盐生杜氏藻同步化及细胞周期的研究

盐生杜氏藻是一种海洋生活的单细胞藻类，细胞中具有细胞核，叶绿体等细胞器，细胞呈椭圆形，直径在15～20μm，人工配制的海水中培养。由于具有叶绿体，能进行光合作用，因此可以用光暗交替处理，诱导细胞同步法。Lor等人[1]报导用光暗交替诱导小眼虫得到较好的同步化结果，他指出对衣滴虫、小球藻。异变形藻等都可以用光暗交替法诱导同步化。盐生杜氏藻使用此法诱导同步化，并测定同步化后细胞周期，这方面还未见详细报道。本文就此作初步探讨。1材料与方法1.1盐生杜氏藻：来自山东海洋大学赠送，定名为Dunaliellabolt。a，采用人工配制…     

盐生杜氏藻和衣藻双结构域NAD+-GPD基因的生物信息学分析

盐生杜氏藻（Dunaliella salina）是极端耐盐的单细胞真核绿藻,依赖于NAD的3－磷酸甘油脱氢酶（NAD+-GPD）是盐生杜氏藻调渗物质——甘油合成的关键酶.盐生杜氏藻NAD+-GPD基因是第一个被发现含双结构域（SerB和GPD）的GPD基因.而双结构域可能是盐生杜氏藻具有极强耐盐性和快速合成甘油的关键.通过与莱茵衣藻基因组数据库比对,发现莱茵衣藻（Chlamydomonas reinhardtii）中也存在具有SerB和GPD结构域的NAD+-GPD基因序列.在对两个物种NAD+-GPD基因的基因结构、mRNA组成成分、编码蛋白及其理化性质和编码蛋白结构的分析中,发现二者具有较高的相似性.针对目前仅在盐藻和衣藻中发现含SerB和GPD结构域的NAD+-GPD基因这一现象,分别对SerB和GPD结构域同源基因的系统进化进行了分析.     

运城盐湖卤虫Artemia sinica饵料分析

Artemia Sinica为山西运城盐湖特有种．我们于1991年5月在运城盐化局一工段涝取成虫，立即用4％的福尔马林溶液浸制．将成虫50条取其消化遭，挤出内容物，客于100毫升蒸馏水并搅匀，取其中的水溶液做成50目装片，全部在显微镜下镜检．镜检结果如下：1．50目装片中所包括的种类：原生动物3种，藻类4种和有机质碎屑．2.50目装片中有机质碎屑最多，其次为绿色杜氏藻和盐生杜氏藻．隐杆藻属和原生动物则较少.在实验室人工饲养以盐生杜氏藻作为饵料效果最佳．     

盐生杜氏藻Dunaliella salina的生物学特性与培养研究

盐生杜兵藻富含β－胡萝卜素和蛋白质，适宜在高纬度、光照强的各种咸水环境中生长，对它的生物学特性和培养条件进行了研究，发现适宜于盐生杜氏藻生长的培养基主要成分为：２ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ，５ｍｍｏｌ／ＬＫＮＯ３，６．５ｍｍｏｌ／ＬＮａＨＣＯ３，５ｍｍｏｌ／ＬＭｇＳｏｒ，０．３ｍｍｏｌ／ＬＫＨ２ＰＯ４。     

氮、磷、硫对盐生杜氏藻色素积累的影响

研究了盐生杜氏藻(Dunaliella salina)在不同浓度氮、磷、硫等营养条件下对细胞积累β-胡萝卜素和叶绿素的影响．发现盐生杜氏藻细胞经过10d生长,在营养缺乏条件下其β-胡萝卜素和叶绿素的比率达到最大,积累β-胡萝卜素的最适条件是无氮、无磷和无硫,但是不利于盐生杜氏藻的生长．讨论了此结果的机理和意义,为利用盐生杜氏藻大规模生产β-胡萝卜素提供了理论依据．     

