离子对深海适冷菌Pseudoalteromonas sp. SM9913胞外蛋白酶分泌的影响

以海水产酶发酵培养基为对照，研究了多种离子对P. sp. SM9913 胞外蛋白酶分泌的影响. 结果表明，淡水培养基添加NaCl浓度越高，胞外蛋白酶的酶活也越高. K+、Ca2+、磷酸盐的协同作用促进胞外蛋白酶的分泌. Mg2+能够明显抑制胞外蛋白酶的分泌. Fe3＋对胞外蛋白酶分泌影响不明显.Sr2+、F-、B-这3种离子单独作用时都能促进胞外蛋白酶的分泌；但是这3种离子协同作用劣于单独作用. 实验浓度下上述多种离子协同作用可明显促进胞外蛋白酶的分泌. 该研究为深海适冷菌P. sp. SM9913 的淡水化培养和进一步研究胞外蛋白酶的分泌机制奠定了基础.     

食用菌菌丝对菌材分解利用的研究进展

食用菌通过分泌的菌丝胞外酶来分解菌材，从而获得营养.综述了胞外酶的主要分类和关键酶的基本作用，以及菌材的分类和营养成分，并研究了胞外酶和菌材之间的相互作用关系.系统介绍了主要的胞外酶系统，包括纤维素酶系、半纤维素酶系、木质素降解酶系、淀粉酶系、果胶酶系和蛋白酶系，并对关键酶进行了分析.基于胞外酶传统生理生化研究，现代组学技术已被应用于胞外酶分解菌材的多个环节，关键基因的表达调控也逐渐得到了明确.食用菌培养料配方逐渐多样化，有利于提升食用菌菌种和培养料之间的协调利用效果.对培养料配方的优化和胞外酶人工生产调控提出了展望，以期促进食用菌产业的发展.     

馆藏纸质文物上微生物的分离、鉴定及酶学性质研究——以贵州地区为例

为揭示馆藏纸质文物生物退化的关键因子,以贵州地区馆藏纸质文物为例,采用无损采样方法结合分子生物学技术对侵染微生物的种属进行了鉴定,以纤维素酶酶活、木聚糖酶酶活和蛋白酶酶活表征了微生物的降解活性。结果表明：实验共实际鉴定得到16种细菌和8种真菌,它们主要属于芽孢杆菌属、曲霉属、青霉属和双聚散霉属;馆藏环境条件和当地的气候条件是导致微生物病害的关键因素;细菌和真菌对纸质文物都有降解活性,但以曲霉属和青霉属的真菌为主,其中曲霉属的纤维素酶酶活和木聚糖酶酶活分别可达18.70和38.02 U/mL。实验结果可为后续馆藏纸质文物预防性保护工作提供依据。     

类产碱假单胞菌杀虫蛋白激光拉曼光谱的研究

类产碱假单胞菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｐｓｅｕｄｏａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）是刘世贵等人从自然罹病死亡的蝗虫体内分离到的一株病原菌［１］,为一种新发现的昆虫病原微生物．该菌代谢产生并分泌到胞外一种杀虫蛋白,对蝗虫具有较强的致死作用,是细菌灭蝗剂的主要成...     

温度对大黄鱼源变形假单胞菌胞外产物酶活力的影响

为了研究大黄鱼源变形假单胞菌胞外产物的致病性,在内脏白点病的高发温度（18 ℃）培养大黄鱼的病原菌——变形假单胞菌,利用玻璃纸覆盖平板技术制备其胞外产物,测定不同温度（低温不致病温度12 ℃、高发致病温度18 ℃和高温不致病温度28 ℃）下其胞外产物的酶活力.结果显示:变形假单胞菌胞外产物的淀粉酶、丝氨酸蛋白酶类、天冬氨酸蛋白酶类、类胃蛋白酶、类糜蛋白酶、卵磷脂酶、酸性磷酸酯酶和碱性磷酸酯酶的活性受温度影响比较大,28 ℃条件下酶活力显著（P＜0.05）高于12 ℃或者18 ℃时的酶活力;半胱氨酸蛋白酶类、氨肽酶的活性和溶血活性受温度影响没有显著性变化（P＞0.05）.实验结果表明,虽然变形假单胞菌胞外产物是其致病因素之一,但大黄鱼内脏白点病在特定温度（16~20 ℃）下高发并非是由于胞外产物在该温度下的活性较高.该结果增进了对大黄鱼内脏白点病发病机理的认识.     

