罗氏沼虾蚤状幼体复眼中Gq蛋白α亚基的含量

Gq蛋白是最近几年发现的一种G蛋白,存在于章鱼、乌贼、螯虾、罗氏沼虾和日本沼虾等无脊椎动物的感光细胞中．Gq蛋白又称异源三聚体嘌呤核苷酸结合蛋白,它由α,β,γ3个亚基组成,Gq蛋白α亚基在光信号传导酶反应链中起分子开关和级联放大作用．     

罗氏沼虾潘状幼体早期复眼中的Gq蛋白α亚基

通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对1000对罗氏沼虾Ⅰ-Ⅳ期潘状幼体复眼的Gqα蛋白进行分离,利用Tanon GIS凝胶图像处理系统对凝胶和蛋白图谱进行拍摄和蛋白质百分含量分析.结果显示潘Ⅰ至溞Ⅳ复眼Gqα蛋白含量逐渐增加,溞Ⅰ～Ⅳ期分别占总蛋白的3.499%,3.540%,3.558%和3.565%.其中,溞Ⅳ和溞Ⅰ相比Gqα蛋白含量有显著性差异(配对t试验P＜0.05).我们的研究证实罗氏沼虾潘状幼体随着个体的发育,复眼的功能是逐渐完善的.     

日本沼虾感光器Gqα基因的扩增及分析

采用分子生物学方法，提取日本沼虾感光器的总RNA，反转录成c DNA。根据Gq蛋白α亚基的保守序列设计简并引物，通过巢式PCR扩增出日本沼虾感光器Gqα基因的片段，并将该片段克隆到pMD 18-T载体上进行序列测定，结果显示此基因片段由369bp组成。翻译成氨基酸序列（123aa），Blast搜索结果比较该片段氨基酸序列与美洲鲎、美洲龙虾、冈比亚按蚊等6种动物的Gqα氨基酸保守序列具有高度同源性（83.74％～95％），其中与冈比亚按蚊的Gqα氨基酸序列同源性最高（95％）。     

日本沼虾感光细胞中Gq蛋白α亚基的鉴定与亚细胞定位

Gq蛋白是大多数无脊椎动物感光器中光信号传导中酶反应链的第二信使．本文用免疫印迹的方法研究了日本沼虾感光器中Gqa的存在，并应用免疫电镜技术观察了Gq蛋白在其感光器中亚细胞的分布，为研究Gq蛋白在光信号传导中的作用提供新的依据．     

罗氏沼虾溞状幼体早期复眼中的Gq蛋白α亚基

~~罗氏沼虾溞状幼体早期复眼中的Gq蛋白α亚基@沈金枫$上海师范大学生命与环境科学学院!上海200234 @张晓素$上海师范大学生命与环境科学学院!上海200234 @冯志国$上海师范大学生命与环境科学学院!上海200234 @袁维佳$上海师范大学生命与环境科学学院!上海200234~~~~~~上海市高等学校科学技术发展基金资助项目 (0 3D2 0 5 )     

钙离子对光暗适应罗氏沼虾感光细胞中膜结合Gq蛋白α亚基的影响

用蛋白质提取液提取膜结合Gq蛋白α亚基并SDS-PAGE电泳,利用Tanon G IS凝胶图像处理系统分析其含量.光暗条件下,在3种溶液孵育后的感光细胞中都提取到了42 kDa的膜结合Gq蛋白α亚基.高钙溶液、生理溶液、低钙溶液孵育后的感光细胞中膜结合Gq蛋白α亚基的含量,光适应组分别是4.58%、4.63%、5.05%;暗适应组分别是4.56%、4.94%、5.13%.     

3种沼虾的16S rRNA基因序列分析

为从分子角度理解3种沼虾,即罗氏沼虾、日本沼虾和祁连沼虾的遗传差异,为沼虾资源的管理、保护和合理开发利用提供理论基础,采集了每种沼虾各2尾样本,采用PCR的方法扩增了其线粒体16S rRNA基因片断并测序。比对后共获得了3种沼虾的297 bp的16S rRNA片断序列,共检测到47个变异位点,总变异率为15.8%。3种沼虾的平均碱基含量分别为T(37.7%)、C(10.9%)、A(29.8%)和G(21.6%)。罗氏沼虾种内个体间序列差异为3%。祁连沼虾和日本沼虾种内个体间差异均为0.7%,且两者种间差异很小,为0～0.7%。罗氏沼虾与祁连沼虾、日本沼虾之间的序列差异在13.1%～14.8%之间,种间差异明显。系统进化树显示罗氏沼虾自成一枝,而日本沼虾和祁连沼虾共同构成另一枝,日本沼虾和祁连沼虾的遗传距离小于5%,结果提示日本沼虾和祁连沼虾有很近的亲缘关系,两者也许是亚种关系。     

