EL-4荷瘤鼠单链噬菌体抗体库的构建

目的:构建一个EL-4荷瘤鼠的单链噬菌体抗体库,为筛选高特异性和高亲和力的单链抗体做准备.方法:于C57小鼠腋区接种EL-4细胞,待肿瘤长大后,从脾细胞中提取总RNA,RT-PCR技术扩增小鼠抗体重、轻链可变区基因(VH、VL),用Linker奖VH和VL基因连成单链抗体可变区片段(scFv).双酶切后(Not Ⅰ、Sfi Ⅰ)与预备好的pCANTAB5E噬粒载体连接,转化入感受态TG1,构建EL-4荷瘤鼠的单链噬茵体抗体库.随机抽取转化后的20个克隆,用以检测外源DNA的转入情况.结果:PCR扩增出的VH约有340bp和VL约有320bp,scFv的长度约有750bp.转化后的TG1约有1.67×107个茵落,随机挑取20个克隆,双酶切显示五分之一的茵落转化了外源DNA片段,有效库容为3.34×106.结论:成功构建了EL-4荷瘤鼠的单链噬茵体抗体库.     

运动员骨骼肌组织提取总RNA的新方法

为了寻求一种从微量组织中高效又简便的提取骨骼肌总RNA方法,实验对常用RNA提取方法Trizol法进行了改进和简化,提取的总RNA质量进行了电泳和光密度值检测.实验结果显示,运动员微量骨骼肌组织提取的总 RNA 28S、18S和5S三条带清晰可见, RT-PCR 扩增的β-actin 参照基因条带具有特异性,说明该方法从微量组织可有效、简便地提取骨骼肌总 RNA,提取总 RNA 的得率和纯度均符合分子生物学进一步实验要求,为运动相关基因的分子生物学调控机制等研究提供了一定的方法参考.     

萝卜叶片总RNA提取方法比较

获得高质量的RNA是进行RNA相关分子生物学实验和研究的前提.尽管目前已建立了多种真核生物总RNA的提取方法,但这些方法是否适用于提取萝卜(Raphanus sativus L.Var.radiculus Pers.)的总RNA还不清楚.本研究分别采用Trizol法、改进的异硫氰酸胍法和改进的SDS--酸酚法提取萝卜叶片总RNA,并通过分析所得RNA的电泳图谱、得率和纯度来判断这三种方法的优劣, 确定了提取满身红萝卜总RNA的最适方法.实验结果表明,Trizol法和改进SDS酸酚法提取的总RNA中蛋白质和DNA污染比较严重,不能用于下一步实验;而改进的异硫氰酸胍法提取的总RNA得率高、纯度高、完整性好、少降解,完全适合用于Northern blotting,小RNA分离、cDNA文库的构建等分子生物学实验.     

反义RNA

1981年美国NIH的Tomizawa在细茵中发现了一种新的RNA分子,即反义RNA。反义RNA是指其核苷酸序列可以与其靶RNA(主要是mRNA)互补杂交产生双链RNA,影响靶RNA的正常加工修饰、翻译等过程,从而调控基因的表达的一类RNA分子。后来的研究均证明在原核生物中普遍存在这种RNA。1984年,Izant和Weitraub将这种RNA定义为反义RNA。随后,1986年Williams发现,在真核生物细胞中也存在自然的反义RNA。不同的     

山药总RNA不同提取方法的比较研究

为提取高质量的山药总RNA,以铁棍山药茎段为材料,采用Trizol法、RNAiso for Polysacchariderich Plant Tissue法、改良CTAB法和试剂盒法提取总RNA,利用琼脂糖凝胶电泳分析所提取RNA的完整性,并用超微量分光光度计分析RNA的纯度.结果显示采用Trizol法难以提RNA,RNAiso for Polysacchariderich Plant Tissue法提取效果不理想,存在DNA和蛋白质污染,而用改良CTAB法和试剂盒法提取到的总RNA纯度高、完整性好,其中,改良CTAB法较试剂盒法价格便宜,但提取过程较烦琐.因此,应根据实验需要选择CTAB法或试剂盒法提取铁棍山药总RNA.本结果对其他品种山药或富含多糖多酚类物质植物的RNA的提取也具有一定借鉴意义.     

一种水稻总RNA提取的简易方法

应用高效Trizol试剂,对水稻根、叶、花材料进行了总RNA的提取.采用摸索后的优化程序,可在不用液氮的室温下,1 h完成总RNA的提取.电泳结果可见清晰的条带,表明RNA的完整性较好;紫外测定结果表明了RNA的纯度较高,所得检测结果说明所得总RNA产品可作进一步的实验之用.     

两种球形棕囊藻细胞总RNA提取方法的比较

不同植物细胞RNA提取的适宜方法各不相同.本实验分析、比较了QIAGEN试剂盒法和西曲溴铵(CTAB)法用于赤潮藻细胞总RNA提取的情况.结果显示,两种方法均可获得高质量的总RNA.比较而言,CTAB法比QIAGEN试剂盒更可取,适合藻细胞RNA的大量提取.     

适用于转录组测序的大蒜花器官总RNA的提取方法

为获得高质量的大蒜花器官RNA以用于后续花发育相关基因的研究,以大蒜中多糖多酚含量高的鳞茎为初步实验材料,采用2种试剂盒方法、CTAB法、Trizol法以及改进酸性异硫氰酸胍法提取总RNA,并对提取效果进行比较,筛选出能够得到高质量RNA的天根试剂盒方法和改进酸性异硫氰酸胍法.将改进酸性异硫氰酸胍法进一步用于提取大蒜花器官总RNA,相较于试剂盒方法,获得了质量更好、收率更高的RNA.对提取的大蒜花器官RNA进行完全测序,得到的clean reads占总raw reads比例大于98%,能够满足转录组测序分析的要求.     

紫藤种子总RNA提取方法研究

分离提取高质量的RNA是基因表达、调控和基因工程等研究的基础。植物组织中含有大量RNA酶、多糖和酚类等杂质,影响了高质量总RNA的获得。应用改良的CTAB法提取紫藤种子中的总RNA,添加了PVP、β-巯基乙醇和水饱和酚氯仿后能有效地除去大部分杂质,获得高质量的紫藤种子总RNA。3'RACE实验结果表明,以此总RNA反转录获得的cDNA为模板,可成功扩增紫藤种子中的防御素基因。     

白术根茎的总RNA提取方法的比较

探讨提取白术根茎总RNA的最优方案。以新鲜白术的根茎为实验材料,采用三种方法提取其根茎总RNA。用紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳检测RNA样品完整性,用RT-PCR方法验证RNA质量。用多糖多酚植物总RNA提取试剂盒的方法,获得了完整性最好、质量最高的总RNA样品。提取白术根茎总RNA的三种方法中,多糖多酚植物总RNA提取试剂盒的方法最理想。