荆芥、紫苏叶挥发油对TNFα诱导的内皮细胞ICAM-1表达的影响

目的　荆介、紫苏叶为常用解表药 ,前期的实验研究已证实二者的挥发油部位具有良好的抗炎作用。为了进一步揭示它们的抗炎作用机理 ,研究了荆芥及紫苏叶挥发油对TNFα诱导的内皮细胞ICAM - 1表达的影响。方法　大鼠灌胃荆芥、紫苏叶挥发油后 ,分离含药血清 ,用细胞ELISA法观察TNFα激活 12、2 4h后内皮细胞表面ICAM - 1的表达。实验结果与空白血清组比较 ,同时以美洛昔康血清作为阳性对照。结果　TNFα(10 0 0kU/L)激活 12、2 4h ,ICAM - 1的表达极显著地增加 ;荆芥挥发油血清 (灌胃量为 0 2ml/kg、0 1ml/kg)能极显著抑制TNFα激活 12h后ICAM - 1的表达 ;紫苏叶挥发油血清 (灌胃量为 5 μl/kg、2 μl/kg)能显著抑制TNFα激活 12、2 4h后ICAM - 1的表达。结论　荆芥、紫苏叶挥发油对TNFα诱导的内皮细胞ICAM 1的表达有明显抑制作用 ,可能正是通过这种作用阻止了血管内皮细胞与白细胞的粘附 ,抑制白细胞向血管外移行 ,从而发挥抗炎作用     

体外培养人角膜内皮细胞的UVB损伤及抗坏血酸的抗氧化保护作用研究

以非转染人角膜内皮(HCE)细胞系为体外实验模型系统研究了UVB氧化损伤、Asc抗氧化保护及其分子机理。体外培养的HCE细胞经UVB和/或Asc处理后,利用MTT和光镜对细胞的活力和形态进行了检测,利用8-羟基脱氧鸟苷免疫荧光染色对DNA的氧化损伤进行了检测,并利用二氢乙啶染色对胞内活性氧(ROS)的水平进行了检测。结果显示,100~800 mj/cm²的UVB辐射能剂量和时间依赖性地损伤HCE细胞的活力;200 mj/cm² UVB(自然太阳光中的平均辐射剂量)能引起HCE细胞发生皱缩,并显著增加细胞的DNA氧化损伤程度及胞内ROS水平;而1 mmol/L Asc不仅能显著增强HCE细胞的活力、促进细胞分裂,而且还能显著降低200 mj/cm² UVB所引起的DNA氧化损伤及胞内ROS水平。综上所述,UVB通过诱导ROS的产生进而引起DNA氧化损伤,对HCE细胞具有显著的氧化损伤作用;而Asc能够通过降低UVB诱导的ROS水平进而保护DNA免受氧化损伤,对HCE细胞的UVB损伤具有一定的抗氧化保护作用。本文研究结果对于利用Asc等抗氧化保护剂保护HCE细胞免受UVB氧化损伤具有一定的理论指导价值。     

局灶性脑梗死后缺氧诱导因子-1α基因的治疗作用及机制研究

目的:构建携带缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因的重组腺病毒载体,探索HIF-1α在成年大鼠局灶性脑梗死中的治疗作用及可能机制.方法:应用腺病毒表达系统AdEasy System构建携带缺氧诱导因子-1α和绿色荧光蛋白(GFP)的重组腺病毒(Ad-HIF-1α)并行PCR鉴定.建立大鼠线栓法大脑中动脉缺血再灌注模型.分为Ad-HIF-1α、腺病毒空载体(Ad)、生理盐水(NS)三组;将Ad-HIF-1α、Ad和NS分别注射到模型鼠梗死侧侧脑室.通过大体脑解剖和Nissl染色检测模型是否成功,原位杂交检测脑组织HIF-1αmRNA、VEGFmRNA、SDF-1αmRNA的表达差异,三组大鼠神经功能缺失评分和2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色评价Ad-HIF-1α对脑缺血的治疗效果.结果:大体脑解剖标本和Nissl染色均证明大脑中动脉缺血再灌注模型成功建立.经氯化铯梯度离心法纯化后Ad-HIF-1α的滴度为8.2×108pfu/ml,PCR鉴定表明Ad-HIF-1α构建成功.三组大鼠脑梗死后HIF-1αmRNA、VEGFmRNA和SDF-1αmRNA的表达均有明显增加,且均于72h达最高峰.Ad-HIF-1α组HIF-1αmRNA、VEGFmRNA和SDF-1αmRNA在72h的表达与Ad和NS组比较差异有统计学意义(P＜0.05),而Ad和NS组比较则差异无统计学意义(P＞0.05).Ad-HIF-1α治疗组72 hAd-HIF-1α治疗组神经功能缺失评分分别为1.6±0.7和0.9±0.6,与Ad组(分别为2.9±0.6和3.2±0.6)和NS组(分别为3.0±0.7和3.2±0.8)比较差异均有统计学意义(P＜0.05).72 h时脑组织TTC染色显示Ad-HIF-1α治疗组梗死体积为81.2 mm3±1.4mm3,与Ad组(173.9 mm3±1.3mm3)和NS组(171.7mm3±6.2mm3)比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:HIF-1α基因在成年大鼠局灶性脑梗死中具有积极的治疗作用,其作用机制不仅是通过上调抗缺氧基因或脑保护基因如VEGF的表达使缺氧的组织细胞保持氧稳定及耐受低氧状态,而且还通过上调修复基因如SDF-1α的表达达到修复受损的神经组织和重建神经系统的作用.     