红螯螯虾感光器Gqα的亚细胞定位

利用免疫细胞化学的方法和电镜技术观察红螯螯虾感光器中Gq蛋白α亚基的亚细胞定位,结果表明Gqα以膜结合形式定位于感杆束和以可溶性形式定位于细胞质中,Gqα定位的变化依赖于不同的光照条件.在暗适应后,Gqα主要分布于感杆束,细胞质中很少,感杆束与细胞质中胶体金颗粒的密度比为1.44±0.074;在(日)光适应后,密度比减少为0.61±0.021;在不同波长的光照处理后,Gqα定位有差异,感杆束与细胞质中胶体金颗粒的密度比由高至低,依次为绿光(1.64±0.046)、红光(1.28±0.036)、蓝光(1.16±0.111)和黄光(0.96±0.099).光调节的Gqα转位可能控制了能被视紫红质激活的Gq蛋白的数量.研究表明光波可影响感光细胞中膜结合和可溶性Gqα的比例,而这一结果可能是由被光激活的视紫红质的数量来控制的.     

蛹虫草菌丝对罗氏沼虾免疫功能的影响

在罗氏沼虾饵料中添加w=1%、2%、3%蛹虫草菌丝能提高罗氏沼虾血清PO活力、肌肉SOD活力、 GSH-Px活力,并同时降低MDA含量.经嗜水气单胞菌攻毒后,实验组的免疫保护率也明显提高.结果证明,蛹虫草菌丝可提高罗氏沼虾的免疫能力,增强抗嗜水气单胞菌的能力.     

饲料蛋白水平对罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)生长和消化酶活性的影响

探讨了饲料中不同蛋白水平（ω（蛋白）分别为20.2%,29.6%,40.8和51.2%）对罗氏沼虾（Macrobrachium rosenbergii）生长和消化酶活性的影响。结果表明,在本实验范围内,饲料中不同蛋白水平对罗氏沼虾的特殊生长率（YSGR）影响不显著（P＞0.05）,对淀粉酶的比活性也无显著影响（P＝0.108）,但显著影响类县蛋白酶（P＝0.017)和胃蛋白酶的比活性（P＝0.002）,在同一蛋白水平下,淀粉酶比活性最高,其次为类县蛋白酶和胃蛋白酶,3种消化酶的比活性在ω（蛋白）＝51.2％组最高,随着饲料中蛋白水平的上升,3种消化酶的比活性也呈逐渐上升的趋势,而淀粉酶与类胰蛋白酶比活性的比值逐渐下降,表明罗氏沼虾消化酶活性对饲料中蛋白含量有适应性反应。     

罗氏沼虾原肌球蛋白基因的克隆表达及变应原性鉴定

通过NCBI查找到罗氏沼虾原肌球蛋白的mRNA,根据其CDS区域设计特异引物,通过反转录聚合酶链反应(RT-PCR)克隆出目的基因片段,测序后将该片段克隆到原核表达载体 pET-28a 上,转化到 E. coli BL21(DE3)和E. coli Rosatta后,经异丙基-B-D-硫代乳糖苷(IPTG)诱导表达,用Ni2+亲和层析柱对重组变应原进行纯化.采用免疫印迹检测其与对虾过敏患者血清的 IgE 结合活性.对罗氏沼虾变应原进行了表达、鉴定及纯化,成功地获得了具有变应原活性的重组罗氏沼虾原肌球蛋白,为罗氏沼虾过敏性疾病的诊断、治疗奠定了基础.     

罗氏沼虾产业在中国持续增长的经济与社会原因分析

罗氏沼虾作为外来物种自1976年引入中国大陆已有30多年历史。到2009年,全国罗氏沼虾年育苗量达250×108尾以上,养殖面积约3×104 hm2,养殖产量超过13.5×104 t,养殖产值超3.0×109元,已连续10年成为世界第一的罗氏沼虾养殖大国。其持续增长的原因有：1、罗氏沼虾优良生物学特性是其产业发展的前提;2、苗种繁育和商品虾养殖技术的进步支撑了产业的发展;3、对虾养殖产业的波动为罗氏沼虾养殖产业的增长提供了机会;4、中国经济发展带动了国内罗氏沼虾的消费市场;5、政府支持和水产技术推广是罗氏沼虾产业发展的保障和技术支撑。罗氏沼虾生长迅速、养殖时间短、市场稳定、经济效益显著,已成为我国主要淡水养殖虾类。因此,推广罗氏沼虾的健康养殖应是农民脱贫致富的一条有效途径。     

罗氏沼虾个体发育之初——受精卵特性的研究

采用石蜡切片和生化方法研究了罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)受精卵的特性。结果表明：受精卵中央区是一团致密的卵黄物质,卵表面初级卵膜内是一层细胞质。表层细胞质与中央区之间是连接紧密的卵黄颗粒。中央区与外周卵黄颗粒紧密相连,同时也透过卵黄颗粒间的细胞质与表层细胞质相连。卵黄物质的组成以蛋白质(18．67±0．22(μg/卵))和脂类(13．52±0．27(μg/卵))为主,分别占受精卵干重的45．86%和33．21%。在受精卵期较高的淀粉酶活力说明糖类在此期为主要的能源,迅速为受精卵的发育提供能量,蛋白酶类酶活力也较高,分解卵黄蛋白以供能,脂类在受精卵期不是主要的能源。罗氏沼虾受精卵期蛋白SDS-PAGE显示了包含卵黄磷蛋白两个亚基在内的75．6～105KD区域内的蛋白亚基含量丰富,是受精卵期蛋白质的主要成分,也是胚胎发育时期的蛋白营养源,此外,其他分子量的蛋白亚基种类也较多。     

