卡波氏肉瘤及其病因分析

卡波氏肉瘤是一种软组织多发性色素性血管肉瘤,根据本病临床表现、生物行为等特点分为四型。其致病原因目前尚无定论,目前主要有感染因子、免疫缺陷、遗传因子和细胞因子紊乱等学说。其中,人类8型疱疹病毒在KS发病中的作用受到了广泛重视。     

经典型卡波氏肉瘤16例血清IL-6、VEGF、TNF-α和IFN-γ的检测分析

采用ELISA(enzyme-linked immunoadsordent assay)法检测16例新疆经典型卡波氏肉瘤(Kaposi’s sarcoma，KS)及64例正常对照的血清中IL6、VEGF、TNF-α和IFN-γ血清浓度。探究了经典型卡波氏肉瘤发病机制与血清中自细胞介素(interleukin-6，IL-6)、血管内皮生长因子(vascnlar endothelial growth factor，VEGF)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-a，TNF-α)、干扰素γ(interferon，IFN-γ)紊乱之间的关系。研究结果表明：血清IL-6、VEGF和TNF-α在KS病例组与对照组之间差异具有显著性(P值分别为0．040、0．002和0．043)。IFN-γ在KS病例组与对照组之间差异无显著性，P值为0．067。这说明，血清IL-6、VEGF、TNF-α的紊乱与经典型KS的发生存在一定的关系。     

新疆卡波氏肉瘤中c-myc、14-3-3β的表达

为探讨原癌基因c-myc、14-3-3β在新疆卡波氏肉瘤中的表达及意义,应用免疫组织化学Envision二步法检测新疆14例卡波氏肉瘤及对照组12例健康人正常皮肤组织内c-myc,14-3-3β的表达水平,结果显示：卡波氏肉瘤组织c-myc、14-3-3β蛋白均呈胞浆阳性,所有病例均呈阳性表达（14/14）,阳性率均为100%;c-myc蛋白在正常皮肤组织中多数病例呈阴性表达（3/12）,阳性率为25%,14-3-3β蛋白在正常皮肤组织中多数病例呈阴性表达（2/12）,阳性率为16.7%,c-myc、14-3-3β蛋白在KS中的表达明显高于在正常皮肤组织中的表达,差异均有统计学意义（P〈0.01）。表明：c-myc1、4-3-3β蛋白的异常表达在KS的发展过程中可能发挥了重要作用。     

小白菊内酯对Kaposi肉瘤相关疱疹病毒感染细胞的影响

目的为了探讨小白菊内酯(Parthnolide,PTL)对Kaposi肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi’s Sarcoma associated Herpesvirus,KSHV)感染细胞islk.219、SK-RG、BCBL-1增殖的影响。方法测定小白菊内酯对不同的KSHV感染细胞的半数抑制浓度(IC50)。同时显微镜下观察不同浓度的小白菊内酯处理KSHV感染细胞24 h和48 h后细胞的形态变化。采用CCK-8、集落形成实验检测不同浓度的小白菊内酯处理KSHV感染细胞后的增殖能力。采用Western blot检测Bcl-2和Cyclin D1的蛋白表达情况。结果小白菊内酯处理islk.219、SK-RG、BCBL-1的IC50浓度分别为21. 08μmol/L、10. 75μmol/L、13. 65μmol/L,随着小白菊内酯浓度和处理时间的增加,islk.219、SK-RG、BCBL-1细胞增殖能力下降,克隆数明显减少(P0. 05),并使Bcl-2和Cyclin D1蛋白的表达水平降低。结论小白菊内酯能够抑制KSHV感染细胞系islk.219、SK-RG、BCBL-1细胞的增殖,可能作为治疗KSHV感染的候选药物。     