蜡蚧轮枝菌侵染黑刺粉虱体表过程的显微观察

采用扫描电镜研究了蜡蚧轮枝菌侵染黑刺粉虱成虫的过程。结果表明：接种蜡蚧轮枝菌孢子12h后,附着在虫体上的分生孢子萌发形成芽管,24h后,在复眼、腹部气孔、足的基节和翅的基部等部位菌丝侵入黑刺粉虱体内,接种72h后虫体被厚厚的菌丝层覆盖。分生孢子可以直接以芽管侵入表皮,也可以产生附着胞再侵入。分生孢子在黑刺粉虱体表萌发形成芽管,芽管顶端可形成附着胞,附着胞再形成侵入钉穿透寄主体壁。寄主体表结构影响形成附着胞的形状及穿透体壁时芽管长度。穿刺点处的小孔及附着胞周围发现粘状分泌物,为蜡蚧轮枝菌在入侵黑刺粉虱过程中穿透体壁时对寄主表皮产生降解作用的酶。     

纸质文物上的“寄居者”

为鉴定南京博物院馆藏书画覆背纸上的微生物种类,利用分子生物学方法,对污斑处进行分离及鉴定。为了验证实验获得的纯培养微生物是否具有降解和破坏纸张的能力,对分离微生物的纤维素酶酶活、木聚糖酶酶活及蛋白酶酶活进行了选择性测定。一共获得11株细菌和5株真菌,结果证实为9种细菌及2种真菌,它们主要属于芽孢杆菌属、链格孢属和木霉属。酶活测试显示,细菌中,泛菌属的纤维素酶酶活最高,短杆菌属的蛋白酶酶活最高,分别可达到1.76和6.57 U/mL。真菌的蛋白酶酶活普遍很低,木霉属的纤维素酶酶活和木聚糖酶酶活最高,分别是17.12和29.01 U/mL。实验结果有助于针对纸质文物的微生物侵蚀现象制定相关的保护措施。     

广东省乐昌市虫霉目真菌调查

虫霉目真菌包含有重要的昆虫病原真菌,在害虫生物防治中具有很高的开发利用价值,倍受关注.对广东省乐昌市人工和自然生态系统中虫霉目真菌历经3年的调查,记录了虫霉目真菌3属3种,分别为蝗噬虫霉、蝇虫霉和飞虱虫疠霉.     

磁场对地衣芽孢杆菌的影响

对地衣芽抱杆菌（Ｂａｃｉｔｌｕｓｌｉｈｅｎｆｏｒｍｉｓ）以不同强度的旋转磁场处理，结果酶活性和菌落形态等均有所变化。酶活普遍提高，菌落变小，呈放射状．尤其０．２Ｔ处理３ｈ者引起变异最显著，其胞外碱性蛋白酶的酶活提高率最大者达１７％，文中对磁场作用的有关问题提出了初步分析和讨论。     

碱性蛋白酶的异源表达及其在制备CPP中的应用

碱性蛋白酶是现代工业酶制剂中最重要的酶类之一,在人类日常生活中扮演着非常重要的角色.本研究以嗜碱芽胞杆菌(B.alcalophilus)TCCC11006基因组为模板,从中扩增出碱性蛋白酶基因apr,并构建重组表达质粒p HYapr,将重组质粒电转入蛋白酶基因缺失的地衣芽胞杆菌(B.licheniformis)H115中,实现了碱性蛋白酶的分泌表达.重组菌在LB培养基中最高酶活力达到3,199,U/m L,是出发菌株酶活力的1.82倍,发酵周期缩短了8,h.然后通过单因素和正交实验对重组碱性蛋白酶水解酪蛋白的工艺参数进行优化,确定了最佳水解温度、p H和酶添加量分别为50,℃、9.5和4,000,U/g.在最佳水解条件下,通过钡-乙醇沉淀的方法制备生物活性肽——酪蛋白磷酸肽(CPP),其得率和氮磷物质的量比分别为14.8%,和8.47.这为碱性蛋白酶在功能性食品制造方面的应用奠定了良好的基础.     

