凡纳滨对虾多酚氧化酶的纯化及性质分析

通过硫酸铵盐析、DEAE-Cellulose离子交换、Phenyl-Sepharose疏水层析、Hi-Trap Capto-Q强阴离子交换层析等方法,从凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)虾头中分离纯化出一种多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO),十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electropheresis,SDS-PAGE)显示其分子质量约为210 ku。肽质量指纹图谱的比对结果表明,纯化得到的PPO中含有187个氨基酸残基的14个片段与NCBI数据库中酚氧化酶原(gi|147724160)序列相似性为100%。该酶的最适温度和最适pH值分别为40℃和6.0,且在温度0～50℃及pH=5.0～8.0可保持相对稳定的活性。圆二色谱分析结果表明,对虾PPO的二级结构主要为反平行结构及无规则卷曲。抗坏血酸、茶多酚和特丁基对苯二酚(tertiary butylhydroquinone,TBHQ)等具有生物活性羟基的抑制剂对其均有较好的抑制效果。     

凡纳滨对虾病虾体内SOD和PPO同工酶表型的变化

运用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法,显示了健康和患病毒性疾病的凡纳滨对虾(Litopenae-us vannamei)其复眼、肝脏、心脏、鳃和肌肉等5种组织的SOD和PPO同工酶酶谱,其中健康对虾体内的SOD和PPO在各组织中表达的同工酶酶带少,但组织特异性明显.SOD和PPO分别在心脏和肝脏中表达最强,各有3条酶带;复眼和肌肉中最弱,均只有1条酶带.感染病毒后,这两种同工酶的酶谱发生了明显变化,尤其在肝脏和心脏组织中变化显著,表现为病虾心脏中SOD和肝脏中PPO酶带缺失和染色变浅,即酶活性明显下降,而肝脏SOD和心脏中PPO酶活性却明显增强.     

矿物元素平衡对鸡肉粉替代凡纳滨对虾饲料鱼粉的影响

为探究低盐度养殖条件下鸡肉粉的矿物元素组成对鸡肉粉替代凡纳滨对虾饲料中的鱼粉的效果,设计了3组等氮等脂的饲料,其中对照组(FM组)含鱼粉30%（质量分数）;实验组以鸡肉粉完全替代鱼粉,一实验组（PBM组）不添加矿物元素,另一实验组（PBMF组）补充矿物元素使其达到FM组水平.对初始重（0.30±0.01）g的凡纳滨对虾幼虾进行8周的摄食生长实验.实验结果显示:PBMF组的对虾增重率显著高于PBM组,但显著低于FM组(P<0.05);PBM组的对虾血清碱性磷酸酶(AKP)、鳃丝总-ATP酶和Na+/K+-ATP酶活力显著高于FM和PBMF组(P<0.05);但PBM组对虾的血清Na和Mn含量显著低于FM和PBMF组(P<0.05);PBMF组对虾全体的Mn含量显著高于FM和PBM组(P<0.05).可见,在盐度2~3下,鸡肉粉的矿物元素组成不平衡是影响其替代凡纳滨对虾饲料中的鱼粉的效果的关键因素之一.     

竹叶抗氧化物对凡纳滨对虾保鲜效果的影响

研究不同浓度竹叶抗氧化物(Antioxidant of Bamboo Leaves,AOB)对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)保鲜效果的影响。分别用4℃的蒸馏水(对照组)、0.05%、0.10%和0.15%的AOB浸渍处理凡纳滨对虾10 min,取出沥干后包装,贮藏于(4±1)℃的恒温库中,每天对其感官品质进行评价并测定挥发性盐基氮、p H值和菌落总数的变化情况。结果表明,在(4±1)℃的冷藏条件下,AOB能延缓对虾挥发性盐基氮、p H值及菌落总数的上升,有效延迟了对虾的腐败变质,其中0.10%AOB溶液的处理效果最好。     

