PCR-DGGE技术在活性污泥细菌多样性中的条件研究

探讨了适用于分析研究活性污泥中细菌多样性的PCR-DGGE实验条件。采用NestedPCR(巢式PCR)技术扩增污泥中细菌的16S rDNA V3区域,利用该扩增产物对污泥中细菌DGGE条件进行优化。结果表明,所采用的Nested-PCR技术准确性较高,可从微量的DNA中扩增出分子大小约190 bp的目标片段。经DGGE条件优化,确定其最佳DGGE条件为丙烯酰胺浓度8.0%,PCR产物作为DGGE上样样品,凝胶变性梯度范围30%~60%,电泳电压140 V,电泳时间8 h,电泳温度60℃。该研究为活性污泥中细菌的PCR-DGGE技术的后序研究提供有效途径。     

黄檗丛枝菌根(AM)真菌PCR-DGGE条件研究

从东北林业大学林场采集黄檗根际土壤及菌根,采用Nested-PCR技术分别扩增黄檗菌根及根际土壤AM真菌18S rDNA NS31/Glo1区域,利用该扩增产物对AM真菌DGGE条件进行优化.表明Nested-PCR技术具有较高的灵敏性,可有效的从微量DNA中扩增出约230bp的目标片段;经DGGE条件优化,确定AM真菌最佳DGGE条件为丙烯酰胺浓度8.0%,纯化后的PCR产物作为DGGE上样样品,凝胶变性梯度范围30%-60%,电泳电压130V,电泳时间8h,电泳温度60℃.     

小麦—黑麦代换系间杂交后代的初步筛选

通过对小麦--黑麦代换系5R/5A×6R/6A杂交后代的植物形态及细胞染色体数目的观察,选择杂交后代中具有普通小麦类型并带有某些黑麦性状的,染色体数目均为2n=42的7份试验材料,利用国内外发表的黑麦通用特异性DNA探针引物进行PCR扩增与电泳检测,初步筛选出6份材料为小麦--黑麦易位系或代换系.其中有4份材料06-6-9、6-26、7-23、7-33用黑麦特异性引物pSc119.1扩增出了一条大小为750bp的条带,有2份材料06-6-5、06-6-6用黑麦特异性引物AF1/AF4扩增出了一条大小为1500bp的条带.     

SDS-PAGE法分析蜂蜜中蛋白质组分的条件优化

本文从分离胶浓度、凝胶厚度和点样量方面对SDS-PAGE电泳法进行优化,探究最适合蜂蜜蛋白质分析的SDS-PAGE电泳条件,证明SDS-PAGE电泳法分析蛋白组学的可靠性,为蜂蜜新鲜度和真实性的鉴别提供参考依据。     

美洲南瓜SSR-PCR反应体系的优化及引物筛选

应用单因素实验和L16(44)正交设计对影响美洲南瓜SSR-PCR的主要参数进行优化,建立适合美洲南瓜SSR-PCR反应的最佳体系。结果表明,不同水平的各因素对PCR反应结果均有影响,优化后美洲南瓜SSR-PCR反应体系(20μL)为:1.00μmol.L-1引物、0.150 mmol.L-1dNTP、0.9 U Taq酶、50 ng DNA模板。运用优化后的反应体系对美洲南瓜进行多态性引物的筛选,从300对引物中筛选出68对扩增条带清晰、多态性丰富的SSR引物。     

白苞蒿提取工艺优化及槲皮素含量测定

建立测定白苞蒿中槲皮素含量的HPLC方法.采用正交试验优化白苞蒿的提取工艺,用HPLC法测定白苞蒿中槲皮素的含量.色谱柱为Hypersil C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为V(甲醇)∶V(0.2%磷酸)=45∶55的混合液,检测波长为370 nm,流速1.0 mL·min~(-1),柱温30℃.结果表明槲皮素进样量为0.364～2.912μg时呈良好的线性关系(r=0.999 9),平均加样回收率为99.43%,RSD为1.66%(n=9).所建方法简单、稳定、重复性好,可用于白苞蒿药材的质量控制.     

橡胶粉 SBS 纳米SiO2三元复合改性沥青性能研究

用直接剪切的方法制备了SBS、废旧橡胶粉以及纳米SiO2三元复合改性沥青,研究了拌合时间、拌合温度及改性剂掺量对沥青形貌以及沥青软化点、针入度、延度的影响规律.研究结果表明,在拌和温度为180 ℃、拌和时间为6 h,SBS掺量为5%、橡胶粉掺量为25%、SiO2掺量为0.05%的条件下,能够获得改性沥青最优性能,与基质沥青相比,改性沥青的软化点提高了63%,5 ℃延度提高了600%.     

