传代培养对嵌合型非整倍体计数嵌合比例的影响

探讨嵌合型非整倍体样本经传代培养后,对嵌合比例的影响。将两例(21-三体综合征、特纳综合征)嵌合型非整倍体患者外周血样本进行体外培养,72h传代一次,连续传代两次。用原位荧光杂交(FISH)技术检测原代、传代1、传代2样本中嵌合比例的变化情况。嵌合型21-三体综合征异常细胞比例分别为原代(189/200)、传代1(165/200)、传代2(139/200);嵌合型特纳综合征异常细胞比例分别为原代(142/200)、传代1(73/200)、传代2(55/200)。嵌合型非整倍体样本经传代培养后,异常细胞所占比例逐渐减少,利用传代细胞进行疾病诊断时容易出现漏诊或误诊,原代细胞更适用于疾病的诊断。     

大鼠半月板纤维软骨细胞的分离、培养与鉴定

探讨体外大鼠半月板纤维软骨细胞分离培养与鉴定的实验方法,观察不同代次间细胞的形态学特征.手术分离大鼠双膝内外侧半月板,采用胰酶和Ⅱ型胶原酶消化法提取细胞,甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫荧光法鉴定细胞,低糖DMEM完全培养液常规培养.结果表明,原代半月板细胞形态呈多角形,轮廓清晰,8～10d可铺满瓶底;传代后的1～3代细胞,其贴壁及增殖能力加强,生长状态良好;传至4～5代尤其是第5代之后,细胞表型不稳定,密度稀疏,形态以长梭形为主且不规则,清晰度下降,传代周期延长;细胞鉴定结果呈阳性.双酶消化和低糖DMEM完全培养液常规培养可以获得具有良好生物学特性的半月板细胞,第4代之前的半月板细胞可以为运动损伤的组织工程学研究提供种子细胞.     

培养方法及胎牛血清浓度对人胎儿成纤维细胞体外生长的影响

采用单细胞培养法和组织块培养法从原代培养人胎儿成纤维细胞,并在不同体积分数胎牛血清(FBS)(0%、4%、8%、10%、12%)的条件下观察人胎儿成纤维细胞培养的状况并采用台盼蓝染色法进行活细胞计数.结果表明,早期由组织块培养法原代培养获取的细胞形态要比单细胞培养法原代培养获取的细胞稍好些,且在细胞传代后极少出现无法贴壁的死细胞.FBS对hFFs生长影响比较明显.在实际应用中,在体积分数8%FBS下,采用组织块培养法进行人胎儿成纤维细胞体外培养,效果良好.     

原代HUVECs分离培养关键影响因素分析

内皮细胞与心脑血管病变和癌症发生密切相关,人脐静脉内皮细胞(HUVECs)是最佳的研究工具.针对影响原代HUVECs培养的主要因素提出解决办法,建立稳定可靠的原代HUVECs培养方法.方法是取自剖宫产手术的脐带,消化法分离HUVECs,M199培养传代.针对消化条件、培养液、培养瓶/板处理、传代时间、胰酶浓度等因素考察.结果表明培养瓶/板预先2%明胶包被,采用I型胶原酶分离消化,含10%胎牛血清的M199培养,24h后换液,细胞生长至紧密后传代,O.05%胰酶传代消化,取4～5代细胞用于实验.认为经过控制原代HUVECs培养的主要影响因素,建立了不易污染、纯活度高的原代HUVECs培养方法.     

培养原代小鼠组织细胞检验细胞实验室技术操作规程

目的通过培养小鼠原代组织细胞,检验本科室己建立的一套细胞实验室技术操作规程能否满足细胞培养要求。方法培养小鼠原代成骨细胞、软骨细胞、心肌细胞、肝细胞、肺部细胞、脑部细胞、骨髓间充质细胞和胚胎成纤维细胞。计算原代培养成活率、传代成活率、冷冻及复苏成活率。结果成骨细胞、软骨细胞、心肌细胞、肝细胞、肺部细胞、脑部细胞、骨髓间充质细胞、胚胎成纤维细胞原代培养成活率分别为89%、96%、100%、100%、100%、80%、100%和90%;传代成活率分别为76%、93%、100%、92%、100%、66%、80%和92%;冷冻及复苏成活率分别为100%、100%、100%、100%、100%、100%、100%和100%。结论通过计算KM小鼠8种组织细胞原代培养、传代、冷冻与复苏的成活率,证明现有的细胞室技术操作规程基本上能够保证成功培养出常规原代细胞,并能传代、冷冻和复苏。     

