乙型肝炎病毒(HBV)DNA免疫的初步研究

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增了编码ＨＢＶｓＡｇ的基因序列,将其插入到ｐｃＤＮＡ３载体中,位于人巨细胞病毒（ＣＭＶ）早期启动子下游．重组质粒ｐｃＤＮＡ３－ｓＡｇ转染细胞后检测到ＨＢｓＡｇ表达．用纯化后的重组质粒直接注射到ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠骨骼肌内,诱发实验小鼠产生了抗ＨＢｓＡｇ特异性抗体．ＰＣＲ扩增未检测到注射部位及肝脏细胞染色体中有外源ＨＢＶＤＮＡ整合     

树突状细胞与乙型肝炎病毒慢性感染

乙型肝炎病毒感染后易慢性化或形成携带状态,宿主免疫应答缺陷或不足被认为是一个重要原因。树突状细胞是能力最强的抗原提呈细胞,是免疫应答的启动者和调节者。近年来已认识到,乙型肝炎病毒慢性携带者的树突状细胞的表型和功能均显示异常,可能与病毒持续感染有关,恢复其树突状细胞抗原提呈功能的免疫治疗是有效应对慢性乙肝病毒感染的策略之一。本文对该领域研究进展作一综述。     

基于PD-L1蛋白调控的五味子酚对肝细胞癌细胞增殖的影响

目的 探究五味子酚(Schisanhenol)对肝细胞癌细胞增殖及作用机制的影响。方法 将HepG2细胞分为空白对照组和五味子酚3、10、30μmol/L 3个浓度组。应用Western Blot检测HepG2细胞PD-L1蛋白表达;通过免疫荧光试验进一步检测五味子酚对PD-L1蛋白表达的影响;通过集落试验观察HepG2细胞的增殖情况。结果 HepG2细胞PD-L1蛋白表达结果显示,3、10、30μmol/L五味子酚均可显著抑制PD-L1蛋白表达(P<0.05或P<0.01),且抑制效果呈剂量依赖性;免疫荧光试验和集落试验结果显示,30μmol/L五味子酚对HepG2细胞增殖有显著的抑制作用(P<0.01)。结论 五味子酚通过调节PD-L1蛋白表达抑制肝细胞癌细胞HepG2增殖。     

用酶联免疫法检测乙型肝炎病毒表面抗原的安全模拟方法

用酶联免疫法检测乙型肝炎病毒表面抗原是医院常用的实验方法,也是医学检验专业学生必须掌握的酶免疫标记技术实验方法。做这个实验需要乙型肝炎病毒表面抗原阳性患者的血清和正常人的血清,乙型肝炎病毒表面抗原阳性患者的血清传染性很强,正常人的血清也不是十分安全,也可能有其它病毒。学生在做这个实验时,如果操作技术不熟练,自我安全保护意识差,就有被感染及污染实验室的可能。为了能够让学生安全地上好这个实验,我们采用了安全模拟方法。     

乙型肝炎病毒蛋白及COX-2在乙肝相关性肝细胞癌发展与转移中的作用机制

目的探讨乙型肝炎病毒蛋白及环氧合酶-2(COX-2)在乙肝相关性肝细胞癌发展与转移中的作用机制.方法取42例慢性乙肝患者行穿刺活检时乙型肝炎病毒ccc DNA为阳性乙肝相关性肝细胞癌组织;另取同期手术切除的11例ccc DNA为阴性的非乙型肝炎相关性肝癌组织.免疫组化法检测乙型肝炎病毒X蛋白、COX-2、CD34的表达水平,Werdner法计算微血管密度;分析上述因子与乙肝相关性肝细胞癌组织微血管生成的相关性.RT-PCR和Western blot检测人肝癌细胞系(HepG2)和稳定转染乙型肝炎病毒X蛋白(HepG2-X)细胞中COX-2mRNA和蛋白表达情况;ELISA法检测细胞上清液中PGE2表达水平和不同浓度COX-2抑制剂塞来昔布作用后PGE2水平.结果乙型肝炎病毒X蛋白阳性表达组织中COX-2阳性率明显高于乙型肝炎病毒X蛋白阴性表达组织和非乙型肝炎相关性肝癌组织(P0.01).乙型肝炎病毒X蛋白阳性表达组织中早期癌症微血管密度明显低于进展期癌症组织,乙型肝炎病毒X蛋白阴性表达组织中微血管密度明显低于阳性表达组织(P0.01);COX-2阳性表达组织中微血管密度明显高于COX-2阴性表达组织(P0.01);非乙型肝炎相关性肝癌组织中微血管密度明显低于乙型肝炎病毒X蛋白、COX-2阳性表达组织(P0.01),与乙型肝炎病毒X蛋白阴性表达组织和COX-2阴性表达组织之间差异无统计学意义(P0.05);乙型肝炎病毒X蛋白、COX-2在乙型肝炎相关性人肝细胞癌组织微血管生成呈正相关.HepG2-X细胞中COX-2 mRNA和蛋白表达水平明显高于空载体对照HepG2细胞,并且细胞培养上清液中PGE2水平明显增加;与HepG2细胞相比,塞来昔布对HepG2-X细胞分泌PGE2具有更强的抑制作用.结论乙型肝炎病毒X蛋白、COX-2在乙肝相关性肝细胞癌组织中高表达,促进了癌组织微血管生成;乙型肝炎病毒X蛋白可通过COX-2/PEG2信号通路促进了肝癌的发生和发展.     

