HIV-GAG质粒DNA疫苗的纯化工艺

采用中空纤维超滤浓缩、 离子交换介质和复合模式凝胶过滤介质纯化获得了HIV-GAG药用级质粒DNA疫苗, 并对菌体培养、 菌体裂解、 粗提分离和柱层析等环节进行研究. 实验结果表明, 产品基本符合药用级的质粒DNA要求.     

两种质粒DNA纯化方法的比较

质粒是染色体外能够进行自主复制的遗传单位,在基因构建中常被用作基因的载体,实验中经常使用碱裂解法提取质粒.本实验对应用经典纯化方法和离心柱吸附纯化方法提取的质粒进行了对比,结果表明,离心柱吸附纯化方法提取质粒更快捷、更高效,是质粒提取的最理想方法.     

质粒DNA纯化及内毒素去除策略研究进展

质粒DNA(plasmid DNA)是最常用的基因工程和基因疫苗载体,近年来在生物医学和环境科学等领域得到了广泛应用。质粒DNA纯化是分子生物学研究中常用的实验技术,纳米磁性粒子等固相载体技术和色谱技术优化了DNA纯化方法。对大肠杆菌质粒DNA常用纯化方法、内毒素去除策略以及自动化纯化设备进行综述,为质粒DNA的应用研究提供支持。     

一种快速简单的质粒DNA纯化方法

文中介绍一种快速获取高纯度质粒ＤＮＡ的方法，这种称之为万能微量制备（ＴｈｃＭａｇｉｃＭｉｎｉｐｒｅｐｓ）ＤＮＡ纯化系统在质粒ＤＮＡ纯化过程中不用有机溶剂抽提和乙醇沉淀，而用一万能微柱吸附质粒ＤＮＡ，吸附上的质粒ＤＮＡ可用于水或ＴＥ缓冲液洗脱出来，且不含任何盐或主同分子杂质，纯化的质普ＤＮＡ不需进一步处理即可直接进行ＤＮＡ顺序测定和限制性内切酶消化，整个过程可在１５ｍｉｎ内完成，不失为一种简单可靠的     

质粒DNA快速提取法

介绍了一种质粒ＤＮＡ的快速提取方法，所分离出的ＤＮＡ纯度较好，全部操作均在一只Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管中进行，含质粒ＤＮＡ的上清液可直接点样走琼脂糖凝胶电泳。此法操作简便，整个提取过程只需３０ｍｉｎ便可完成。     

质粒DNA计算模型的研究

介绍了一种以非线性的闭环质粒为基础的DNA计算模型,被用于计算的质粒都有一个独特的DNA插入片断,所有的片断保持在相应的限制性内切位点,用剪切与粘贴操作完成DNA计算过程。目的是简化DNA计算过程及其模型。另外,还介绍了质粒DNA计算模型的基本思想和对应的数学描写,该模型的计算以及应用还需要以后继续研究。     

质粒DNA提取方法的研究进展

目前质粒DNA的提取方法有很多,本文综合阐述及比较了几种方法的利弊,试验证明异丙醇提取法所得质粒DNA浓度和纯度都很高,简便、快速,重复性好,能同时处理大量试样,所得DNA有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要,适合大多数实验室使用。     

Box-Behnken Design响应面法优化银杏叶总黄酮柱层析纯化工艺

为得到质量分数较高的银杏叶总黄酮提取物,在单因素试验基础上,以上样质量浓度、乙醇体积分数、洗脱液接收体积和洗脱流速为考察因素,以银杏叶总黄酮质量分数、收率为考察指标,采用BBD(Box-Behnken Design)响应面法对银杏叶总黄酮柱层析纯化工艺进行优化。得到最佳工艺为上样质量浓度3.1 mg/mL,乙醇体积分数71%,洗脱液接收体积2 BV(BV为装柱体积)及洗脱流速2 BV/h。在最佳工艺条件下,完成三批验证实验,银杏叶总黄酮平均质量分数可达到35.77%,收率为93.30%,银杏总内酯质量分数达到《中国药典》标准。利用BBD响应面法优化银杏叶总黄酮柱层析纯化工艺是科学、合理、可行的,可为工业化大生产提供参考。     