兔和牛角膜上皮、基质及内皮细胞体外培养和增殖的研究

目的：研究兔和牛角膜上皮、基质及内皮细胞等3种细胞体外培养的生物学特性，探索和改进这3种细胞体外培养的方法，为组织工程角膜奠定基础。方法：采用消化法分离培养兔和牛角膜上皮、内皮和基质细胞，观察细胞贴壁生长情况，同时对生长良好的原代细胞进行消化传代，进一步观察传代细胞的形态和生长情况。结果：角膜上皮、内皮和基质细胞均在培养48～72h贴壁生长，培养6～9d能形成良好单层，细胞形态典型，进行多次传代后细胞仍维持原有形态和功能，获得的细胞能进行长期培养。结论：为兔和牛角膜上皮、内皮和基质细胞体外培养，提供了简单高效经济的方法。     

成人骨髓基质细胞的体外培养

本研究从成人的髋骨抽取骨髓液，离心后将骨髓基质细胞悬液接种培养，待细胞贴壁融合后，进行传代扩增培养．并采用流式细胞术进行细胞周期分析，结果表明原代培养和传代培养的细胞均为贴壁、形态不一的骨髓基质细胞，且此体外培养的骨髓基质细胞具有很强的增殖能力．本研究成功地建立了一套完整、简单、可行的体外分离、长期培养扩增人骨髓基质细胞(Human Bone Marrow Stromal Cells hBMSCs)的系统，证明成人骨髓基质细胞能够在体外长期增殖，为人的骨髓基盾细胞的理论研究和临床应用奠定了基础.     

人脐静脉内皮细胞培养液的选择

目的:筛选出人脐静脉内皮细胞(HUVECs)原代、传代最适培养液.方法:0.02%II型胶原酶灌注脐静脉消化15min获得细胞,用不同的培养液培养.24h后观察细胞贴壁状况,细胞计数法得到贴壁细胞数量;内皮细胞标志性蛋白vWF进行细胞鉴定.传代培养后,用MTT法比较不同培养液对HUVECs活力的影响.结果:用含ECGS、20%FBS的ECM组进行原代培养,可获得贴壁细胞数量最多的HUVECs,且与其他组间有显著差异;用含30ng·mL-1 VEGF165、10%FBS的M199进行传代培养,HUVECs活力较ECM组无明显差异.结论:HUVECs原代、传代培养分别选用优化后的培养液,既保证原代HUVECs的质量和数量,又使传代培养成本降低60.8%.     

成年小鼠成纤维细胞体外培养

成年小鼠皮肤成纤维细胞可从尾部取材用组织块培养法进行原代培养,添加血清的M 199(E arle′s)和低糖的DM EM均能较好的满足原代细胞的生长.两种培养液中细胞增殖的速度无明显差异.用0.25%胰蛋白酶消化小鼠尾尖原代培养物,上皮细胞与成纤维细胞有明显的敏感度差别.经控温控时消化传代,可将上皮细胞与成纤维细胞分离纯化.     

人胎儿骨髓间充质干细胞的分离及生物学鉴定

通过原代细胞培养,从引产胎儿骨髓组织中分离干细胞,然后进行生物学鉴定,旨在体外建立培养胎儿骨髓干细胞的有效方法,为进一步研究干细胞奠定基础．本研究对四个月的引产胎儿骨髓组织进行原代细胞培养,采用贴壁筛选法,在含有15％胎牛血清的L-DMEM／IMDM(1:1)混和培养液中培养,7 d后细胞可长满瓶底．显微镜下观察,细胞形态均一,呈长梭形．传代后,在8代以内的细胞贴壁能力较强,生长速度较快．将其命名为BMMS-03．在第3代时,对培养的细胞进行了于细胞标志物的生物学鉴定,采用流式细胞仪对经免疫荧光染色的细胞进行检测．结果显示:97．2％的细胞呈CD105阳性反应,66．0％的细胞呈CD106阳性反应, 9．2％的细胞呈CD34阳性反应．阴性对照组阳性反应为0．5％．生物学鉴定的初步结果提示,从胎儿骨髓组织中分离培养成功的细胞为骨髓间充质干细胞,其细胞形态学特征、CD105 、CD106 和CD34-的检测结果均符合间充质干细胞的特征．本研究成功地建立了体外培养胎儿骨髓间充质干细胞的有效方法,所获得的间充质干细胞纯度较高,增殖较快,适用于干细胞生物学和组织工程学的研究．     