Human endothelial senescence induced by IL-1α in vitro

Interleukin 1(IL-1) is an important proinflammatory cytokine that causes pleiotropic effects. Vascular endothelial cells stimulated by IL-1α can lead to the inflammatory response. Reactive oxygen species (ROS) are also generated at the site of inflammation and serve as an important factor against foreign invader. Here we report that long-term stimulation of human vein endothelial cells with IL-1α can accelerate their senescence associated with β-galactosidase activity. The flow cytometric analyses showed that most of the induced cells entered G0-G1 phase. DNA damage was more severe in senescent cells by comet assay. The induced cells by IL-1α had higher levels of ROS and malonyldialdehyde (MDA), lower activity of antioxidant enzymes and lower capacity of total antioxidant systems than control, which led to cell damage and cell degeneration, that is to say, which contributed to cellular senescence. Our results gave a direct proof to a new hypothesis-"the inflammation hypothesis of aging" on cellular level, and also provided a basis for the study on anti-aging and aging-related diseases.     

依折麦布对高迁移率族蛋白1诱导血管内皮细胞激活的影响机制研究

目的探讨依折麦布对高迁移率族蛋白1(HMGB1)诱导血管内皮细胞激活影响的分子机制.方法分离、培养雄性SD大鼠胸主动脉内皮细胞,分为空白对照组、HMGB1刺激组、依折麦布组(HMGB1刺激前10μmol/L依折麦布预处理)、CLI-095组(HMGB1刺激前1μmol/L CLI-095预处理).荧光定量分析中性粒细胞与内皮细胞的黏附能力;RT-PCR和Western blot检测内皮细胞中TLR4,ICAM-1、可溶性E选择素mRNA和蛋白表达水平;EMSA法检测NF-κb-p65的DNA结合活性.结果 HMGB1活化的内皮细胞与中性粒细胞黏附活力均明显高于空白对照组,差异具有统计学意义(P0.05);依折麦布组、CLI-095组内皮细胞与中性粒细胞黏附活力均明显低于HMGB1诱导组,差异具有统计学意义(P0.05).HMGB1刺激组的内皮细胞TLR4,mRNA和蛋白表达量明显高于空白对照组,差异具有统计学意义(P0.05);依折麦布组和CLI-095组mRNA和蛋白表达量均明显低于HMGB1组,差异具有统计学意义(P0.05).HMGB1组内皮细胞NF-κb p65亚单位核位移明显强于空白对照组,差异具有统计学意义(P0.05);依折麦布组和CLI-095组较HMGB1组核位移明显减弱,差异具有统计学意义(P0.05).HMGB1组ICAM-1、可溶性E选择素表达水平明显高于空白对照组,差异具有统计学意义(P0.05).而经依折麦布、CLI-095干预后可明显降低ICAM-1、可溶性E选择素表达水平,与HMGB1组之间差异具有统计学意义(P0.05).结论依折麦布可通过调节黏附分子(ICAM-1、可溶性E选择素)的表达而有效抑制HMGB1诱导的血管内皮细胞活化效应,其机制与抑制TLR4的表达和NF-κb激活有关.     