罗氏沼虾养殖技术规范

罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergu)养殖技术的综合标准,具体分为①亲虾;②人工繁殖技术;③幼虾培育技术;④食用商品虾饲养技术;⑤虾苗运输技术．该综合标准适用于罗氏沼虾的人工繁殖和养殖生产．     

饲料中维生素C添加量对罗氏沼虾生长的影响

用分别添加了100～800ms／kg饲料维生素C的多聚磷酸酯(LAPP,维生素C含量25％)的实用性饲料饲养罗氏沼虾(Mcrobrachium rosenbergii)40d．结果显示投喂添加维生素C饲料的罗氏沼虾的成活率为85．6％～88．9％;增重率为118．15％～140．59％,饲料系数为2．80～2．54．与不添加维生素C相比,在饲料中添加200mg／kg饲料以上的LAPP,虽然对成活率的影响不显著,但能使生长速度显著提高,饲料系数显著降低．据此认为以LAPP作罗氏沼虾饲料的维生素C源的适宜添加量为200mg／kg．     

水温对罗氏沼虾和青虾心率及组织中镁的影响

罗氏沼虾的心率随水温的降低而变化,在17℃时只有79次 min,为30℃的1 3;其血清Mg的含量随水温的降低而升高,肌肉中Mg有降低的趋势,但差异不明显。青虾心率在水温从24℃到17℃时,无明显改变;血清Mg随水温的降低而升高,但变化幅度小于罗氏沼虾。     

罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)血细胞的分类与组成

目的:对罗氏沼虾的血细胞进行分类,研究各类血细胞的组成情况.方法:从罗氏沼虾心脏取血制血涂片,经瑞氏染色后光镜观察.结果:根据血细胞的形态、核质比、细胞质颗粒的大小与分布以及染色情况,可将罗氏沼虾的血细胞分为:①透明细胞,其胞质中无明显颗粒,核质比大;②半颗粒细胞,其胞质中含有明显的颗粒,颗粒大小不均,分布不均匀,核质比小;③颗粒细胞,其胞质中含有明显的颗粒,颗粒大小均一,分布均匀,核质比小.结论:罗氏沼虾的血细胞可分为透明细胞、半颗粒细胞和颗粒细胞3类,它们在血细胞中所占比例依次为:颗粒细胞<半颗粒细胞<透明细胞.     

罗氏沼虾胚胎发育过程中的脂类变化

采用生物化学方法测定了罗氏沼虾胚胎发育过程中脂类含量和脂肪酸的组成.结果表明：随着胚胎的发育,总脂及中性脂含量明显下降,而磷脂含量趋于稳定,保持在一定水平.脂类在罗氏沼虾胚胎发育中除部分形成组织器官的组成成分外,主要起提供能量的作用.在脂肪酸组成上,胚胎中含量较高的饱和脂肪酸(SFA)有C14:0,C16:0,C18:0,单不饱和脂肪酸(MUFA)有C16:1n-6,C18:1n-9,多不饱和脂肪酸(PUFA)有C18:2n-6,C20:4n-6 (ARA)以及n-3系列的高不饱和脂肪酸(ω-3HUFA) C18:3n-3,C20:5n-3 (EPA)和C22:6n-3(DHA).C18:1n-9和C16:0在罗氏沼虾胚胎发育各时期均占较高比例,是整个胚胎发育期间能量的主要提供者.在胚胎发育的不同时期,作为主要能源的脂肪酸不同.饱和脂肪酸和单不饱和脂肪酸在从受精卵期到原肠期是主要能源,单不饱和脂肪酸在从囊胚期到无节幼体期是主要的能源,多不饱和脂肪酸是从无节幼体期到溞状幼体期的主要能源.     

盐度对罗氏沼虾代谢率的影响

测定了4个盐度水平(0‰,3‰,6‰,12‰)下罗氏沼虾雌雄成虾在饥饿状态下的耗氧率和排氨率．结果表明,随着盐度的增高,罗氏沼虾雌雄成虾耗氧率和排氨率都有增高趋势,在3‰盐度时,罗氏沼虾的耗氧率和排氨率最低;在同一盐度水平下,雌虾的耗氧率和排氨率较雄虾高．     

罗氏沼虾眼柄性腺抑制激素(GIH)的分离纯化及性质的研究

以加热离心的方法获得罗氏虾眼柄粗提取液及用凝胶层析和平板电泳等生化方法进一步分离纯化,并分别对日本沼虾和罗氏沼虾卵母细胞进行体外培养,发现其对卵母细胞发育均具有一定的抑制作用,说明罗氏虾眼柄抽提液含有较多的GIH,且他们在结构和功能上具有属内相似性.