乙型肝炎病毒聚合酶基因在重组腺病毒系统中的表达

乙型肝炎病毒是一种重要的人类病原,乙肝病毒聚合酶在病毒的复制中具有关键作用．拼接了HBV56的聚合酶全长基因,利用重组腺病毒系统,在HEK293细胞中表达乙肝病毒聚合酶．通过一种半定量PCR方法,检测到所表达的蛋白具有逆转录酶活性．这一研究对深入认识该酶结构与功能的关系,研制抑制病毒复制的药物,有一定的意义．     

抗人PD-L1单克隆抗体的瞬转表达

利用HEK293 6E细胞瞬转表达抗人PD L1单克隆抗体. 将HEK293 6E细胞无血清悬浮培养, 筛选最佳生长培养基; 考察HEK293 6E细胞的筛选表达培养基、 DNA和PEI质量比及转染时细胞密度等转染条件, 并对收获的抗体进行SDS PAGE和ELISA鉴定. 结果表明: 在A无血清表达培养基中, 以2×106个/mL的细胞密度和m(DNA)∶m(PEI)=1的条件转染, 第4天收获抗体的产量最高, 为170.9 μg/mL; 收获PD-L1抗体的重链分子量约为50 000, 轻链分子量约为25 000.     

ELISA法检测乙肝患者血清乙肝病毒前S1蛋白

目的探讨检测乙型肝炎病毒前S1蛋白(Pre-S1)的临床意义.方法本文用酶联免疫分析(enzyme linked immunoadsorbed assay,ELISA)法对22例急性乙型肝炎患者及160例慢性乙型肝炎患者进行Pre-S1蛋白及HBV标志物检测,同时用荧光定量PCR法(fluorescence quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)检测HBV-DNA.结论在急性乙型肝炎中,Pre-S1转阴,提示疾病的预后良好;Pre-S1蛋白和HBV-DNA相关较大,能反映HBV复制,有可能作为体内HBV复制的实验室指标.     

ELISA法检测乙肝患者血清乙肝病毒前S1蛋白

目的:探讨检测乙型肝炎病毒前S1蛋白(Pre-S1)的临床意义。方法:本文用酶联免疫分析(enzymelinkedimmuno-adsorbedassay,ELISA)法对22例急性乙型肝炎患者及160例慢性乙型肝炎患者进行Pre-S1蛋白及HBV标志物检测,同时用荧光定量PCR法(fluorescencequantitativepolymemsechainreaction,FQ-PCR)检测HBV-DNA。结论:在急性乙型肝炎中,Pre-S1转阴,提示疾病的预后良好;Pre-S1蛋白和HBV-DNA相关较大,能反映HBV复制,有可能作为体内HBV复制的实验室指标。     

PD-L1基因在正常胃和胃癌组织中的表达及其可变剪接变异体的鉴定

目的:检测PD-L1基因的常规和可变剪接变异体mRNA在胃癌组织和正常胃组织中的表达。方法:以RT-PCR方法从胃癌和正常胃组织的总RNA中扩增PD-L1的cDNA,并将扩增产物通过测序鉴定。结果:4例胃癌标本中,从病例2中扩增到常规和可变剪接变异体,但以常规剪接体为主,病例3仅扩增到常规剪接体PD-L1Ⅰ,病例4扩增到其可变剪接变异体PD-L1Ⅱ,而病例1两种剪接形式均未扩增到。在2例正常胃组织中均只扩增到可变剪接变异体PD-L1Ⅱ。结论:PD-L1基因在大多数胃癌组织中表达,正常与胃癌组织中还表达可变剪接变异体PD-L1Ⅱ,提示表达产物的剪接方式具有多样性。     

Transactivation of Cellular Gene Expression by Hepatitis B Virus Proteins-A Possible Mechanism of Hepatocarcinogenesis

ＣａｓｅｌｍａｎｎＷ．Ｈ．（Ｄｅｐｔ．ｏｆＧｅｎｅｒａｌＩｎｔｅｒｎａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ,ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＢｏｎｎ,Ｓｉｇｍｕｎｄ－Ｆｒｅｕｄ－Ｓｔｒ．２５,Ｄ－５３１０５Ｂｏｎｎ,Ｇｅｒｍａｎｙ）Ｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎｏｆｈｅｐａｔｉｔｉｓ...     

