火鸡源性成分数字PCR通用定量检测方法的研究

建立了一种特异、灵敏和通用的火鸡源性成分数字PCR(digital Polymerase Chain Reaction,dPCR)定量检测方法,可对肉制品中火鸡源性成分的质量百分比进行准确定量,同时适用于微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)和芯片式数字PCR(chip digital PCR,cdPCR)平台。ddPCR平台对火鸡源性成分拷贝数浓度定性检测限(Limit of Detection,LOD)和定量检测限(Limit of Quantitation,LOQ)分别为1.75和6.43 copies·μL~(-1),cdPCR平台对火鸡源性成分拷贝数浓度LOD和LOQ分别为1.71和3.43 copies·μL~(-1)。对混合鲜肉中火鸡源性成分的质量百分比定量检测限为5%。本方法可对食品中火鸡源性成分进行定量检测。     

男性严重少精子症和无精症不育患者的Y染色体微缺失研究

为探讨男性严重少精子症和无精子症患者的发病原因,建立稳定的少精子、无精子症患者Y染色体微缺失的基因诊断体系,选取位于无精子因子(azoo spermia factor AZF)区10个STR微卫星标记,应用多重聚合酶链反应技术,对95例严重少精子症、无精子症患者进行检测分析.结果在89例患者中,共发现7例Y染色体无精子因子AzF微缺失,缺失率为7.87%(7/89),其中有4例为单个位点的缺失,3例为大片段缺失.研究认为Y染色体AZF区域微缺失是造成男性精子发生障碍的常见病因之一,多重聚合酶链反应技术是检测Y染色体微缺失的合适方法.     

一种基于模糊C均值聚类的稀疏数据缺失值填充方法

缺失数据处理通常基于统计学的方法,在数据预处理阶段对缺失值进行填补,其效率和准确性并不高。因此,提出了一种基于模糊C均值(FCM)聚类的嵌入式填充方法(FCMSI)。此算法通过平均比率法(ARM)对稀疏数据进行初始化填充;采用局部距离策略对FCM进行改进,并对数据进行聚类;将缺失数据作为变量,在每次聚类迭代后的簇内采用协同过滤(CF)的思想对变量值进行替换,直到结果收敛。利用UCI标准数据集进行对比实验,并采用三种不同评价指标衡量,验证了FCMSI方法比传统填充方法性能显著提高。     

莱茵衣藻IFT144蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

为后续研究纤毛相关蛋白IFT144的功能,通过构建重组表达载体获取IFT144抗原蛋白,利用纯化过后带有His标签的IFT144抗原蛋白免疫新西兰白兔,收集4次免疫后的血清,间接ELISA法测定抗血清效价为1∶521 000。经Western blot及免疫荧光技术检测表明,纯化后的抗血清能够与Chlamydomonas reinhardtii 21gr(CC1690)鞭毛IFT144蛋白特异性结合,说明anti-IFT144特异性良好。该抗体效价高,特异性良好,为IFT144蛋白的功能及其相关机制的研究提供了实验材料。     

玉米丝黑穗病苗的快速鉴定

通过提取玉米根和叶片组织的DNA,再选用玉米丝黑穗病菌的特异性引物(GSP)进行PCR扩增检测,结果发现,GSP引物在玉米根组织中丝黑穗病的检测率在80%,叶片中玉米丝孢堆黑粉菌的检测率为15%.表明,可以利用GSP引物通过检测玉米根部组织,快速发现玉米丝黑穗病病苗.     

