邻苯二甲酸二乙基己酯对小鼠不同脏器DNA的损伤作用

应用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)研究了邻苯二甲酸二异辛酯[Di-(2-ethylhexyl)phthalate,DEHP]对小鼠不同脏器(睾丸、胃、脑和肝)DNA的损伤作用.结果表明,DEHP可引起小鼠DNA的损伤,并且随着DEHP浓度的逐渐增高,DNA的损伤也随之加重,它们之间具有明确的剂量效应关系.在睾丸的细胞,胃内膜的细胞,脑的细胞中,当DEHP的浓度达到375 mg/kg时,则可造成DNA的极显著断裂(P＜0.01).而在肝的细胞中,当DEHP的浓度达到125 mg/kg时,就可造成DNA的极显著断裂(P＜0.01).当DEHP的浓度达到500 mg/kg时,除了脑的细胞外,DNA的断裂均不显著,可能已形成交联.     

苯酚和邻甲酚的遗传毒理学研究

采用小鼠骨髓细胞微核试验及人外周血淋巴细胞、小鼠睾丸生殖细胞、鲫鱼红细胞慧星试验,研究了苯酚和邻甲酚的致突变效应及对生殖细胞的DNA损伤作用。实验结果表明,苯酚和邻甲酚能诱发小鼠骨髓细胞微核率的增加,并在一定剂量范围内呈剂量效应关系。苯酚和邻甲酚对人淋巴细胞、小鼠睾丸生殖细胞及鲫鱼红细胞的DNA均有不同程度的损伤作用。3种彗星试验的结果均表明,阴性对照组仅有2．5％－7．5％的细胞出现DNA迁移,且迁移距离很小,损伤程度为2．5－8．0（专用单位）,而阳性对照组表现出99．5％－100％的细胞拖尾率,并且细胞严重损伤,其损伤程度为248－361．8（专用单位）,这证明了实验系统的可靠性。试验结果还表明,苯酚和邻甲酚对3种细胞DNA损伤作用随剂量的增加而增加,并呈现剂量效应关系。小鼠睾丸细胞及鲫鱼红细胞与人外周血淋巴细胞相比,NDA损伤程度更为严重,揭示上述两种细胞对苯酚和邻甲酚的损害作用更为敏感。     

双酚A对小鼠睾丸细胞DNA损伤的研究

目的探讨双酚A的生殖遗传毒性.方法应用单细胞凝胶电泳试验(SCGE)研究了双酚A对离体小鼠睾丸细胞的DNA损伤作用.结果除10-10mol/L组与对照组比较无显著性差别外,各染毒组拖尾率均明显高于对照组(P<0.05).随着双酚A染毒浓度的增加,小鼠睾丸细胞DNA损伤程度也逐渐增加(P<0.05),在10-5mol/L和10-6mol/L组均出现了Ⅳ级损伤.结论在一定浓度下,双酚A可引起离体小鼠睾丸细胞的DNA损伤,可能对雄性小鼠具有一定的生殖毒性.     

TDI对小鼠睾丸组织能量代谢的影响

研究甲苯二异氰酸酯(TDI)对雄性小鼠生殖细胞能量代谢的影响,探讨甲苯二异氰酸酯对雄性小鼠生殖损伤的机制.用分光光度法检测睾丸组织匀浆中琥珀酸脱氢酶(SDH)、乳酸脱氢酶(LDH)和ATPase的活性.TDI染毒两周后SDH、LDH及ATPase的活性均受到了抑制.在本实验染毒时间和染毒剂量范围内,TDI不仅干扰睾丸组织的有氧代谢及无氧代谢的供能过程,还干扰细胞对能量的利用.提示能量代谢障碍可能是TDI对雄性生殖细胞毒作用的机理之一.     