南京市几种平菇和香菇酯酶同工酶的初步研究

平菇和香菇均为担子菌食用真菌。平菇为伞菌目侧耳科侧耳属真菌,香菇为伞菌目侧耳科香菇属真菌。担子菌分类习惯以形态差别为依据,方法简便,但由于生态条件影响所产生的差别会给分类工作增加很多困难。六十年代后,由于电泳分离同工酶技术的发展,国外真菌学者曾先后用酚氧化酶(漆酶和酪氨酸酶)同工酶酶谱进行真菌鉴定并作为化学分类的依据。另外,在研究糙皮側耳时,对一些單核(体)和单核(体)的异核体以及异核体杂交子实体产生的单核菌株进行比较,发现碱性条件下电泳时杂交体酶谱和亲本酶谱不同。我国黑龙江省应用微生物所方自若等也曾用等电聚焦法对几种食用菌胞外溙酶同工酶进行研究,获得了侧耳属七个种的酶谱。     

青霉纤维素酶基因的表达调控与重组表达研究进展

青霉属菌株可以分泌完整的纤维素酶系,尤其高产β-葡萄糖苷酶(β-glucosidase,BGL,EC 3.2.1.21),弥补了工业菌株里氏木霉(Trichoderma reesei)胞外β?葡萄糖苷酶活性低的不足,加上青霉菌株生长速度快等优点,使其产纤维素酶受到越来越多的关注。为了解决以木质纤维素为原料工业生产燃料乙醇所需纤维素酶量大、成本高等难题,深入研究青霉属纤维素酶基因的表达调控和重组表达非常重要。本文就青霉属纤维素酶基因资源、纤维素酶合成调控网络以及纤维素酶基因的重组表达等进行综述与展望。     

金色链霉菌代谢与胞外多糖降解消耗耦联效应的研究

以淀粉为主要碳源的金色链霉菌发酵过程中 ,研究了细胞分泌的淀粉酶的淀粉降解产物 .二糖是淀粉酶的主要产物 .发酵过程中 ,胞外淀粉酶的活性同细胞的生长耦合 ,在对数生长期 ,酶活和细胞的笔生长速率达到最大 ,分别为 0 .12g·L- 1 ·min- 1 、2 .4g·L- 1 ·h- 1 .胞外多糖浓度对淀粉酶活力、酶降解产物金霉素合成速度为明显影响     

海洋贝类肠道弧菌21Z1碱性蛋白酶的分离纯化及酶学性质

由威海海域贝类肠道中分离出一株产胞外碱性蛋白酶的细菌,经16S rDNA分析鉴定为弧菌21Z1。该菌发酵液上清经60%饱和度的硫酸铵溶液沉淀、透析、Sephadex-G100分子筛层析等步骤,获得电泳纯的21Z1碱性蛋白酶,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示其分子量约为31 kDa。酶学性质测定结果显示:该酶最适反应温度为40℃,在20~40℃稳定;最适反应pH为8.5,在pH=8.5~11.0间稳定;Na~+、K~+、Ca~(2+)、Mn~(2+)对该酶具有激活作用,Fe~(2+)、Fe~(2+)、Zn~(2+)及Cu~(2+)则不同程度地抑制其活性;该酶的耐盐性检测结果显示,在Na~+浓度为4 mol/L时,残余酶活在62%以上,表明21Z1碱性蛋白酶具有较强的耐盐性。     

一株降解小麦秸秆丝状真菌的筛选、鉴定及初步研究

利用涂布平板法从腐烂秸秆及枯枝烂叶中分离出71株丝状真菌.通过比较菌株秸秆粉降解产物对小麦生长的促进作用,获得一株可有效降解秸秆并促进小麦生长的菌株2-5-2.对其进行形态分析和rRNA序列鉴定,结果显示,该菌株为木霉属真菌.该菌株可产生纤维素酶、木质素酶、半纤维素酶、几丁质酶、蛋白酶、壳聚糖酶.平板对峙培养显示,该菌对多种病原真菌的生长有抑制或阻碍作用.固态发酵培养时,纤维素酶、半纤维素酶酶活在第11d达到最高;第28d,纤维素降解率达到21.13%,半纤维素降解率达到28.53%.     

