患儿检测肺炎支原体抗体并与45例上呼吸道感染患儿及35例正常小儿作对照。结果 婴幼儿哮喘患儿MP-IgM检测阳性率达到25．3％，与对照组有显著差异．结论 婴幼儿哮喘中支原体感染率较高，应引起重视．     

NSTEMI个体化诊疗中同型半胱氨酸、心肌钙蛋白联合检测价值前瞻性研究

目的探讨非ST段抬高型心肌梗死(NSTEMI)个体化诊疗中同型半胱氨酸、心肌钙蛋白联合检测的价值.方法前瞻性选取NSTEMI患者86例为研究组,选取同期体检的86例健康人为对照组,采用酶定量法检测血脂指标,ELISA法检测同型半胱氨酸,乳胶增强免疫比浊法检测心肌钙蛋白水平.结果单一同型半胱氨酸、心肌钙蛋白诊断NSTEMI的灵敏度分别为84.88%,95.35%,特异性分别为90.70%,87.21%;两指标联合检测的灵敏度、特异性升至97.67%,98.84%.ROC曲线分析显示:联合检测AUC明显大于单项检测,差异具有统计学意义(P0.05).研究组治疗后TG,LDL-C、同型半胱氨酸、心肌钙蛋白水平均明显低于治疗前,但仍高于对照组,差异具有统计学意义(P0.05);HDL-C明显高于对照组,但仍低于对照组,差异具有统计学意义(P0.05).同型半胱氨酸含量与TG,LDL-C之间呈明显正向直线相关性(r=0.553、0.377,P=0.000、0.002);同型半胱氨酸含量与HDL-C之间呈明显负相关(r=-0.402,P=0.000).心肌钙蛋白含量与TG,LDL-C之间呈明显正向直线相关性(r=0.637、0.481,P=0.000、0.001);心肌钙蛋白含量与HDL-C之间呈明显负相关(r=-0.402,P=0.000).结论同型半胱氨酸、心肌钙蛋白联合检测可明显提升NSTEMI个体化诊疗的灵敏度和特异性,且与血脂指标存在明显相关性.     

聚硅酸铝絮凝剂处理印染废水的研究

目的 用聚硅酸铝絮凝剂处理印染废水，确定最佳混凝条件。方法 采用不同方法制备出两种聚硅酸铝絮凝剂(1^#和2^#)，用混凝法处理印染废水，对其COD去除率及脱色性能进行对比。结果 1^#絮凝剂最佳混凝条件为投加量3mL，pH=8．0，搅拌速度为150r／min，沉降时间为30min，2^#絮凝剂最佳混凝条件为投加量4mL，pH=8．5，搅拌速度为150r／min，沉降时间为40min。结论 两种絮凝剂制备工艺简单，处理效果较好，同时还可提高废水的可生化性，有利于废水的后续生化处理，两种絮凝剂相比，1^#絮凝剂比2^#絮凝剂效果好。     

一株产普鲁兰酶细菌的分离鉴定及其发酵条件优化

从淀粉加工厂附近土壤中筛选得到一株普鲁兰酶高产菌株,编号为Z-13,其初始酶活达到5.7 U/mL.通过对此菌株的16S rDNA比对,以及生理生化鉴定,鉴定此菌株为克雷伯氏菌(Klebsiella variicola),通过发酵条件优化,确定最佳发酵产酶条件为:玉米淀粉1.5%,蛋白胨2.0%,KH2PO40.05%,MgSO4·7H2O 0.01%.装液量为70 L/250 L,培养基最初pH为6.0,发酵温度30℃,摇床转速200 r/min,发酵时间48 h,优化后菌株产普鲁兰酶的酶活高达67.8 U/mL,是优化前菌株产普鲁兰酶活性的11.89倍.     

基于响应面法的二苯并噻吩生物降解条件的优化

对脱硫菌D4经菌株的形态特征和16SrDNA序列分析,初步鉴定为肠杆菌属(Enterobacter sp.).为提高D4对二苯并噻吩的降解率,在单因素实验的基础上,采用响应面分析法(RSM)对降解条件进行建模优化,筛选出了转速、底物浓度和培养温度3个影响显著的因素.确定了优化后的降解条件:转速175r/min,二苯并噻吩浓度0.1mmol/L,培养温度30℃.优化后的降解率为59.83%,比优化前提高了近10%.     

具有亏函数的整函数与亚纯函数的复合增长性

设f是超越整函数,且T(r, f) = O((logr)βexp((logr)α))(0<α<1,β>0) ,即存在两个正实数K1和K2,使得K1≤(logr)Tβe(xrp,( (fl)ogr)α)≤ K2设g1和g2是超越整函数, g2的级是ρg2(0<ρg2<∞) ,又设ai(z) (i =1,2,…,n, n≤∞)是整函数,且满足T(r, ai(z))=o( T(r, g2))及∑ni =1δ(ai(z) , g2) =1和δ(ai(z) , g2) >0.如果T(r, g1) =o( T(r, g2)) (r→∞)则T(r, f(g1)) =o( T(r, f(g2))) r→∞     

大孔树脂层析法分离纯化地榆多糖工艺

采用大孔树脂层析法研究地榆多糖分离纯化工艺,确定最佳工艺条件:选择HB-1600作为地榆多糖分离纯化的最佳树脂,上样浓度为0.333 mg/m L,上柱流速为1 BV/h,洗脱流速为1 BV/h.按此条件进行地榆多糖分离纯化,可以使地榆多糖的纯度由31.15%提高到76.50%.由此表明:利用大孔树脂层析法纯化地榆多糖可除去蛋白质等大部分杂质,提高多糖的纯度和品质,为地榆多糖的后续深入研究奠定基础.     

常温常压下合成新橙皮苷二氢查尔酮的工艺研究

为了实现以新橙皮苷为原料,在常温常压下催化加氢合成新橙皮苷二氢查尔酮的工业化生产,采用单因素试验对合成反应的关键工艺参数进行了研究。结果表明,当料液比m新橙皮苷∶V(NaOH)=1∶10,ρ(NaOH)=50 g/L,催化剂钯炭与新橙皮苷的质量比为1∶5,转速为500 r/min时,反应8 h后新橙皮苷二氢查尔酮的合成率可达到98%以上。     

中子辐照量指数分布函数式中比例系数的确定

讨论如何确定中子辐照量分布函数ρ(τ)=C_1(1-r)/△τr~(τ/△τ)=C_2/τ_0exp(-τ/τ_0)中的比例系数C_1和C_2的值。结果表明,C_1由归一化条件确定,通常取为1。但是C_2≠C_1,C_2/C_1的值完全由重叠因子r的值确定,即r=1时,C_2/C_1=1;0相似文献   

HRP-PAMAM-MCNT修饰电极的研制及其在油脂中过氧化物测定中的应用

以自组装方式,将多壁碳纳米管、聚酰胺-胺和辣根过氧化物酶修饰到玻碳电极表面,构建了H2O2生物传感器.研究了影响传感器工作性能的因素,确定了最佳分析条件,即pH值6.8的PBS缓冲溶液,工作电位为-0.15 V.在最佳工作条件下,电极对H2O2快速响应(响应时间<1 s),在9×10-7～1×10-4mol/L范围内,电极的电流响应值与H2O2浓度呈现良好的线性关系,线性回归方程为i(μA)=20.76 C(mmol/L)+0.223 0,R=0.999 0,检出限为5.0×10-7mol/L,电极的电流响应灵敏度为0.247 A mol-1.cm-2.电极应用于食用油脂中过氧化物测定,结果与碘量法一致.