幼兔和成年兔感染兔出血热病毒后血清中IL-8、IL-10、TNF-α、TGF-β和MCP-1检测分析

兔出血症病毒(RHDV)是兔出血症的病原体,可导致成年兔大量死亡.研究表明,细胞因子在RHD致病中发挥了重要作用.为探索细胞因子在RHDV对幼兔和成年兔致病差异性中的作用机制,通过对幼兔(2周龄)和成年兔(3月龄)肌肉注射检测为RHDV核酸阳性的病兔肝脏悬液,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测感染RHDV后不同时间(0、12、24、36、48、60 h)血清中IL-8、IL-10、TNF-α、TGF-β和MCP-1的水平.ELISA结果显示,成年兔感染RHDV后血清中IL-8、IL-10、TNF-α、TGF-β和MCP-1水平在0～36 h显著升高(P<0.05),并在感染后36～48 h死亡.幼兔感染后血清中IL-8水平在24～60 h明显上升(P<0.05),TNF-α和TGF-β水平变化无明显规律,IL-10和MCP-1水平无明显变化,且未出现死亡现象.比较幼兔和成年兔上述细胞因子水平发现,成年兔感染后血清中IL-8、IL-10、TGF-β和MCP-1水平显著高于幼兔(P<0.05),TNF-α水平在感染后24 h左右高于幼兔(P<0.001),其余时间均...     

高糖、低氧对大鼠心肌微血管内皮细胞新生功能影响的体外研究

目的:探讨高糖、低氧对大鼠心肌微血管内皮细胞(CMEC)新生功能的影响.方法:体外培养成年大鼠CMEC,随机分为4组:正常对照组(NG组)、高糖组(HG组)、低氧组(HNG组)和高糖+低氧联合组(HHG组).Real-time PCR法检测各组CMEC的HIF-1α、VEGF的mRNA表达水平; CCK-8法检测各组CMEC的体外增殖能力;transwell小室实验评价各组CMEC的迁移能力;体外小管形成实验评价各组CMEC的成管能力.结果:(1) HIF-1α的mRNA表达水平:NG组与HG组之间、HNG组与HHG组之间无统计学差异(P 0. 05); HNG组明显高于NG组(P 0. 05),HHG组明显高于HG组(P 0. 05),表明低氧可促进CMEC的HIF-1αmRNA表达. VEGF的mRNA表达水平:NG组与HG组间无统计学差异(P 0. 05),HNG组明显高于HHG组(P 0. 05); HNG组明显高于NG组(P 0. 05),HHG组明显高于HG组(P 0. 05),表明高糖可抑制CMEC的VEGF mRNA表达,而低氧可促进其表达.(2)细胞的增殖能力:NG组明显高于HG组(P 0. 05),HNG组明显高于HHG组(P 0. 05); NG组明显高于HNG组(P 0. 05),HG组明显高于HHG组(P 0. 05),表明高糖、低氧均可抑制CMEC增殖.(3)细胞的迁移能力:NG组明显高于HG组(P 0. 05),HNG组明显高于HHG组(P 0. 05); NG组明显高于HNG组(P 0. 05),HG组明显高于HHG组(P 0. 05),表明高糖、低氧均可抑制CMEC迁移.(4)细胞的成管能力:NG组明显高于HG组(P 0. 05),HNG组明显高于HHG组(P 0. 05); NG组明显高于HNG组(P 0. 05),HG组明显高于HHG组(P 0. 05),表明高糖、低氧均可抑制CMEC小管形成能力.结论:高糖对CMEC的HIF-1αmRNA表达的影响不明显,但可明显抑制CMEC的VEGF mRNA表达;低氧可促进CMEC的HIF-1α和VEGF mRNA表达;高糖和低氧均可降低CMEC的增殖能力、迁移能力和成管能力,两者联合时作用更为明显.     

lL-1α在IgAN肾组织中的表达与疾病进展的关系

目的探讨IL-1α在IgAN肾组织中的表达与疾病进展的关系.方法对36例经光镜、免疫荧光、电镜等病理诊断为IgAN的肾组织进行了IL-1α免疫组织化学检测.结果IL-1α主要表达于肾小管上皮细胞内(近曲小管31/36;远曲小管25/36).在肾小球的毛细血管腔内侧(15/36)和肾小球靠球囊壁的肾小囊腔(10/36)亦可见IL-1α的表达.在肾小球系膜区无明显增宽时,IL-1α的表达率高.结论IL-1α在IgAN肾组织内主要位于肾小管上皮细胞内.在IgAN的进展过程中,IL-1α的表达率增强,此期如选用IL-1α受体拮抗剂进行治疗,可控制IgAN的进展.     

lL-1α在IgAN肾组织中的表达与疾病进展的关系

目的探讨IL-1α在IgAN肾组织中的表达与疾病进展的关系.方法对36例经光镜、免疫荧光、电镜等病理诊断为IgAN的肾组织进行了IL-1α免疫组织化学检测.结果IL-1α主要表达于肾小管上皮细胞内(近曲小管31/36;远曲小管25/36).在肾小球的毛细血管腔内侧(15/36)和肾小球靠球囊壁的肾小囊腔(10/36)亦可见IL-1α的表达.在肾小球系膜区无明显增宽时,IL-1α的表达率高.结论IL-1α在IgAN肾组织内主要位于肾小管上皮细胞内.在IgAN的进展过程中,IL-1α的表达率增强,此期如选用IL-1α受体拮抗剂进行治疗,可控制IgAN的进展.     