反胶团法萃取质粒DNA

采用新的TOMAC(甲基三辛基氯化铵)/2-乙基己醇/异辛烷反胶团体系,对该反胶团萃取质粒pUT649进行了研究.考察了表面活性剂浓度、离子浓度等对质粒DNA萃取的影响.当采用1.0%(volume)2-乙基己醇/异辛烷为有机相,TOMAC浓度为40 mmol.L-1,水相初始DNA浓度为25μg.mL-1时,质粒pUT649的萃取率可达90%以上.离子浓度对萃取过程有重要影响,反萃取时通过调节水相中的离子浓度,可以实现DNA和RNA的分离.研究结果表明,TOMAC/2-乙基己醇/异辛烷反胶团体系适合于核酸的萃取和纯化.     

CdCl2对质粒DNA的作用

镉是一种致癌物质，其致癌作用与Cd^2 有着直接或间接的作用．用一定浓度的CdCl2液处理质粒pUC119和pCPP9，通过琼脂糖凝胶电泳分析，研究了镉对质粒DNA结构的影响．结果表明，CdCl2溶液2．5μg／mL作用12h或20μg／mL作用1h后，能导致质粒pCPP9的DNA损伤；浓度40μg／mL以上的CdCl2作用12h后，引起质粒pUC119的DNA损伤；且随着CdCl2浓度增大和作用时间的延长，对质粒DNA的损伤作用增强．     

碱裂解提取质粒DNA的改进方法

实验室中常用的质粒提取方法是碱裂解法.一般碱裂解法提取质粒相对耗时长,而且需要冰浴,条件较为严格,本文尝试对碱裂解法进行改进,即在控制菌体量的前提下连续加入溶液Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,进行质粒提取,简化了操作步骤,缩短了实验时间(由150 min左右缩短为110 min以内),质粒收率和质量不变.     

质粒DNA计算模型的计算体系

首先从具体实例入手抽象和归纳出质粒DNA计算模型的概念,并对质粒DNA计算模型计算体系的2个基本要素———计算物质和计算手段进行研究,由此形成了质粒DNA计算模型完备的计算体系;然后针对质粒DNA计算模型计算体系的应用,分析和解决了经常出现的关键问题.讨论了初始质粒DNA重新合成的重要性,并给出了重新合成的方法;接着对计算体系的2个基本实验(酶切和酶连实验)的成功率问题进行了分析,并提出了解决的方案;最后对检测实验进行了分析,提出了检测多种DNA序列的检测方法.对这些问题的分析和解决有利于质粒DNA计算模型理论的完善和应用的拓广.     

用柱层析技术纯化孕血清中的早孕因子（EPF）

采用ＤＥＡＥ，Ｓ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦ·Ｆ离子交换层析，ＣｏｎＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ，ＨｅｐａｒｉｎＳｅｇｈａｒｏｓｅ亲和层析，从１１０例妊娠３～８周早孕妇女混合静脉血清中提取，纯化早孕因子（ＥＰＦ）。以玖瑰花结抑制试验（Ｅａ－ＲＩＴ）检测孕血清及各阶段提取物的ＥＰＦ活性，盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其纯度．结果表明提取，纯化的ＥＰＦ达电泳纯，在国内尚未见报导。     