干扰FOS表达对KSHV感染的神经元细胞增殖的影响

目的探讨在卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi's sarcoma associated herpesvirus,KSHV)感染的神经元细胞中干扰FOS基因表达,对细胞增殖和KSHV病毒的影响。方法采用强力霉素和丁酸钠诱导islk.219细胞的病毒r KSHV.219进入裂解态并提取病毒,采用病毒提取液感染SH-SY5Y细胞,采用荧光显微镜观察GFP确定感染成功,采用real time-PCR检测KSHV感染与未感染SH-SY5Y细胞FOS基因的表达;构建FOS基因的干扰质粒;并与KSHV感染的SH-SY5Y细胞中干扰FOS的表达,采用real time-PCR和Western blot确定干扰效率,采用real time-PCR检测干扰与未干扰细胞中KSHV病毒因子LANA、RTA以及K8. 1的mRNA表达情况,采用MTT法检测细胞增殖能力,PI染色结合流式细胞技术检测细胞周期;结果重组病毒r KSHV. 219能够成功感染SH-SY5Y细胞,FOS基因在KSHV感染的SH-SY5Y细胞中表达上调(P0.05);干扰FOS基因后,FOS基因的mRNA和蛋白表达水平明显降低(P0.05); KSHV病毒因子LANA、RTA以及K8. 1的mRNA表达水平均有降低(P0.05); MTT结果提示,干扰FOS表达抑制了KSHV感染的SH-SY5Y细胞增殖(P0.05);干扰48 h后感染细胞周期被阻滞在G0/G1期(P0.05)。结论 KSHV能够感染神经元细胞SH-SY5Y,干扰FOS表达能抑制感染细胞的增殖,阻滞细胞周期G0/G1期的进程,靶向干扰FOS在KSHV感染引起的神经系统疾病的治疗中具有一定的价值。     

酵母双杂交系统筛选与AtTR1相互作用的蛋白

AtTR1是拟南芥中发现的与植物高温和高盐等非生物胁迫相关的全新基因.采用GAL4酵母双杂交系统,以AtTR1作为诱饵蛋白,对拟南芥cDNA文库进行筛选,获得了与AtTR1有潜在相互作用的蛋白质PATL6 (Patellin6).进一步采用GST pulldown方法在体外验证了PATL6与AtTR1的相互作用.采用Realtime PCR检测PATL6在NaCl和Mannitol处理后的表达情况,结果显示PATL6的表达受高盐和高渗的诱导,是一个与非生物胁迫应答相关的基因.这些实验结果为进     

酵母双杂交系统筛选与HCMV pUL23蛋白相互作用的蛋白质

将UL23基因的ORF序列克隆到酵母表达载体pGBKT7构建诱饵质粒pGBKT7-UL23,用酵母双杂交技术筛选人胚肾cDNA文库中与人巨细胞病毒pUL23相互作用的宿主蛋白分子,再通过回复酵母双杂交再次确认两者之间的相互作用.结果表明:酵母双杂交,回复酵母双杂交试验证明宿主蛋白分子elF3e(eukaryotic trans-lation initiation factor 3,subunit E interacting protein)能够与人巨细胞病毒UL23蛋白相互作用.宿主蛋白分子elF3e能够与人巨细胞病毒UL23蛋白相互作用,这为进一步研究pUL23蛋白在HCMV生活周期中的作用机制提供依据.     

筛选hALR的相互作用蛋白基因(英)

为筛选与人肝再生增强因子(hALR)相互作用蛋白的基因,探讨肝再生增强因子在肝再生过程中的分子生物学机制,将人肝再生增强因子基因的开放读码框片断,重组入载体pGBKT7构建成“诱饵”质粒pGBKT7-hALR,然后用酵母双杂交系统从预转化酵母菌Y187的成人肝细胞cDNA文库中筛选与人肝再生增强因子相互作用蛋白的基因.筛出的阳性克隆基因序列被测出后,经GenBank查询,结果发现它们分别是血清白蛋白、金属硫蛋白、硒蛋白类似物、Na+/K+ ATPase和一个未知功能的蛋白的部分序列.这初步克隆了与hALR相互作用的蛋白基因,为进一步探讨ALR在肝再生过程中的作用机制奠定了基础.     

油菜细胞质雄性不育相关基因的筛选

甘蓝型油菜波利马(Brassica napus pol.)细胞质雄性不育系是一种很有实用价值的油菜不育类型.目前关于其分子机制的研究已证实,线粒体ATP合成酶的一个亚基ATP6与其雄性不育相关.本实验以ATP6作为诱饵蛋白,应用酵母双杂交共转化的方法筛选与ATP6相互作用的蛋白质.在获得的阳性克隆中,发现了一个与tAPX基因及其表达的蛋白都具有较高同源性.它是活性氧清除的重要酶类,很可能与细胞质雄性不育间建立起了某种联系.     