树对人乙型肝炎病毒易感性的验证

为验证树对人乙型肝炎病毒 (HBV)的易感性 ,用含 HBV的人血清接种给 10只成年树 (雌雄各半 )。然后每周抽血 1次 ,每只动物共抽血 11次。用不同公司生产的 EL ISA试剂检测接种后的动物血清感染指标。实验观察至 13周 ,结果分别有 9只和 7只动物出现 HBs Ag阳性 ,持续最短 1周 ,最长 7周。用 PCR检测 ,结果有 1只动物连续 4周在血清中检测出 HBV DNA。表明树能感染人 HBV,但实验有待改进以延长感染持续时间     

树鼩对人乙型肝炎病毒易感性的验证

为验证树Ｑｕ对人乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的易感性,用含ＨＢＶ的人血清接种给１０只成年树Ｑｕ（雌雄各半）。然后每周抽血１次,每只动物共抽血１１次。用不同公司生产的ＥＬＩＳＡ试剂检测接种后的动物血清感染指标。实验观察至１３周,结果分别有９只和８只动物出现ＨＢｓＡｇ阳性,持续最短１周,最长７周。用ＰＣＲ检测,结果有１只动物连续４周在血清中检测出ＨＢＶ ＤＮＡ。表明树Ｑｕ能感染人ＨＢＶ,但实验有待改进以延长感染持续时间。     

原发性肝癌与乙型肝炎病毒感染的关系

目的　探讨HBV感染模式与肝病的关系.方法　选择经检测HBV5项血清学标志的肝癌患者120例为研究对象,并以非癌肝病180例作对照.结果　120例肝癌患者HBV感染以HbsAg75.1%(90/120),抗 Hbe70.2%(84/120),抗 Hbc80.5%(97/120)为主.与对照组58.9%,48.3%,66.1%比较,差异非常显著(P<0.01).肝癌组HBV总感染率高达98.3%.感染模式以HbsAg,抗 Hbe,抗 Hbc;HbsAg,抗 Hbc;抗 Hbe,抗 Hbc;HbsAg,HbeAg,抗 Hbc四种为主,占83.3%(100/120).肝炎、肝硬化、肝癌的HBV感染主要模式一致.结论　HBV是肝癌的主要原因之一,尤其4种感染模式与肝癌发生密切相关,定期随访复查是发现早期肝癌的最佳途径.     

乙肝病毒核酸疫苗诱导小鼠细胞免疫应答的研究

研究利用核酸疫苗诱生乙型肝炎病毒 (HBV)表面抗原 (S)细胞免疫应答的作用 .免疫前于BALB/C小鼠股四头肌注射 75 %盐酸布比卡因 ,三天后同样部位注射包含HBsAg基因片段的重组质粒pcDNAHBs .采用3H -TdR掺入法测定免疫小鼠脾细胞增殖能力 ;XTT法测定其脾细胞分泌IL 2活性 .结果表明注射乙肝核酸疫苗可以使小鼠脾细胞增殖 ,小鼠脾细胞分泌上清中可检测到IL - 2活性     

在HBV和(或)AFB1诱发树鼩肝癌过程中肝组织ras癌基因的表达

为了解在人乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）和／或黄曲霉毒素（ＡＦＢ１）诱发树Ｑｕ肝癌过程中Ｐ＾２１在肝组织的表达情况,用免疫组化方法观察人ＨＢＶ＋ＡＦＢ１双因素组（Ａ组）、单因素ＨＢＶ组（Ｂ组）、单因素ＡＦＢ１组（Ｃ组）、及对照组（Ｄ组）实验第４４周、１０５周、１１９周动物肝活检组织Ｐ＾２１蛋白的表达情况。结果,至１１９周,累计肝组织Ｐ＾２１阳性动物百分率分别为３５．３、５．３、１３．３、０。表明人ＨＢＶ与     

乙型肝炎慢性化相关机制的研究

乙型肝炎对人类危害日趋严重，其慢性化原因错综复杂，一直为肝炎免度治疗中的研究重点．本文着重阐述了对乙型肝炎慢性化机制提出的几种假说以及近年来国内外研究的进展．