2型糖尿病患者的社区干预对血清IL-1、TNF-a的影响

探讨社区健康管理干预对2型糖尿病患者血清白细胞介素-1(IL-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响。将社区264名2型糖尿病患者随机分为2组,实验组177名给与社区健康管理干预,督促其控制血糖、控制血压等,干预期6月,对照组87名不干预,测定两组干预前后的糖化血红蛋白、血清IL-1、TNF-α水平。实验组干预后的血清IL-1、TNF-α水平较对照组显著下降(P0.05),糖化血红蛋白在两组间无显著差异。结论社区健康管理干预能显著降低2型糖尿病患者的血清IL-1、TNF-α水平,提示其可减轻2型糖尿病患者的血管炎症反应。     

AWP1抑制TNFα诱导的NF-κB转录活性

AWP1含有A20样锌指蛋白结构域。在人乳腺文库中克隆了AWP1 cDNA序列。双荧光报告基因检测系统证明过表达AWP1抑制TNFα诱导的NF-κB转录激活,并且AWP1与TNFα受体复合物中的TRAF2、IKKγ存在外源相互作用,为AWP1抑制TNFα信号通路的机制研究提供线索。     

旷展的SCGM（1，1）α0

对于有明显指数规律但却不能用SCGM(1，1)α0建模的一类数据，本文提出了建立SCGM(1，1)α0的改进方法，扩大了SCGM(1，1)α0适用范围，提高了建模精度。并用该方法预测了邯郸市未来工业用水万元产值取水量。     

PPARγ辅助活化因子1α及其在代谢调节中的作用

PPARγ辅助活化因子1α属于PGC-1转录辅助活化因子家族中的一员,在多种组织中特异性地参与代谢途径调节;它在葡萄糖、脂肪代谢及维持组织内能量稳态等方面发挥重要作用,并与肥胖、糖尿病、心肌病等疾病密切相关。     

双黄连口服液体外抗单纯疱疹病毒1型的初步探讨

目的探讨双黄连口服液体外抗单纯疱疹病毒1型(HSV-1)的作用.方法选用非洲绿猴肾细胞VERO作为体外培养靶细胞,建立HSV-1感染,用不同剂量的双黄连口服液处理HSV-1感染细胞,以50%组织细胞感染量(TCDI50),细胞病变效应(CPE)为评测指标;采用MTT法,RT-PCR及流式细胞技术作为检测手段并比较药物处理组与HSV-1感染组细胞间病毒表达的差异.结果浓度为标准剂量10%的口服液可明显抑制HSV-1 gD 基因mRNA的转录,选择性抑制HSV-1 DNA的合成;在标准药物剂量0.1%-10%范围内病毒感染组细胞与实验组细胞间凋亡呈现差异性.结论双黄连口服液对体外感染的HSV-1型病毒存在抑制作用,显示出一定的抗病毒活性.     

西洛他唑对脂多糖诱导的人THP-1单核细胞分泌TNF-α的影响及机制探讨

目的研究西洛他唑对脂多糖诱导的人THP-1单核细胞分泌TNF-α的影响,探讨西洛他唑对单核细胞的炎症调控作用。方法体外培养人THP-1单核细胞,分为对照组(A组)、LPS组(B组)、西洛他唑组(C组)、西洛他唑+SQ22536组(D组),C组和D组加入LPS刺激24 h。应用ELISA法检测各组细胞培养上清TNF-α水平,并测定各组细胞内c AMP浓度。结果西洛他唑能抑制LPS刺激的人THP-1单核细胞分泌TNF-α,同时升高细胞内c AMP浓度。结论西洛他唑可抑制LPS刺激的人THP-1单核细胞分泌TNF-α,这种作用可能与升高细胞内c AMP浓度有关。     