双酚A对SPF雄性SD大鼠生殖器官的病理损伤作用及其对Bcl-2和Bax表达的影响

20只22日龄SPF雄性SD大鼠,随机分为对照组和试验组(双酚A染毒组),每组10只.试验组给按5 mg/kg体重双酚A(BPA)灌胃,对照组按等体积植物油灌胃,1次/d.灌胃28 d后,称量大鼠体重;无痛处死后剖检,取睾丸,称量睾丸湿重并计算睾丸系数;采用石蜡切片技术,观察睾丸、附睾的组织病理学变化;采用免疫组织化学方法检测睾丸和附睾中Bcl-2及Bax蛋白表达量的变化.结果显示:BPA染毒组睾丸重量和睾丸系数明显低于对照组(P＜0.01);组织病理学观察可见,BPA染毒组睾丸曲细精管内生精细胞和支持细胞明显变性坏死,附睾中精细胞退变、液化.免疫组织化学观察发现BPA染毒组睾丸和附睾中Bax蛋白表达量明显高于对照组(P＜0.05),而Bcl-2蛋白表达量却明显低于对照组(P＜0.05),Bcl-2/Bax也显著低于对照组(P＜0.01).上述结果表明BPA可引起SPF雄性sD大鼠生殖器官睾丸和附睾的严重的不可逆损伤,造成损伤的机制一方面是直接引起生精细胞和精细胞的坏死液化,另一方面还可通过促进Bax蛋白的表达,同时抑制Bcl-2蛋白的表达以致引起生殖细胞的大量凋亡,结果导致睾丸和附睾结构的严重损伤.     

新型除草剂异丙脂草醚对小鼠细胞DNA损伤的比较研究

应用单细胞凝胶电泳试验，测试了新合成的除草剂——异丙酯草醚对小鼠骨髓细胞和睾九细胞的DNA损伤情况．实验结果显示：与对照组比较，异丙酯草醚对小鼠骨髓细胞和睾丸细胞DNA均有一定损伤（p〈0．05），且对小鼠睾丸细胞的作用更为敏感，呈剂量-反应关系。     

小鼠睾丸TERT表达的增龄变化

应用免疫组织化学和图像分析方法研究了10,20,30,60,90天龄的小鼠睾丸不同分化类型生殖细胞中端粒酶催化亚基TERT的表达.结果发现在精子发生过程中精原细胞及成熟精子中均未见TERT阳性表达,而初级精母细胞尤其是粗线期精母细胞和精子细胞是高表达TERT的细胞类群,附睾管上皮细胞也呈TERT阳性表达;同时TERT在小鼠个体发育过程中的表达存在着从弱到强再到弱的动态变化趋势.结果表明TERT在小鼠睾丸中的表达特点与精子发生过程密切相关,可能对维持生殖细胞遗传物质的完整性和减数分裂的正常进行发挥着重要作用.     

黄花倒水莲（Polygala fallax Hemsl.）对60Coγ射线辐射损伤小鼠组织DNA的防护作用

目的:探讨黄花倒水莲对辐射损伤小鼠组织DNA的防护作用.方法:实验设计分照射前给药和照射后给药2个模块,每模块各5组.复制60Coγ射线(辐射强度为6Gy)对雄性昆明种小鼠辐射损伤的病理模型,黄花倒水莲提取液2、4、8 g/(kg.d)连续灌胃7天,正常对照组、照射模型组给予等量生理盐水,用彗星试验检测小鼠多种组织细胞DNA损伤情况.结果:黄花倒水莲照射前给药和照射后给药,均可明显降低小鼠肺、肝、脾、睾丸、淋巴细胞DNA的尾部DNA百分率和尾矩(P<0.01),呈一定的量效关系.结论:黄花倒水莲可以减轻60Coγ射线所致小鼠组织DNA的损伤,具有辐射防护作用.     