凡纳滨对虾精子超微结构及遗传失活的研究

本文研究使凡纳滨对虾精子遗传失活的方法,用波长365nm和照射距离10.5cm的不同剂量紫外线照射凡纳滨对虾精液稀释液或精荚,然后进行人工授精。结果表明,新鲜精液稀释液在0~20s照射范围内,受精作用都仍能正常发生,与卵子人工体外授精仍可获得5%的平均受精率,但胚胎在孵化前死亡;新鲜精荚在5~10min照射范围内,采用精液移植授精法可获得20%的平均受精率和3%的平均幼体孵化率。精子在2×105个/cm2的条件下,精液稀释液厚度2cm,经30s以上紫外线照射后,精子染色体可完全失活,而精荚经20min以上紫外照射后,精子染色体亦可完全失活。应用透射电镜对正常和不同时间紫外辐射的凡纳滨对虾精子形态和超微结构进行观察,结果发现,凡纳滨对虾正常精子系单一棘突类型,主要由前端棘突、中间帽状体和后主体部构成,精子无尾部,不主动运动。紫外辐射凡纳滨对虾新鲜精液稀释液10~20s的精子形态和超微结构与正常活精子无明显变化。紫外辐射30s的精子表现为顶体和棘突形态正常,而染色质散乱,后主体部壁变薄;紫外辐射60s时精子就出现明显的受损状态,主要表现为细胞核变形,核区缩小,核膜受损部分破裂,染色质散乱甚至溢出,后主体部或前部胞壁加厚、膜表面皱缩、底部凹陷,顶体部局部受损,细胞质带囊泡化,双层膜肿胀,膜间腔增大。     

凡纳滨对虾养殖早期水体中氮磷营养盐变化规律研究

为探讨凡纳滨对虾养殖早期水体中主要营养盐含量及其变化,测定了对虾池水体中的氨氮、硝酸盐、亚硝酸和磷酸盐。结果显示,氨氮浓度变化范围：0．3-0．02mg／L,硝酸盐浓度变化范围：0．29-8．68mg／L,亚硝酸盐浓度变化范围：0．15-8．50mg/L,磷酸盐浓度变化范围：004-1．10mg／L。在养殖早期水体中,氨氮浓度呈波动变化,硝酸盐、亚硝酸盐和磷酸盐含量相对稳定。     

微生态制剂对凡纳滨对虾生长及水质的影响

以初始体质量4.5±0.1 g的凡纳滨对虾为研究对象,探讨了几种微生态制剂添加到饲料中和直接添加到养殖水体中对凡纳滨对虾生长和水质的影响。使用微生态制剂是乳酸芽孢菌、地衣芽孢杆菌:枯草芽孢杆菌(1:1)和复合菌虾乐333,添加饲料的剂量均为1‰,添加水体的量0.5 g/200 L。实验设7个处理,每个处理设3个重复,每个重复放养25尾对虾,实验周期是4周,温度为(28±5)℃,盐度5‰。试验开始后,每隔3 d测定水体的pH、氨氮和亚硝酸盐。实验结果表明:微生态制剂添加到饲料中或直接添加到水中都能促进对虾的生长,降低饵料系数(P<0.05),而添加到水中的实验组比添加到饲料中的实验组生长效果更显著。实验组的pH、氨氮和亚硝酸盐比对照组都有降低的趋势,其中pH和亚硝酸盐在试验后期有显著性差异(P<0.05),而各添加组间差异不显著(P>0.05)。     

凡纳滨对虾养殖水体中浮游生物群落的多样性分析研究

为探讨凡纳滨对虾养殖水体中浮游生物群落的演替,对虾池水体中浮游生物群落组成和其多样性进行了分析.研究结果表明:在凡纳滨对虾养殖水体中,浮游植物的优势种主要由小球藻(Chlorella sp.)、波吉卵囊藻(Oocystis borgei)、小环藻(Cyclostella sp.)、新月拟菱形藻(N.closterium sp.)、角毛藻(C.mueeleri sp)、平裂藻(Merismopedia sp).和席藻(Phormidium sp)组成.浮游植物多样性指数变化范围为0.08～1.89,平均值为1.36±0.25,优势度指数变化范围为0.20～0.98,平均值为0.51±0.26.浮游动物的优势种为许水蚤(Schmackeria.sp)和臂尾轮虫(Brachionus.sp),其中,水体中许水蚤无节幼体的数量呈规律性波动,波动周期为15d.     