利用漂浮组织块获得高纯度兔成骨细胞的方法

建立了一种能够获得高纯度成骨细胞的简便可靠的培养方法,为成骨细胞的相关研究提供稳定的种子细胞来源。在常规培养方法的基础上进行改良,建立了组织块漂浮培养法,从新生兔颅骨分离、培养成骨细胞。观察细胞的生长状态及形态,绘制生长曲线并计算细胞倍增时间,并进行碱性磷酸酶染色和矿化能力的检测。该方法分离培养的细胞显示典型的成骨细胞生物学特性,获得的成骨细胞纯度高、性状稳定、增殖能力强。说明组织块漂浮培养法是一种可行的培养方法,能够为成骨细胞的相关研究提供稳定可靠的种子细胞来源。     

Maturation of Osteoblast-Like Saos-2 on Hydroxyapatite Ceramics

Hydroxyapatite ceramics (.HA) has been proved to be excellent in biocompatibility and bioactivity.However, limited information is available concerning how HA ceramics affects the maturation of es-tcoblasts in molecular biological level /n v/tro. This study examines the mRNA expression and protein production of hone-related genes in estcoblast-like cell line(Saos-2) cultured on HA disks. Saos-2 cells are seeded onto the substrates and cultured for 18 days. Harvested cells are tested for the cell growth rate, expression of mRNAs for esteocalcin and alkaline phosphatase, and protein production of bone sialo-protein and esteocalcin. MTS assay shows that cell proliferates well on HA ceramic substrate. After 9d,bone sialoprotein and esteocalcin protein production in SAPS-2 increases more on HA surfaces than on control material. As bone sialoprotein and esteocalcin are the genes to be highly expressed at the late stage of estcoblast differentiation, this study reveals that after long time culture in HA, HA can induce Saos-2 maturation. The behavior of Saos-2 on HA surfaces revealed in this study provides valuable infor-mation for the understanding of the biocompatibility and bioactivity of HA ceramics.     

体外培养大鼠颅骨成骨细胞的生物学特性

应用机械和多步酶解的方法,从新生大鼠颅骨分离成骨细胞。偶氮染色法和钙钴法证明细胞的碱性磷酸酶活性呈阳性反应;Ｖｏｎ Ｋｏｓｓａ和钙分子探针Ｆｌｕｏ－３染色显示细胞节内有钙的沉积;电镜和倒置相差显微镜观察可见矿化结节及其形成过程;碱性磷酸酶性活性和骨钙素的动态分析提示这两种蛋白因子与成骨细胞分化与成熟的相关性。这一体外培养方法的建立,为骨的发育和成骨细胞生物学的研究提供了模型。     

Nanofibrous Scaffold Containing Osteoblast-Derived Extracellular Matrix for the Proliferation of Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells

Extracellular matrix( ECM) plays a prominent role in establishing and maintaining an appropriate microenvironment for tissue regeneration. The aims of this study were to construct a tissue engineered scaffold by reconstituting osteoblast cell-derived ECM( O-ECM) on the electrospun nanofibrous scaffold,and further to evaluate its subsequent application for promoting the proliferation of bone marrow mesenchymal stem cells( BMSCs). To engineer a biomimetic scaffold, calvarial osteoblasts and electrospun poly-llactic acid( PLLA) nanofibers were prepared and subjected to decellularize for O-ECM deposition. To evaluate and characterize the O-ECM/PLLA scaffold, the morphology was examined and several specific mark proteins of osteoblasts matrix were evaluated.Furthermore,the cell counting kit-8( CCK-8) assay was used to detect the proliferation of the BMSCs cultivated on the O-ECM/PLLA scaffold. The results indicated O-ECM/PLLA scaffold was loaded with Collagen I, Fibronectin, and Laminin, as the composition of the marrow ECM. After decellularization,O-ECM deposition was observed in O-ECM/PLLA scaffold. Moreover,the O-ECM/PLLA scaffold could significantly enhance the proliferation of BMSCs,suggesting better cytocompatibility compared to the other groups tested. Taken together,a biomimetic scaffold based on the joint use of O-ECM and PLLA biomaterials,which represents a promising approach to bone tissue engineering, facilitates the expansion of BMSCs in vitro.     