肝核转录因子FOXA3相互作用蛋白的初步研究

FOM3基因足肝核转录因子（Hepatocyte Nuclear Factor,HNF）基因家族中含有Foxhead Box结构域的3个成员之一,在维持血糖平衡以及调控发育方面发挥着重要的作用,利用FOXA3-AD酵母双杂交载体筛选人肝cDNA-BD酵母双杂交文库,并通过共转化进行验证,获得了两个与NFOXA3相互作用的蛋白：C3和TMEM4．这些相互作用蛋白的发现为深入了解FOXA3蛋白参与糖代谢调控的分子机制提供了线索．     

拟南芥CARK3与RCAR12相互作用的研究

植物激素ABA是植物应对非生物胁迫的响应因子,广泛参与了植物生长发育的调控.ABA结合其受体后抑制PP2Cs的磷酸酶活性,释放SnRK2s,从而启动ABA信号转导途径.本文采用酵母双杂交系统,GST-pull down技术研究蛋白质激酶CARK3与ABA受体RCAR12在体外的相互作用,结果显示CARK3和RCAR12共转入酵母后,在三缺平板上能够正常生长;经His-Tag抗体检测,CARK3与RCAR12出现明显且单一的条带.同时,采用双分子荧光互补实验研究CARK3与RCAR12在体内的相互作用,结果显示CARK3与RCAR12共转化烟草后能观察到较强的荧光.体内外实验表明,CARK3与RCAR12存在明显的相互作用,CARK3可能通过直接磷酸化ABA受体RCAR12来调控ABA信号途径的生理应答.     

Characteristics of the binding features of Nelin with F-actin and screening Nelin interactive proteins

The interaction of nelin, a cardiac-specific expressed protein of human novel gene nelin, with F-actin was studied by both F-actin cosedimentation in vitro and colocalization assays. The results showed that nelin is a new F-actin binding protein and is colocolized with F-actin in cytoplasm of cells. Three new nelin binding proteins, filamin C subtype, titin N2B subtype and inter-alpha trypsin inhibitor heavy chain precursor (ITIH), were identified from human heart cDNA library using yeast two-hybrid screening. The binding activity of filamin C with nelin was confirmed by coimmunoprecipitation. Filamin C binds to nelin through its C-terminal region. It is indicated that nelin is a cytoskeleton associated protein and acts as a membrane-cytoskeleton associated protein involved in the formation of focal adhesions.     

筛选hALR的相互作用蛋白基因

为筛选与人肝再生增强因子(hALR)相互作用蛋白的基因，探讨肝再生增强因子在肝再生过程中的分子生物学机制，将人肝再生增强因子基因的开放读码框片断，重组入载体pGBKT7构建成“诱饵”质粒pGBKT7—hALR，然后用酵母双杂交系统从预转化酵母菌Y187的成人肝细胞cDNA文库中筛选与人肝再生增强因子相互作用蛋白的基因。筛出的阳性克隆基因序列被测出后，经GenBank查询，结果发现它们分别是血清白蛋白、金属硫蛋白、硒蛋白类似物、Na^ ／K^ ATPase和一个未知功能的蛋白的部分序列。这初步克隆了与hALR相互作用的蛋白基因，为进一步探讨ALR在肝再生过程中的作用机制奠定了基础。     

Screening of the interacting proteins with NifA in <Emphasis Type="Italic">Azospirillum brasilense</Emphasis> Sp7 by the yeast two-hybrid system

NifA in AzospiriUum brasilense plays a key role in regulating the synthesis and activity of nitrogenase in response to ammonia and oxygen available. In this work we used the yeast two-hybrid system to identify the proteins that interact with NifA. The nifA gene was fused to the yeast two-hybrid vector pGBD-C2, and three A. brasilense Sp7 genomic libraries for use in yeast two-hybrid studies were constructed. Screening of the libraries identified four clones encoding proteins that interact with NifA. The confirmation of the interactions of each gene product of the four clones and NifA were carried out by exchanging the vectors for nifA and the four clones and by mutageneses of the four clones with shift reading frame experiments in yeast two-hybrid studies. DNA sequence analyses showed that two clones encode proteins containing PAS domains that play an important role in signal transduction. One clone has high similarity with the fhuE gene of Escherichia coli, whose gene product is involved in iron uptake and transportation, and the other clone encodes an unknown protein.     