ERK1／2通路和血管内皮细胞在15-KETE诱导缺氧大鼠肺动脉收缩中的作用

目的用组织浴槽血管环技术研究细胞外信号调节激酶1／2（extracellularregulatedproteinkinasesl／2,ERKl／2）通路和血管内皮细胞在15-KETE诱导缺氧大鼠肺动脉收缩中的作用。方法16只体质量为（220±20）g清洁级Wistar大鼠随机分为2组（n=8）,正常对照组置于正常环境中饲养（FiO,=21％）,缺氧组置于缺氧的培养箱中饲养（FiO2：10％）,连续饲养9d后处死,游离直径约为0．5—1．0inIn肺内肺动脉（PA）。剪成3mm长的动脉环,在组织浴槽内进行张力研究。比较在15一KETE给药前后肺动脉环张力变化;机械法去除动脉环内皮,比较内皮完整和去内皮后,15一KETE对缺氧性肺动脉环的收缩作用;用ERKl／2上游激酶抑制剂U0126孵育肺动脉环,比较U0126孵育前后15-KETE对缺氧性肺动脉环的收缩作用;机械法去除动脉环内皮,再比较U0126孵育前后15-KETE对缺氧性肺动脉环的收缩作用。结果1）15-KETE对缺氧大鼠肺动脉环有收缩作用,呈浓度-效应关系,与正常对照组比较差异显著（P〈0．05）;2）内皮完整和内皮去除的肺动脉环,15-KETE对其缩血管作用均受到抑制,但差异显著（P〈0．05）;3）内皮完整肺动脉环,在U0126孵育前后,15-KETE的缩血管作用均受到抑制,但差异显著（P〈0．05）;4）内皮去除的肺动脉环,U0126孵育前后,15-KETE的缩血管作用也受到抑制,差异显著（P〈0．05）。结论15-KETE可浓度依赖性地收缩缺氧大鼠肺动脉环;15-KETE引起缺氧肺动脉收缩可能与ERK1／2信号转导通路和血管内皮细胞有关,并且位于平滑肌的ERKl／2通路也参与15-KETE诱导缺氧大鼠肺动脉环的收缩。     

山慈菇正丁醇提取物对NR8383细胞分泌的IL-1β和TNF-α水平的影响

为了探讨山慈菇正丁醇提取物对NR8383细胞(大鼠肺泡巨噬细胞)分泌的白介素-1β(interleukin-1,IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平的影响,通过实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)法检测TNF-α和IL-1β的mRNA水平,利用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immune sorbent assay,ELISA)检测细胞上清液中TNF-α和IL-1β的蛋白含量。结果显示:与空白对照组相比,终浓度1. 25 mg/m L的山慈菇正丁醇提取物可极显著降低R8383细胞分泌TNF-αmRNA水平和蛋白含量(P 0. 01);与空白对照组相比,终浓度1. 25 mg/m L山慈菇正丁醇提取物能极显著升高IL-1β的mRNA水平和蛋白含量(P 0. 01),同时0. 012 5 mg/m L山慈菇正丁醇提取物能极显著降低IL-1β的mRNA水平和蛋白含量(P 0. 01)。说明终浓度为1. 25 mg/m L的山慈菇正丁醇提取物可极显著调控NR8383细胞分泌的TNF-α和IL-1β的基因和蛋白含量。     

(1→3)-α-D葡聚糖的季铵盐合成及其抗菌活性(1→3)-α-D葡聚糖的季铵盐合成及其抗菌活性

来源于Penicillium chrysongenum的碱溶性 (1→3)-α-D葡聚糖与缩水甘油基三甲基季铵盐酸盐（glycidyl trimethylammonium chloride, GTMAC）反应，生成葡聚糖季铵盐。IR图谱中季铵基团上的甲基的变角振动峰1480cm^-1、伸缩振动峰2872cm^-1变化明显，¹H-NMR表征确定季铵基团在糖环2、4位连接。该葡聚糖的最低抑菌浓度对大肠杆菌为1.0mg/mL，对金黄色葡萄球菌为2.0mg/mL。细胞质释放检测结果显示，葡聚糖季铵盐通过作用于细菌细胞膜而发挥抗菌作用。     

兔抗猪α_1－AT抗血清的制备及其效价测定

采用完全弗氏佐剂乳化抗原，成功地制备了兔抗猪α＿１－ＡＴ抗血清，经免疫双扩散反应为单一沉淀线，抗血清的效价为１：１．６。     

低氧训练诱导骨骼肌细胞球蛋白、脑红蛋白和缺氧诱导因子-1α表达

选用健康雄性SD大鼠,应用实时荧光定量PCR法,观察不同训练条件下大鼠骨骼肌缺氧诱导因子-lα(HIF-1α)、细胞球蛋白、脑红蛋白基因表达变化.结果表明:低氧训练可增加骨骼肌HIF-lα和细胞球蛋白、脑红蛋白mRNA含量,骨骼肌组织HIF-lα表达的增加对细胞球蛋白基因表达具有促进作用.