甲醛对雄性小鼠生殖细胞毒作用的研究

研究了液态和气态甲醛对雄性小鼠生殖细胞的毒作用,选用SPF级昆明种纯系雄性小鼠作为研究对象,液态甲醛染毒剂量分别为0．20,2．00,20．00mg／kg体重,采用腹腔注射染毒7d,观察睾丸组织的病理改变,并计算脏器系数、精子存活率、活动率、精子数及畸形率．气态甲醛染毒剂量分别为0．5,1．0,3．0mg／m^3,连续动态染毒72h,于首次染毒后第15天观察睾丸细胞的微核率,结果表明,液态甲醛能引起睾丸组织病理损伤,脏器系数、精子存活率、活动率和精子数减少,畸形率升高;气态,甲醛能诱导早期精细胞微核率增加,均呈现一定的剂量反应关系,液态甲醛和气体甲醛均具有小鼠生殖细胞毒性。     

微量热研究稀土离子对大肠杆菌的作用

用不同浓度的甲醛染毒人宫颈癌Hela细胞、离体小鼠睾丸细胞、昆虫小菜蛾细胞,应用单细胞凝胶电泳技术检测细胞DNA的损伤效应.结果表明:对于Hela细胞和小菜蛾细胞,甲醛在10 μmol/L时可以极显著地诱导DNA断裂(P<0.01);在30 μmol/L时既有断裂也有交联作用(P<0.01),而在50μmol/L时尾部DNA百分比和尾距与阴性对照组无显著差异(P>0.05).对于睾丸细胞,甲醛在10μmol/L、30 μmol/L和50μmol/L时均可导致DNA断裂(P<0.05,P<0.01).该结果提示:甲醛兼具有断裂和交联的作用,可引起多种细胞DNA的损伤.     

全反式维甲酸对脐血红系祖细胞增殖过程中HOXB6基因表达的影响

探讨脐血造血干祖细胞向红系增殖过程中HOXB6 mRNA表达及全反式维甲酸对HOXB6 mRNA表达的影响.采用体外培养技术,以全反式维甲酸持续干扰造血干祖细胞,观察集落生成情况,采用实时荧光定量PCR技术检测造血祖细胞增殖分化过程中HOXB6基因的表达水平,用DNA相对拷贝数和RNA表达相对量表示HOXB6基因相对表达量.结果表明,人类造血干祖细胞向红系祖细胞增殖分化过程中,各祖细胞HOXB6基因均表达,与正常对照组比较,全反式维甲酸可上调HOXB6基因的表达,说明HOXB6可能是造血干祖细胞向红系祖细胞正常增殖分化过程中的调控基因之一.     

Programmed cell death in Laminaria japonica (Phaeophyta) tissues infected with alginic acid decomposing bacterium

TdT-mediated dUTP-biotin nick end labeling (TUNEL) is a sensitive and valid method for detecting DNA cleavage in programmed cell death (PCD). Using this method, DNA cleavage was observed in Laminaria japonica sporophytic tissues, which were infected with alginic acid decomposing bacterium. It was found that DNA cleavage occurred 5 min after the infection, the fragments with 3′-OH groups of cleaved nuclear DNA increased with time of infection and spread from the infection site. Although no typical DNA ladder (200 bp/180 bp) was detected by routine agarose gel electrophoresis, the cleavage of nuclear DNA fragments of 97～48.5 kb could be detected by pulsed field gel electrophoresis (PFGE). By using CaspGLOWTM fluorescein active caspase-3 staining method, caspase-3 activity has been detected in response to the infection of alginic acid decomposing bacterium. Our results are similar to the observations in hypersensitive response (HR) of higher plant, suggesting that the rapid cell death of L. Japonica infected by alginic acid decomposing bacterium might be involved in PCD, and indicating that the occurrence of PCD is an active defense process against the pathogen's infection.     