筛选与拟南芥绒毡层发育过程中重要的转录因子DYT1相互作用的调控蛋白因子

DYT1是拟南芥绒毡层发育过程中重要的转录因子.DYT1的缺失会导致绒毡层相关功能的缺陷.然而,DYT1并不是使绒毡层功能化的充分因素,暗示了DYT1蛋白需要和其他转录因子形成复合物才能发挥功能.利用酵母双杂交技术以DYT1蛋白为诱饵在拟南芥cDNA文库中筛选与DYT1相互作用的蛋白.通过筛选从文库中得到20个阳性克隆,通过BLAST序列比对得到8个候选基因序列,从中鉴定出6种候选基因编码可能的转录因子或者其他调控转录的蛋白因子.其中5个编码调控因子的基因都被证实在花药中表达.更进一步,发现另一个对花药发育所必需的转录因子AMS能与DYT1在酵母体内形成转录复合物.表明这2个蛋白可能形成异源复合物在花药中共同调节下游基因的表达.     

应用酵母双杂交技术筛选与p53相互作用的蛋白质

应用酵母双杂交技术筛选与p53发生相互作用的蛋白质,有助于进一步阐明其在肿瘤发生、发展中发挥重要作用的调控机制。采用酵母双杂交技术,以p53C末端（62-393aa）作为诱饵筛选人乳腺cDNA文库,寻找能与之相互作用的蛋白质．并运用报告基因等实验提供的信息,经过重复验证排除假阳性以确定最后的阳性克隆。以p53C末端（62～393aa）作为诱饵最终筛选出了一个阳性克隆,经测序及生物信息学分析,这一个阳性克隆为：PIAS3（Protein inhibitor of activated stat3）。说明了PIAS3蛋白能与p53（62-393aa）发生特异性的相互作用。     

刚毛柽柳Th2CysPrx基因的互作蛋白及其表达模式分析

【目的】使用酵母双杂交系统研究刚毛柽柳中获得的2CysPrx(硫氧还蛋白过氧化物酶)基因(命名为Th2CysPrx)及编码蛋白的功能。【方法】通过酵母双杂交系统对该基因编码蛋白的互作蛋白进行筛选,进一步利用qRT-PCR 技术分析NaCl 和PEG₆₀₀₀ 胁迫下刚毛柽柳叶组织和根部组织中Th2CysPrx 基因与其互作蛋白基因的表达模式。【结果】酵母双杂交系统筛选获得了4 个可能与Th2CysPrx 互作的蛋白,分别为丙氨酸-乙醛酸转氨酶2(alanine-glyoxylate aminotransferase 2,ThAGT2)、苹果酸脱氢酶(malate dehydrogenase,ThMDH)、黄酮醇合酶(flavonol synthase,ThFLS)和扩展蛋白(expansin,ThEXP)。基因表达分析结果显示:盐胁迫下,柽柳叶和根中,Th2CysPrx和ThAGT2 基因的表达模式基本一致; 而干旱胁迫下,Th2CysPrx和ThAGT2 基因在叶和根中具有相同的表达模式。【结论】在盐和干旱胁迫下,ThAGT2 基因与Th2CysPrx 表达模式均趋于一致,表明Th2CysPrx 基因均可能通过与ThAGT2 基因的互作共同参与抗逆过程,为进一步研究Th2CysPrx 基因的抗逆机制,以及与其他抗逆基因的关系提供了依据。     

ITN4-C相互作用蛋白的筛选与鉴定

我们的前期工作发现过表达RTN4-C基因能够抑制肝癌细胞株SMMC7721的生长并且促进其发生凋亡．为了进一步了解RTN4-C促进凋亡的机制，本文采用酵母双杂交的方法从小鼠7d胚胎文库中筛选其相互作用的蛋白．最终筛选到其同源家族成员RTN3．进一步采用间接免疫荧光和及构建的荧光载体表明，RTN4-C和RTN3蛋白在HEK293和Hela细胞中发生共分布．本研究为进一步阐明RTN4-C抑制细胞生长和促进细胞凋亡的机制提供了新的依据．     

Cloning and identification of a novel binding protein of CD2 cytoplasmic domain

In order to understand why CD2 has a dual action of transduction of activation or apoptosis signals in T cells under different experimental conditions, we employed a yeast two-hybrid system to look for a binding protein of the cytoplasmic domain of CD2 which may be involved in this issue. A human T cell cDNA library was screened by a cDNA encoding the cytoplasmic domain of CD2 (Thr211-Gln336). The specificity of protein-protein interaction was verified by co-immunoprecipitation. The binding protein obtained, designated CD2cBP, was found to be homologous tov-fos transformation effector protein (Fte-1). As Fte-1 plays a role in cell transformation, growth, protein synthesis and protein-import into mitochondria, this result suggests that CD2cBP may be putatively involved in CD2-mediated signaling.