耐高温耐高酒度醋酸菌选育研究

从高温季节发酵良好的醋醅中,分离筛选出N 9、F17两株醋酸菌,在培养温度35℃,培养基酒度6%(V/V)条件下,产酸量均高于A S1.41号.以N 9、F17为出发菌株,经紫外线、硫酸二乙酯逐级诱变,分别获得编号为HN 15、HF6两株耐高温耐高酒度醋酸菌株.在培养温度40℃,培养基酒度12%(V/V)条件下,HN 15酒精转化率为75%,HF6酒精转化率为70%.     

几种理化因子对黄芩悬浮细胞生长及黄芩苷含量的影响

以黄芩悬浮细胞为试材,研究不同接种量、蔗糖质量浓度以及6-BA和NAA不同配比对黄芩悬浮细胞培养过程中干/鲜质量和黄芩苷含量变化的影响.结果表明,黄芩悬浮培养的最佳接种量为每瓶1.0 g;蔗糖浓度为3%时,最适合黄芩悬浮细胞系生长;pH值为5.8时最适合黄芩悬浮细胞系生长和代谢产物积累的培养基;0.1 mg·L~(-1) NAA与0.2 mg·L~(-1) 6-BA配比时,最适合黄芩悬浮细胞系的生长.     

甜菜单体附加系M14与栽培甜菜蛋白质的SDS-PAGE比较分析

利用SDS- PAGE电泳比较分析了甜菜单体附加系M14与栽培甜菜在花蕾期蛋白水平上的差异.对甜菜单体附加系M14与栽培甜菜花蕾期蛋白的SDS-电泳图分析后,样品分别获得41与40条蛋白质条带,以栽培甜菜为对照甜菜单体附加系M14在花蕾期特异表达了3条蛋白质带,表达缺失了2个条带,初步推测其中可能有与M14进行无融合生殖相关蛋白质.     

大豆花瓣蛋白双向电泳分析技术体系的优化

双向电泳技术体系的优化是蛋白质组学研究的前提和基础.本文针对大豆花瓣含有大量色素和酚等干扰物质的现象,比较6种蛋白提取方法和2种蛋白裂解液配方,优化胶条范围和等电聚焦程序.结果表明:pH为4～7 IPG胶条适于大豆全花蛋白分离;TCA/丙酮+2D Clean Up试剂盒法去除杂质充分,提取的蛋白含量高、纯度好、分离效果佳、耗时短;蛋白裂解液采用5 mol/L尿素,2 M硫脲,2%CHAPS,2%SB3-10,5 mmol/L TCEP,20 mmol/L DTT,0.5%IPG Buffer为好;增加离心转速、时间和丙酮清洗次数能促进蛋白溶解,增加蛋白纯度,初步建立了一套适合大豆全花蛋白双向电泳分析的技术体系.     

正交设计优化苜蓿ISSR-PCR反应体系的研究

以苜蓿基因组DNA为模板,利用正交设计,对影响ISSR反应体系的主要因素(Taq酶、Mg2+、dNTP、引物和模板)从4个水平上进行筛选和优化,建立了适合苜蓿的最佳ISSR反应体系:20μL反应体系中加83.4 nkat Taq酶,2.0 mmol/L Mg2+,10×PCR Buffer 2.0μL,0.4 mmol/L dNTP,0.2 mmol/L引物,2.5 ng DNA模板.PCR扩增反应程序为:94℃预变性4 min(94℃变性1 min,45~53℃退火1 min,72℃延伸1 min)40个循环,于72℃延伸7 min,4℃保存.在此反应体系下,可以得到重复性好、稳定且多态性高的条带.     

根癌农杆菌介导籼稻93-11遗传转化体系的建立

为建立水稻基因功能研究技术平台并通过生物技术改良优良恢复系,选用93-11成熟胚为外植体,通过优化培养基,建立了适合转化的高效再生系统;首次通过农杆菌介导将大肠杆菌基因C1成功转化93-11,构建了根癌农杆菌介导籼稻93-11遗传转化体系.结果表明,NBA1D3为合适的愈伤诱导培养基,诱导率达87.0%;愈伤经3次继代培养转入分化培养基,分化率为47.0%.获得213株潮霉素抗性植株,随机挑选89株经PCR检测,65株检测到目的条带,阳性植株占73.0%;实时PCR检测C1基因能在转基因植株表达.     

两种生态型羊草叶片蛋白质的SDS-PAGE比较分析

SDS-PAGE电泳可区分不同相对分子质量的蛋白质,该法现已广泛应用于各种生物的蛋白质相对分子质量检测及不同生物种类蛋白质的比较研究.利用SDS-PAGE电泳比较分析了黄绿型和灰绿型两种生态型羊草在蛋白质水平上不同的分子质量的差异.对两种生态型羊草野外采集与移栽叶片的SDS-PAGE电泳图分析后,每个样品分别获得20～30条蛋白质条带,其中两个时期不同生态型之间稳定存在的差异条带有3条,并且可以大致确定其相对分子质量,初步推测其中可能有导致叶色差异的蛋白质.     