不同玉米淀粉水平对凡纳滨对虾肝胰腺脂肪代谢的影响

 采用8周的生长实验研究了以玉米淀粉为糖源的不同淀粉水平(w为10%、15%、20%、25%、30%、35%）对初始体质量为（0.96±0.02）g凡纳滨对虾的生长、体营养成分组成、肝胰脏显微结构和肝胰腺脂肪合成酶的影响。实验饲料中w(蛋白质)为38%;w(脂肪)＝5%。实验在室内循环水族箱内进行,实验用水为天然咸淡水（盐度：6‰～14‰）,6组饲料每组设3个重复,每箱30尾虾,饱食量投喂。实验结果表明:w(淀粉)＝15%实验组对虾的增质量率、SGR最高,分别为45362％和3.06,与w(淀粉)＝10%和w(淀粉)＝20%组无显著性差异,但明显高于其他各组;w〖WTBZ〗(淀粉)＝10%组的对虾成活率最高（96.67％）,w(淀粉)＝25％组最低（66.67％）;w(淀粉)在25%～35%时,对虾的增质量率、成活率、SGR显著低于w(淀粉)为10％、15％和20％组（P<0.05）。w(淀粉)＝20％组的体蛋白含量最低（72.24％）,w(淀粉)＝30％组最高（75.27％）,其余各组没有显著性差异;高淀粉组体脂肪含量相对较高。从凡纳滨对虾的肝胰脏组织学切片观察到,饲料w(淀粉)为10％～35％的范围内,肝胰脏脂肪无异常积累。肝胰腺中脂肪合成酶活性很低,苹果酸脱氢酶活性随饲料淀粉含量的增加而升高。总之,在饲料蛋白含量为w＝38%左右时,凡纳滨对虾饲料适宜的淀粉含量(w)为10％～20%。     

铜绿微囊藻对凡纳滨对虾低盐度养殖的危害研究

通过池塘陆基围隔实验,研究了铜绿微囊藻对凡纳滨对虾低盐度养殖的危害。实验结果铜绿微囊藻在2‰~6‰低盐度养殖水体中可大量爆发,形成单一优势种,种群增长快、持续时间长,种群密度和优势度高达5.39×107个.L-1和88.9%。铜绿微囊藻毒性表现为时间和密度双重效应。对虾养殖期,微囊藻作为优势种持续时间30 d以上,平均密度达到1.0×107个.L-1或优势度达到35%,均致养殖对虾发病,并随密度升高和持续时间延长,对虾病情加重;平均密度低于4.0×106个.L-1或优势度低于15%,对虾养殖正常,平均密度低于2.0×106个.L-1或优势度低于6%对虾养殖安全。微囊藻为主要优势种,对虾养殖成活率平均为16.6%,体长和体质量平均生长速度为1.21 mm/d和0.15 g/d,对虾养殖成活率和生长速度显著降低。     

凡纳对虾penaeidin2抗菌肽基因的克隆与性质研究

抗菌肽分子是无脊椎动物先天免疫系统中,直接发挥免疫效应的分子;它在对抗病原细菌侵染的过程中发挥着重要的功能.本文以凡纳对虾对虾素抗菌肽基因penaeidin2作为研究对象,系统地进行了基因克隆、氨基酸序列比对、分子进化关系以及分子结构的初步预测等研究.研究结果显示:Lva-pen 2基因是一个免疫反应相关基因,它在凡纳对虾的先天免疫系统中发挥着重要功能.     

凡纳对虾PEN-2的表达纯化与抗体制备

对虾素分子在甲壳类动物体液免疫系统中发挥着重要的免疫防御与清除作用,它是一种重要的抗菌肽分子.以1种新发现的凡纳对虾PEN-2对虾素基因作为研究对象,进行了重组表达载体的构建、蛋白诱导表达与纯化以及多克隆抗体的制备等研究工作,这些研究结果为下一步Lv-PEN-2分子功能研究提供重要基础.     