大豆苷元对体外培养大鼠成骨细胞增殖与分化的影响

目的探讨大豆苷元对体外培养大鼠成骨细胞的增殖与分化能力的影响.方法从新生大鼠颅骨中分离培养大鼠成骨细胞,加入不同浓度的大豆苷元溶液进行培养,48,72 h后用MTT法测定成骨细胞的增殖,PNPP法测定碱性磷酸酶活性及RIA法测定骨钙素含量.结果不同浓度的大豆苷元作用48,72 h后,测定OD值均高于阴性对照组;成骨细胞在大豆苷元的作用下,与阴性对照相比,碱性磷酸酶活性显著增高;成骨细胞BGP含量显著增加.结论大豆苷元具有促进体外大鼠成骨细胞的增殖以及分化的作用.     

PLGA多孔支架降解与成骨细胞相互作用的影响

研究聚丙交酯-乙交酯(PLGA)多孔支架降解和大鼠股骨成骨细胞生理活性之间的相互影响.将大鼠股骨成骨细胞接种于PLGA多孔支架上,观察4周降解时间内成骨细胞增殖活性、碱性磷酸酶(ALP)活性和钙浓度的变化以及PLGA相对分子质量损失、拉伸性能和压缩性能的变化.实验结果表明,支架降解初期,成骨细胞增殖活性较高,ALP活性和分泌钙的浓度较低;支架降解中后期,细胞增殖速度明显减慢,ALP活性和分泌钙的浓度明显下降.接种有细胞的支架降解过程中相对分子质量减小的速度快于对照组,力学拉伸强度和压缩杨氏模量低于对照组.支架材料中后期降解对细胞产生的影响大于降解初期,细胞附着于支架的生理活动加快了支架降解速度.     

羟基磷灰石陶瓷诱导成骨细胞的研究

通过定量检测在羟基磷灰石(HA)表面生长的成骨细胞骨涎蛋白和骨钙蛋白的表达,研究了羟基磷灰石陶瓷对成骨细胞的影响．研究结果表明,随着成骨细胞培养时间的延长,在羟基磷灰石表面生长的成骨细胞骨钙蛋白和骨涎蛋白的表达量相对于对照组有显著增加．由于骨钙蛋白和骨涎蛋白是成骨细胞分化晚期高度表达的两种标志性蛋白质,因此其表达量的显著提高意味着羟基磷灰石陶瓷可以诱导成骨细胞的成熟。这一结果可进一步为理解HA陶瓷的生物相容性和生物活性提供分子生物学依据。     

骨折愈合早期的细胞学变化——透射电镜观察

作者在透射电镜下观察了新西兰兔实验性骨折后一周的骨痂细胞学变化。本文描述了骨痂组织中间充质细胞、骨生成细胞、成纤维细胞、成软骨细胞和成骨细胞的超微结构特征,并对其在骨折愈合早期的作用问题进行了讨论。     

Biological and mechanical investigation of novel flax/silk protein-based nanofibrous scaffold for bone regeneration

The process of bone tissue regeneration involves an intricate network of a biological macromolecules that includes proteins and peptides to support stimulation and healing response. Here, we have fabricated a novel flaxseed/silk fibroin based (dual protein) composite nanofibers using β-TCP to improve the biological properties and promote cartilage tissue regeneration along with a controllable rate of biodegradation. The physiochemical properties of PVA/β-TCP/FP:SF were characterized by FTIR, XRD, SEM, porosity, contact angle measurements and mechanical evaluation etc. This study demonstrates the biological performance of the developed nanofibers by using hemocompatibility, biodegradation ability, and apatite deposition in stimulated body fluid. Moreover, the cell viability assay was performed on MG-63 osteoblast cells and long-term antibacterial rate against E. coli and S. aureus was analysed. Docking results of flax protein and silk fibroin protein further confirmed the stable modes of intramolecular bonding and the most stable electrostatic values using theoretical calculations. Taken together, the experimental results proved that the dual protein-based fibrous scaffold was found to be up-regulated in terms of biological activity with enhanced cell adhesion and proliferation.