毛竹DNA的纯化和检定

<正> 要从事DNA分子的转化、重组及表达等方面的研究,首先须获得一定纯度和天然态的DNA分子,而且要求纯化DNA的方法简易有效。 六十年代Marmur等人介绍了一个制备具有转化活性的DNA方法,但步骤多,操作烦。1969年Bernardi报道了用羟基磷灰石柱层析方法分离纯化了小牛胸腺DNA,获得了天然态的DNA分子。 本试验用高氯酸钠法从毛竹笋中制得DNA粗制品,通过羟基磷灰石(HA)柱层析分离、纯化,获得了纯净的双链DNA。是一种简易而有效的纯化DNA的方法。 材料和方法 1.毛竹(Phyllostachys pubescens)取25厘米高的竹笋,去箨,切成小块,用SSC洗涤两次,贮存在冰箱的冰隔层内,预冷24小时。 2.羟基磷灰石 按照上海生物化学研究所代谢调节控制组(1976)所述方法自行合成。     

碱裂解法提取质粒DNA方法的改进

对碱裂解法提取质粒DNA的方法进行了一些改进 ,在室温下裂解菌体和变性DNA ;用NH4 Ac和LiCl同步沉淀除去样品中的蛋白质和RNA ,降低了对超螺旋质粒的剪切作用 ,得到高质量的质粒DNA。     

大肠杆菌质粒DNA不同提取方法的比较

实验采用简化的碱法少量提取法、简便快速的煮沸法及试剂盒法提取质粒 p CB30 2 -3.并通过一对特异引物对质粒 DNA进行 PCR(聚合酶链式反应 )扩增 ,分别对各种方法所提取的质粒 DNA及其 PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳分析 ,结果表明碱法少量提取法和试剂盒法所提取的质粒 DNA纯度和产量高 ,且重复性好 ,达到了分子生物学实验要求 .其中简化的碱法少量提取法具有结果稳定和经济的特点 ,非常适合大多数实验室使用 .     

农杆菌质粒DNA高效提取方法研究

以EHA105菌株为实验材料,通过优化质粒扩增条件、加大菌液使用量、改良提取纯化过程中所用试剂等,简化了操作流程,给出了一种高效提取农杆菌中质粒DNA的方法。结果表明,选择LB＋KANA为培养基、抗生素质量浓度为50 mg/L,细菌培养至OD600=0.634～0.714时,以5 mL/次用量取菌液裂解;以改进方法提取试剂,得率与常规方法相当。该方法在满足PCR检测条件的前提下既减少了酚、氯仿等有毒试剂的用量,又省时、经济、方便,为植物转基因工程中目的物DNA的检测提供了技术支持。     

图顶点着色问题的质粒DNA计算

图的着色问题是著名的NP问题,有着重要的实际意义。比如通讯系统的频道分配、考试排考场问题等方面有直接应用。图的着色问题采用DNA计算方法很多,有表面DNA计算,粘贴DNA计算。本文提出质粒DNA计算,首先把顶点着色问题转化为求最大独立集问题,然后给出了图顶点着色问题的质粒DNA分子生物实验,利用限制性内切酶的特性切割有边相连的顶点,得到最大独立集,在试验中特别引入了一个备用试管,最后给出一个具体的实例。实例给出具体的着色方案,证明了该质粒DNA算法有效并且是可行的。     

质粒pcDNA3.1-IL-24的制备和纯化

探索基因治疗用质粒pcDNA3.1-IL-24的规模化制备和纯化工艺。碱性裂解提取质粒后,以异丙醇和LiCl沉淀法去除大分子RNA。然后,使用DEAE Sepharose FF离子交换层析去除染色体DNA、小分子RNA、蛋白质等杂质。经本工艺纯化的质粒pcDNA3.1-IL-24浓度为727μg/mL,纯度为1.87,蛋白质含量为0.007μg/mL质粒DNA,未检测到RNA、抗生素残留。此工艺避免使用动物源性酶类及有毒试剂,有效去除质粒DNA制备过程中产生的杂质,可实现药剂水平质粒DNA的规模制备。     

高效回收琼脂糖凝胶中质粒DNA的方法

多年来,在基因工程操作中所采用的几种从琼脂糖凝胶中回收DNA的方法不同程度地存在着各种问题。从琼脂糖凝胶中分离和提取DNA的方法具有简便快捷、成本低和效率高等优点,可直接用于各种分子克隆操作,是一种切实可行的方法。