几种理化因子对急性感染WSSV凡纳滨对虾的影响

根据正交试验表L16(45),对海水盐度、NH4+-N质量浓度、NO2--N质量浓度、pH及感染WSSV的量各4个水平进行研究,发现这些因素对凡纳滨对虾存活时间的影响大小顺序为:pHWSSVNO2--NNH4+-N盐度。其中,pH、WSSV、NO2--N、NH4+-N与凡纳滨对虾的平均存活时间的相关性达到极显著水平(P0.01),而盐度与凡纳滨对虾的平均存活时间的相关性没有达到显著水平(P0.05)。     

饥饿胁迫下凡纳滨对虾昼夜活动行为的变化

采用视频记录分析的方法,研究了饥饿胁迫下凡纳滨对虾活动行为的变化.结果表明:饥饿初期(1~4d),凡纳滨对虾白昼活动频率和游走速度与对照组无显著性差异;饥饿中期(5~8 d),白昼活动频率显著高于对照组水平;饥饿后期(9~12 d),昼夜活动频率和游走速度极显著低于对照组.在饥饿胁迫下,凡纳滨对虾采取降低活动水平的行为对策,减少能量消耗,将有限能量用于维持基本生命活动.     

凡纳对虾体内ACP、AKP酶的细胞化学定位

运用电镜酶细胞化学技术对凡纳对虾体内肝脏(L)、肌肉(M)、心脏(H)和复眼(E)等四种组织的酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)进行了细胞化学定位,并与感染病毒的凡纳对虾四种组织中ACP、AKP的细胞化学定位进行比较.结果显示,在健康的对虾体内,ACP依次出现在各组织中的溶酶体、细胞核、细胞内膜、线粒体、内质网以及肝脏组织中的部分脂滴周围及微绒毛中AKP依次出现在各组织中的细胞膜、细胞核、溶酶体、内质网以及肝脏组织中的脂滴周围及微绒毛中.感染病毒后,对虾体内组织细胞出现了明显的病理变化,各组织细胞内均出现大量的髓样小体;各组织中ACP,AKP的超微细胞化学定位也发生了明显的规律性变化,表现为相应细胞器内ACP,AKP酶活性均减弱或消失,并在多数组织的细胞质中检测到ACP,AKP酶活性的高电子密度颗粒,且大量出现的髓样小体均呈阳性反应.     

亚硫酸盐在对虾保鲜加工中的残留变化

以南美白对虾为研究对象,研究常用的亚硫酸盐(亚硫酸钠和亚硫酸氢钠)不同浓度和不同浸泡时间处理对虾后,对虾在保藏过程中体内SO2含量的变化。结果表明:在同样浓度和处理条件下,亚硫酸氢钠比亚硫酸钠具有较好的防止对虾黑变的效果,对虾在冻藏过程中,体内SO2残留量逐渐消减。在对虾保鲜加工中,亚硫酸氢钠的最佳使用条件为:带头虾亚硫酸氢钠15 g/L,浸泡3 min;去头虾亚硫酸氢钠12.5 g/L,浸泡3min,该条件下能有效抑制对虾的黑变,虾体中SO2的残留量低于国标限量(0.1 m g/g)。     

PEG-磷酸盐双水相体系纯化Cu.Zn-SOD研究

利用聚乙二醇（PEG）与磷酸盐的合理配比组成的双水相体系能够使猪血超氧化物歧化酶（SOD）粗酶得到进一步纯化,研究结果表明,6％PEG-6000与24％磷酸盐（pH7,0）组成的双水相体系一次成相萃取,使猪血SOD粗酶的纯度提高3-5倍,活力回收70～95％,而且发现SOD在PEG／磷酸盐双水相体系中的分配行为有一定规律,使用双水相处理粗酶能有效、快速、大量使样品达到一定纯度．