HPLC-ICPMS联用技术测定玩具中的三价铬和六价铬

采用HPLC和ICPMS联用技术,将玩具中的Cr(Ⅲ)和Cr(Ⅵ)同时进样分离检测。该方法采用不含铬的惰性色谱柱,优化EDTA与Cr(Ⅲ)的络合温度,保持Cr(Ⅲ)和Cr(Ⅵ)稳定的p H值。结果发现,在70℃水浴温度下,p H值为7.0~7.1,Cr(Ⅲ)与EDTA络合更完全,得出线性相关系数大于0.999 5,检出限满足欧盟玩具标准中三类样品检测要求,常规样品的检测回收率在80%~100%,精密度小于5%,验证了该方法的准确性与可行性。     

自杀质粒同源重组技术敲除阴沟肠杆菌budC基因以提升乙偶姻的产率

为了研究阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae,E.cloacae)SDM的2,3-丁二醇脱氢酶(budC)基因对乙偶姻产生的影响，采用自杀质粒同源重组技术敲除该基因。根据E.cloacae SDM的budC基因序列设计引物，构建budC基因敲除质粒，然后将质粒转化进E.cloacae SDM中，根据表型筛选及PCR验证获得budC基因缺失菌株。进行发酵试验后，利用高效液相色谱检测乙偶姻产量。结果表明，目的基因budC敲除成功，与原始菌株相比，基因缺失菌株2,3-丁二醇的产量降低了76.34%,乙偶姻的产量提高了103.78%。budC基因的敲除阻断了乙偶姻进一步分解代谢产生2,3-丁二醇的途径，提高了乙偶姻的产量。该试验获得了E.cloacaeΔbudC突变株，为利用微生物法工业化生产乙偶姻奠定了基础。     

基于IM-SAPSO和SVM的EBPSK检测器设计

参数选择对于支持向量机(support vector machine, SVM)的分类性能很重要,其本质是搜索寻优.该文提出以最小化K-fold交叉验证误差为目标,以改进模拟退火粒子群优化算法(improved simulated annealing particle swarm optimization, IM-SAPSO)为寻优方法的SVM参数优化方法. 利用优化的SVM对扩展的二元相移键控(extended binary phase shift keying, EBPSK)通信系统中经冲击滤波器的“0”和“1”码元进行分类,并和基于SVM、PSO-SVM以及幅度积分判决的EBPSK检测器进行性能对比. 仿真结果表明：基于IMSAPSO和SVM的EBPSK检测器性能明显好于其他3 种检测器.     

响应面设计优化热激活过硫酸盐降解诺氟沙星动力学与产物分析

针对水环境中广泛残留的典型氟喹诺酮抗生素诺氟沙星,采用Box-Behnken的响应面设计方法,考察了反应温度、初始pH值及过硫酸盐(PS)的浓度对热激活过硫酸盐降解诺氟沙星的综合作用,通过构建三因素三水平实验模型,预测并验证了最优化因子条件,对该条件下的降解产物和机理进行了分析。实验发现,所建立的二次多项式模型较为有效,通过模型优化及实验验证表明,最佳反应条件为pH=5.0,过硫酸盐浓度1.04 mmol·L~(-1)及反应温度60℃。液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)分析结果表明,反应过程中生成了9种主要产物,且诺氟沙星在该体系中可能生成了类环丙沙星物质。     

Pericardin蛋白的表达纯化以及多克隆抗体的制备

Pericardin 基因是果蝇心脏发育的标记基因,在果蝇心脏发育过程中起着重要的作用.从果蝇体内提取出总RNA,反转录得到果蝇的cDNA,将其作为模板.通过生物信息学分析,选择Pericardin 基因抗原亲水区,选取特异性高的片段.将PCR片段克隆到原核表达pET28a(+)载体上,转入E.coli后通过IPTG(Isopropyl β-D-thiogal actoside)诱导表达His融合蛋白,蛋白经分离纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体.经Western Blot 检测抗体的效价和特异性.结果显示,获得了Pericardin原核表达重组融合蛋白及高效价的特异性兔抗Pericardin 多克隆抗体,为Pericardin 功能的进一步研究奠定了基础.     