人食管鳞癌及正常食管组织中Notch1基因的mRNA及蛋白的表达

采用RT-PCR方法,分别从人食管鳞癌及正常食管组织中扩增 Notch1基因,结果表明Notch1基因在人食管鳞癌及正常食管组织中均有表达.此外,通过免疫组织化学方法检测不同病理特征的35例食管鳞癌、16例原位癌及35例癌周正常食管粘膜上皮组织Notch1蛋白表达的变化,结果显示:Notch1蛋白在正常食管粘膜上皮组织和原位癌中的阳性率分别为82.9%、68.7%,二者无显著性差异(P＞0.05),但均显著高于食管鳞癌组织37.1%(P＜0.05),食管鳞癌Notch1蛋白的低表达与肿瘤的直径、分期和发生部位无关(P＞0.05),但与淋巴结转移有关(P＜0.05).这表明在正常食管粘膜上皮组织中Notch1蛋白高表达,而在食管癌鳞中Notch1蛋白呈现低表达或不表达.该研究为进一步探明Notch1基因的表达对食管癌细胞的发生、发展的影响奠定了良好的基础.     

噻嗪酮对黑斑蛙胚胎发育和蝌蚪生长的影响及血细胞DNA损伤效应

运用体视学方法和单细胞凝胶电泳(single cell gel electrophoresis,SCGE)技术,分析了不同浓度噻嗪酮溶液对黑斑蛙胚胎发育和蝌蚪生长的影响以及对黑斑蛙(Rana nigromaculata)外周血细胞DNA的损伤效应.结果表明,500 mg.L-1和2 000 mg.L-1的扑虱灵(25%噻嗪酮可湿性粉剂)溶液对黑斑蛙蝌蚪的生长发育具有一定程度的抑制作用,并能诱导黑斑蛙外周血细胞DNA出现链断裂损伤.     

谷胱甘肽过氧化物酶模拟物6-ySeCD对过氧化氢诱导小鼠成纤维细胞损伤的保护作用

考察不同剂量的H₂O₂作用于小鼠成纤维细胞（NIH3T3）后, 细胞脂质过氧化、 存活率、 DNA片段化的变化情况, 并研究谷胱甘肽过氧化物酶（GPX）的模拟物6A,6B-环己胺-6A′,6B′-硒桥联-β-CD（6-CySeCD）抗H₂O₂诱导小鼠成纤维细胞损伤的能力. 结果表明: H₂O₂对NIH3T3细胞有严重损伤; 6-CySeCD能有效保护细胞, 防止紫外线引起的损伤.     

酸性成纤维细胞生长因子对人脐静脉血管内皮细胞一氧化氮生成的影响

目的：观察人酸性成纤维细胞生长因子（haFGF）及其非促分裂型突变体（nmhamF）对人脐静脉血管内皮细胞（HEC）一氧化氮（NO）生成的影响。方法：实验分3组,分别为haFGF组、nmhaFGF组和对照组。用Griess反应法检测细胞培养上清NO相对含量（N嘎）。结果：haFGF和nmhaFGF都能诱导内皮细胞NO的生成,但同样条件下,nmhaFGF组诱导产生NO的相对含量与对照组比较在0．10、1．00、10．00、50．00、100．00ng／mL时均高（P〈0．01）。与haFGF组比较在0．10、1．00、10．00、50．00ng／mL时nmhaFGF组诱导产生NO的相对含量明显下降（P〈0．01）,在0．01和100．00ng／mL时也有降低（P〈0．05）。结论：nmhaFGF仍保留一定的诱导内皮细胞产生NO的作用,但NO生成量有显著下降。     

ZrO_2(掺杂Y_2O_3)固体电解质水蒸气传感器

用ZrO2(掺杂摩尔分数为8%的Y2O3),按照一定的烧结制度得到的小管为固体电解质,分别以已知平衡水蒸气压的H2C2O4和H2C2O4·2H2O的混合物及Na2SO4和Na2SO4·10H2O的混合物为参比电极,同时根据物理化学原理,水溶剂中加非挥发性溶质可以得到不同的水蒸气分压,以纯水和不同浓度的KOH溶液为待测电极,构成水蒸气浓差电池,在0～35℃和8～23℃的范围内,分别对上述两类水蒸气电池做敏感性实验的研究·实验发现,如果以pH2O(Ⅰ)、pH2O(Ⅱ)分别表示待测极和参比极水蒸气压,电池电动势E同lg(pH2O(Ⅰ)/pH2O(Ⅱ))呈现较有规律的变化,即电池的电动势随温度的升高而...     