细菌呼吸活性与降解有机污染物效能研究

研究了饮用水处理系统中活性炭柱上获得六株细菌(编号为菌株1#-6#)的活性和降解有机污染物效能.采用微电极呼吸速率法研究细菌的呼吸活性.结果表明,2#,3#和5#三株细菌在所有实验检测条件下均具有较高的呼吸活性;降解预氧化松花江原水中有机物静态实验表明,六株细菌对有机污染物的去除能力大不相同,其中2#,3#和5#三株细菌的COD<,Mn>去除率为34.72%-43.72%,TOC去除率为46.24%-57.79%,体现出更好的环境适应能力和底物降解能力,即具有更强的代谢活性.此外,研究结果也证实了通过微电极呼吸速率测定法筛选活性菌株方法的可行性.     

人工神经网络耦合遗传算法优化细菌纤维素发酵培养基

细菌纤维素作为新型生物材料,已成为生物材料研究热点,但产量低限制了其进一步应用。选择合适的优化策略是实现产量提高的一个重要方法。本文在正交和均匀设计实验传统建模方法的基础上,运用人工神经网络模型结合遗传算法优化汉氏葡糖醋杆菌(Komagataeibacter hansenii HDM1-3)产细菌纤维素发酵培养基。结果表明,最佳培养基配方为葡萄糖3.98%、牛肉膏0.34%、酵母膏0.19%、磷酸氢二钠0.22%、磷酸氢二钾0.46%、乙醇2.23%。在此配方下,细菌纤维素产量最高达到2.87 g·L~(-1),与优化前培养基的产量相比提高了1.18倍。本研究优化了细菌纤维素发酵培养基参数,为细菌纤维素高产发酵及工业化推广应用提供了依据。     

生物炭对水溶液中四环素的吸附效果研究

以大豆秸秆生物炭和水稻秸秆生物炭为材料,探究其对水溶液中四环素的吸附效果,分别进行了吸附剂用量、振荡时间及pH值等因素对生物炭吸附四环素的影响实验.结果表明,对于大豆秸秆生物炭,酸性环境条件对吸附有抑制作用,吸附时间为60 min时效率最高,含盐量对吸附有抑制作用,添加量为100 mg时吸附效果最好;对于水稻秸秆生物炭,碱性环境条件对吸附有抑制作用,吸附时间为120min时效率最高,含盐量对吸附有抑制作用,添加量为80mg时吸附效果最好,等温吸附过程遵循Langmuir方程.     

中华鳖种群RAPD分析

选用14个随机引物对中华鳖基因组DNA进行了随机扩增DNA片段多态性（RAPD）分析，14个引物，在8个待检样品中共扩增出714条清晰的DNA片段，片段大小在200～3000bp之间，平均每一引物在每个样品中扩增了6．0条带，统计结果表明，中华鳖群体内平均相似率0．857，总平均带纹频率0．773，遗传变异率为0．227．研究表明，中华鳖为遗传共享度较高的群体。     

V_2O_5的含量对ZnO-B_2O_3-Bi_2O_3系无铅封接玻璃的性能影响

选取ZnO-B2O3-Bi2O3体系为研究对象,探讨V2O5的含量对玻璃的特征温度、热膨胀系数、耐水性、抗弯强度及热稳定性的影响.研究结果表明:随着V2O5含量的提高,逐步降低了玻璃的特征温度,但是过多的V2O5会影响玻璃的抗弯强度和热稳定性,而少量的V2O5对玻璃的膨胀系数以及耐水性能影响不大,当V2O5的含量在4%时,软化温度为475℃,平均线膨胀系数为7.587 6×10-6,抗弯强度为47.87MPa,在500℃烧结时玻璃不析晶,说明热稳定性良好.     

三江平原大豆根系和水稻根系土壤细菌的分离与鉴定

大豆根系和水稻根系土壤的微生物类群中,细菌数量最多,放线菌数量次之,真菌数量最少,且根系土壤微生物总数明显高于根外土壤微生物总数.对三江平原大豆根系和水稻根系土壤中的细菌进行分离,根据细菌个体特征、菌落形态特征及其生理生化特性进行初步鉴定.结果表明,大豆根系土壤中主要分布着芽孢杆菌属、黄单胞菌属、气单胞菌属、甲基单胞菌属、假单胞菌属、根瘤菌属6个菌属;水稻根系土壤中分布着微球菌属、黄杆菌属、根瘤菌属、奈瑟氏球菌属、葡萄球菌属5个菌属.同时,探讨了土壤部分理化性质对大豆和水稻根系细菌数量的影响,明确了根系细菌数量与土壤含水量、有机质含量、pH等有一定的相关性,对今后大豆和水稻田间施肥,提高粮食产量具有一定的指导意义.