TSGF与AFP对原发性肝癌的诊断特异性、灵敏度分析

分析探讨TSGF与AFP检测在原发性肝癌诊断中的特异性和灵敏度,以及对原发性肝癌的早期诊断价值.采用分光光度法检测TSGF,包括87例原发性肝癌(男性54例、女性33例、平均年龄67岁)、67例继发性肝癌(男性42例、女性25例、平均年龄63岁),同时用化学发光法检测AFP.对照检测179例肝病患者的TSGF、AFP(肝硬化患者74例、慢性乙型肝炎105例).其结果TSGF对原发性肝癌的敏感性(86.2%)高于AFP(71.4%)有显著性差异(P＜0.05);TSGF对继发性肝癌的敏感性(88.1%)高于AFP(35.8%)有显著性差异(P＜0.05);二者联合检测敏感性提高至94.3%.由此证明TSGF对恶性肿瘤的检测兼有早期性和广谱性,对原发性肝癌其灵敏度高于AFP,特异性低于AFP.二者联合检测显著提高对原发性肝癌诊断的特异性和灵敏度,对原发性肝癌早期诊断有重要的参考价值.     

miR-137通过靶向EGFR调控宫颈癌细胞增殖和凋亡的作用机制研究

为研究miR-137在宫颈癌细胞中的表达情况,检测其对细胞增殖和凋亡功能的影响并深入探讨其作用机制,采用实时荧光定量PCR检测正常宫颈永生化鳞状细胞及不同宫颈癌细胞中miR-137表达情况;向宫颈癌Ca-Ski细胞中转染miR-137模拟物(miR-137mimics)使其过表达,用CCK8试剂盒检测细胞增殖,用流式技术检测细胞凋亡;并通过软件预测、荧光素酶报告基因及免疫印迹实验验证miR-137靶基因的表达情况。结果发现,miR-137在宫颈癌细胞中表达降低,过表达miR-137能抑制Ca-Ski细胞增殖活力(P0.01)并提高细胞凋亡水平。深入研究其机制发现表皮生成因子受体(EGFR)为其直接作用靶点,过表达EGFR后可逆转miR-137对宫颈癌细胞生物学功能的影响(P0.01)。因此,miR-137可以通过靶向调控EGFR,从而抑制宫颈癌细胞增殖并促进细胞凋亡。     

一种基于MissFroest的并行插补算法

本研究针对大数据分析预处理的缺失数据值填补问题及解决方案进行了探讨,提出了一种用于缺失值填充的插补算法.该算法在MissForest算法基础上融合K折交叉验证的思想,通过在不同缺失率下的插补试验与分析表明:该算法的填补误差小于传统的CNN插补算法,运行时间复杂度优于基础的MissForest算法,具有较强的泛化能力.     

心脏病诊断系统中缺失数据填充方法

缺失值数据是目前研究数据分析的一个重要领域,随着智能医疗的迅速发展,如何充分利用海量数据挖掘出其中的重要信息,对隐藏的疾病做出预测并进行提早的干预治疗显得尤为重要.但在实际预测中,经常面对不完备数据集,从心脏病数据集出发,基于随机森林算法加以贝叶斯优化算法动态调参,提出心脏病缺失值补足算法.以准确率ACC作为算法的评判依据,通过精度和时间2个方面进行验证,4种算法对比实验结果表明,提出的算法具有更准确的填补效果.     

基于适配体的荧光生物传感器对Hg2+的检测技术研究

工业迅速发展所带来的重金属污染，是目前威胁人类健康的重要环境问题之一。Hg²⁺是一种毒性强且污染较为普遍的重金属离子，较低浓度Hg²⁺就会对人体造成很大危害。基于核酸适配体错配结合Hg²⁺的原理，以特异性双链核酸染料SYBR GreenⅠ为荧光指示探针，构建了新型的无标记核酸适配体荧光生物传感器，建立了一种高灵敏度、快速检测Hg²⁺的方法，实现了Hg²⁺高效检测。在优化条件下，传感器对Hg²⁺的检测线性范围为10 nmol/L～1μmol/L,相关系数(r²)为0.99,检出限为1 nmol/L。5种干扰离子(Ca²⁺、Fe²⁺、Cu²⁺、Ni²⁺、Ag⁺)的存在不影响Hg²⁺检测，表明该方法对Hg²⁺检测具有较好的特异性。在自来水样的Hg²⁺加标检测实验中，平...     