紫外辐射诱导植物细胞DNA损伤的彗星检测

单细胞凝胶电泳(彗星检测)已广泛应用于动物细胞DNA损伤检测.该文报道了单细胞凝胶电泳应用于UV-B诱导植物细胞DNA损伤的检测.通过对动物细胞的单细胞凝胶电泳实验方法的改进,获得了在植物细胞中应用的最佳条件.以植物细胞原生质体为材料,并结合T4 Endonu lease V的运用,显著提高了UV-B诱导植物细胞DNA损伤提高彗星检测的敏感性和特异性.植物细胞DNA损伤的彗星图像经CASP软件处理并量化,结果表明:UV-A和UV-B均能诱导发生DNA单链断裂;UV-A在一定的剂量下诱导少量嘧啶二聚体的形成,而UV-B则强烈诱导嘧啶二聚体的产生.     

A peptide fusion protein inhibits angiogenesis and tumor growth by blocking VEGF binding to KDR

Vascular endothelial growth factor (VEGF) binding to its tyrosine kinase receptors (KDR/FLK1, Flt-1) induces angiogenesis. In search of the peptides blocking VEGF binding to its receptor KDR/FLK1 to inhibit tumorangiogenesis and growth, we screened a phage display peptide library with KDR as target protein, and some candidate peptides were isolated. In this study, we cloned the DNA fragment coding the peptide K237 from the library, into a vector pQE42 to express fusion protein DHFR-K237 in E. coli M15. The affection of fusion protein DHFR-K237 on endothelial cell proliferation and angiogenesis was investigated. In vitro, DHFR-K237 could completely block VEGF binding to KDR and significantly inhibit the VEGF-mediated proliferation of the human vascular endothelial cells. In vivo, DHFR-K237 inhibited angiogenesis in chick embryo chorioallantoric membrane and tumor growth in nude mice. These results suggest that K237 is an effective antagonist of VEGF binding to KDR, and could be a potential agent for cancer biotherapy.     

硫酸铈诱导果蝇氧化应激及细胞凋亡的研究

本实验主要研究了稀土硫酸铈（Ce（SO4）2）对果蝇氧化应激生物标记物和细胞凋亡的影响.果蝇培养在不同质量浓度（1,4,16,64,256,1 024 mg/L）的硫酸铈培养基中,分别测定其SOD,CAT和脂质过氧化产物（即MDA含量）,同时用彗星电泳和体外切割DNA实验来检测果蝇细胞中DNA损伤程度,用DNA Laddering法和TUNEL法测定稀土元素Ce对果蝇细胞凋亡的影响.与对照组相比,当Ce（SO4）2质量浓度低于16 mg/L时,果蝇体内SOD和CAT活性显著增加,MDA含量变化不明显;而当Ce（SO4）2质量浓度高于16 mg/L时,SOD和CAT活性明显下降,MDA含量上升.彗星电泳的结果表现为随着硫酸铈剂量的递增,果蝇中肠细胞的彗星率、彗星尾长和Olive尾矩增加,并表现为明显的剂量效应关系.果蝇体外实验结果表明,硫酸铈能打断DNA,使其片段化;同时,TUNEL结果显示果蝇中肠细胞呈现凋亡细胞的特征性蓝绿色颗粒,但DNA琼脂糖电泳没有表现出细胞凋亡特征性的梯形条带图谱.硫酸铈诱导果蝇的氧化应激可以使果蝇中肠细胞SOD和CAT活性降低,MDA含量上升,使中肠细胞出现凋亡特征.由此推断,硫酸铈可诱导果蝇细胞中遗传物质的损伤,对果蝇有一定的氧化毒性和遗传毒性作用．