镰孢霉疫苗表达系统的构建及优化

镰孢霉(Fusarium venenatum)是一种具有高效表达和分泌蛋白质潜力的丝状真菌.本文探索以镰孢霉为表达宿主建立真菌蛋白表达系统.以含有Hyg抗性的pFGL59为出发质粒,分别利用真菌宿主里常用的强启动子PgpdA、PglaA和Ptrypsin构建整合型蛋白表达载体,并通过表达猪流行性腹泻病毒的中和表位蛋白COE,检测该系统的表达效率.通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对工程菌株的胞外蛋白进行分析检测,结果显示在启动子Ptrypsin的驱动下,COE蛋白在镰孢霉工程菌中高效表达并分泌到胞外,而含有启动子PgpdA和PglaA的工程菌胞外蛋白中未检测到COE蛋白.根据镰孢霉密码子偏好性对coe基因的密码子进行优化后,COE蛋白在镰孢霉中的表达量得到显著提高.该疫苗表达系统的构建为疫苗蛋白在真菌宿主里的异源表达提供了新的方向.     

热休克对粗糙脉孢菌核酸内外切酶的影响

将快速生长的粗糙脉孢菌Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａｃｒａｓｓａ培养液从３０℃升温至４５℃，热休克处理２小时，７５％有活性的核酸内外切酶ｅｎｄｏ－ｅｘｏｎｕｌｅａｓｅ（此酶为ＤＮＡ修复酶）从核及液泡中释放到胞质并以无活性的形式储存起来：用放线菌酮处理，不能阻止此酶的释放，但能使灭活降低；致使胞质的酶活性提高５－１５倍。热休克菌体核酸内外切酶的灭活是由于某种抑制物质的作用，后者来自酶前体的自身降解。作者推测由热休克诱导了一种蛋白酶，此酶使核酸内外切酶前体水解为抑制物质。     

产碱性冷适蛋白酶菌株Chryseobacterium sp.vv8的鉴定及粗酶性质

为鉴定金黄杆菌属(Chryseobacterium)菌株vv8及分析其胞外蛋白酶的酶学特性,首先,通过分子及生理生化特性对菌株vv8进行鉴定;然后,采用明胶平板筛选法和Lowry法对菌株vv8进行产酶筛选和蛋白酶活性测定;最后,研究pH值、温度、金属离子和抑制剂对该蛋白酶活性的影响.研究结果表明:菌株vv8的16S rDNA与比目鱼黄杆菌(C.scophthalmum)具有98.24%的序列相似性,属于Chryseobacterium属;菌株vv8的最适生长条件是温度为22℃,NaCl质量浓度为0 mg·mL~(-1),pH值为6.0;菌株vv8的胞外蛋白酶在pH值为5.0～10.0,温度为0～90℃范围内均具有酶活性,其最适酶活温度和pH值分别为40℃,8.5;在最适条件下,蛋白酶具有较高的稳定性,在冻干过程中,添加葡萄糖具有明显的酶活保护作用;Fe~(3+),Fe~(2+),Cu~(2+)等金属离子及乙二胺四乙酸(EDTA)对酶活性有明显的抑制作用,该酶对洗衣液和尿素具有较好的耐受性.     

碱性蛋白酶对小麦麸皮中蛋白质的酶解作用

采用碱性蛋白酶降解小麦麸皮中的蛋白质成为可溶性组分,通过水洗过滤分离将其除去.以小麦麸皮中蛋白质残留量为考察指标,对酶解过程中的影响因素进行单因素和正交设计分析,优化工艺参数组合.通过比较分析后得到结论,采用碱性蛋白酶酶解分离小麦麸皮中蛋白质,酶解后小麦麸皮中蛋白质残留量仅为0.62%.     

绿色木霉pH响应因子编码基因TvPacC的功能分析及应用

真菌所处环境的pH值一直处于不断变化之中,这对真菌的生长发育具有重要的影响。真菌为了适应不断变化的环境,进化出了pH响应信号途径,即Pal途径,而PacC是该途径中的关键调节因子。本文针对绿色木霉TvPacC基因的功能进行了分析研究。通过融合PCR结合原生质体转化技术构建了绿色木霉Tv-1511-△TvPacC缺失突变菌株,研究了TvPacC基因在木霉适应碱性环境和木霉菌株产碱性蛋白酶中的功能和应用。结果表明,相比较于野生型,Tv-1511-△TvPacC菌株具有更好的碱性环境的适应能力,而且敲除了TvPacC基因显著增强了木霉菌株产碱性蛋白酶的能力,提高了发酵液中碱性蛋白酶的产量和活性。因此,TvPacC在提高绿色木霉碱性环境的适应能力和木霉菌株产碱性蛋白酶能力等方面起着重要作用。