aFGF特异性结合噬菌体的筛选与鉴定

利用噬菌体7肽库筛选出aFGF特异性结合噬菌体并鉴定其活性.经过四轮淘选,ELISA检测结合活性,然后挑取单克隆测序.竞争抑制试验验证阳性克隆与aFGF的结合活性.MTT法检测阳性噬菌体对aFGF诱导的Balb/c3T3细胞增殖的影响,一系列实验结果显示,筛选出的P8号阳性噬菌体与aFGF结合的特异性很高,对aFGF诱导的Balb/c3T3细胞增殖具有抑制作用.通过本实验,获得了具有与aFGF高度结合的噬菌体短肽,可为抗肿瘤新药提供重要基础.     

基于Rhapsody的功能逻辑建模在蒸发循环制冷系统设计中的应用

基于模型的系统工程(MBSE)方法是通过标准系统建模语言构建产品的需求模型、功能模型、架构模型,实现需求、功能到物理架构的分解和分配,通过模型执行实现对需求和逻辑的"确认"和"验证"。在设计的早期阶段,发现需求的缺失和偏差并及时修正,有效降低产品研制成本,缩短研制周期。本文通过实例介绍基于Rhapsody的功能逻辑建模的方法和过程,以期为相关设计人员开展产品的功能逻辑分析提供参考和指导。     

基于Rhapsody的功能逻辑建模在蒸发循环制冷系统设计中的应用

基于模型的系统工程(MBSE)方法是通过标准系统建模语言构建产品的需求模型、功能模型、架构模型,实现需求、功能到物理架构的分解和分配,通过模型执行实现对需求和逻辑的"确认"和"验证"。在设计的早期阶段,发现需求的缺失和偏差并及时修正,有效降低产品研制成本,缩短研制周期。本文通过实例介绍基于Rhapsody的功能逻辑建模的方法和过程,以期为相关设计人员开展产品的功能逻辑分析提供参考和指导。     

工程项目绿色施工多目标集成管理研究

除了传统的进度、成本、质量三大目标,绿色施工将环境保护、施工安全纳入工程施工中的主要控制目标中,形成更复杂、更全面的多目标管理体系.通过应用集成理论,建立工程项目绿色施工多目标集成管理框架模型进行定性分析,应用多属性效用函数及目标优化理论,建立多目标均衡优化数学模型进行定量分析,并采用微粒群算法(PSO)对模型进行求解,求得最满意的解为各目标达到整体近似最优.本文采用多模型的研究模式,为工程项目绿色化实施提供理论依据,最后通过应用实例对模型可行性进行验证和应用.     

温敏印迹光子晶体凝胶传感器的制备及对链霉素的识别响应性能

为探究温敏印迹光子晶体凝胶传感器对链霉素的识别响应性能,利用分子印迹技术加工修饰光子晶体,使其具有光电效应和特异性识别吸附性能,并将其应用于链霉素的检测。制备单分散聚苯乙烯(Polystyrene, PS)微球及PS蛋白石模板,将蛋白石模板负载于羟基修饰的载玻片上并填充含有链霉素的前驱液进行分子印迹,移除结构模版及印迹分子,得到对链霉素具有特异性识别功能的分子印迹光子晶体凝胶(Molecularly imprinted photonic crystal gel, MIPH)传感芯片。通过扫描电子显微镜和热重分析仪对材料进行表征,并开展了特异性识别性能、重复使用性能、吸附性能和光谱实验。结果表明,印记分子成功蚀刻到芯片上,传感器对链霉素具有较好的特异性。经过5次吸附-洗脱循环,传感器仍然对链霉素具有良好的吸附能力。随着链霉素吸附量的增加,其透射波长发生偏移,当链霉素浓度达到20 mmol·L^-1时,透射波长从419 nm红移至460 nm。根据其吸附进程与波长偏移值变化做线性拟合方程,得出其检出限为5×10^-4 mol·L^-1