盐生杜氏藻的完整叶绿体分离

盐生杜氏藻(Dunaliella salina)是世界上最耐盐的一种单细胞真核绿藻,可在含0．1～5．0mol／L NaCl的培养液中正常生长．盐生杜氏藻细胞内的主要调渗物质是甘油,在甘油代谢途径中,3-磷酸甘油脱氢酶是一个关键酶．近年来的研究表明杜氏藻(Dunaliella tertiolecta)细胞质和叶绿体中都存在3-磷酸甘油脱氢酶的同工酶,且叶绿体上的同工酶与渗透调节作用直接相关,为了解D．satina中3-磷酸甘油脱氢酶同工酶的细胞定位和分布,我们通过冰浴超声波破碎和蔗糖密度梯度离心,获得盐生杜氏藻的完整叶绿体,用相差显微镜镜检、酶的活性分析等方法对其完整性作了初步分析。     

四种杀虫药物对盐生杜氏藻生长的致毒效应

研究4种杀虫药物对盐生杜氏藻生长的致毒效应,结果表明:虫敌、纤源净、马拉硫磷、虫水安均不同程度上抑制盐生杜氏藻的生长繁殖,超过一定浓度后引起藻体的负增长,同时采用回归方程求出了4种药物对盐生杜氏藻24、48、72、96 h的半效应浓度EC50.     

温度对杜氏藻生长和脂肪酸组成的影响

研究了不同温度对盐生杜氏藻(Dunaliella.salina)生长及脂肪酸组成的影响.结果表明:在20～32℃之间,提高培养温度和增加光照强度促进了盐生杜氏藻的生长;盐生杜氏藻的脂肪酸组分以C16和C18脂肪酸为主,随着培养温度的升高和光照强度的增加,藻株内饱和脂肪酸所占百分比例增加,多不饱和脂肪酸所占百分比例减小.     

杜氏盐藻hsp9O基因的克隆及胁迫条件下表达量的变化

利用RACE方法首次从杜氏盐藻中获得hsp90基因全长序列,并将其提交至GeneBank(Accession No:JQ735968).进一步研究表明,在热激与盐胁迫条件下杜氏盐藻hsp90基因的转录水平及蛋白表达水平出现明显上调,暗示该基因可能是杜氏盐藻细胞中与逆境响应相关的调控元件.     

杜氏盐藻hsp90基因的克隆及胁迫条件下表达量的变化

利用RACE方法首次从杜氏盐藻中获得hsp90基因全长序列,并将其提交至Gene-Bank(Accession No:JQ735968).进一步研究表明,在热激与盐胁迫条件下杜氏盐藻hsp90基因的转录水平及蛋白表达水平出现明显上调,暗示该基因可能是杜氏盐藻细胞中与逆境响应相关的调控元件.     

利用ITS序列对两个盐藻株的分子鉴定

对实验室长期保存的两个盐藻株(Dunaliella salina)核糖体rDNA的ITS(internal transcribed space)序列(ITS1 5.8S rDNA ITS2)用PCR技术扩增并克隆,经序列测定后,与从GenBank中获得的相关序列一起构建系统发育树.结果显示:其中一个(Dunaliella salinaSHU 01)与Dunaliella viridisCONC 002的距离最近,另一个(Dunaliella salinaSHU02)与Dunaliella salinaUTEX 1644的距离最近.因此分别命名为Dunaliella viridisSHU与Dunaliella salinaSHU.     

盐藻高效遗传转化方法的确立

盐藻由于其自身的优点已被开发为一种新型生物反应器,主要用于外源性蛋白的表达,但遗传转化环节是目前存在的限制瓶颈之一。本文通过基因枪法、电击法和玻璃珠法对盐藻进行了转化比较,对其转化效率、细胞损伤程度和各自的优缺点进行了分析,确立一种最为适合盐藻的转化方法。研究结果表明:玻璃珠法不仅具有转化率最高、对细胞损伤程度最轻外,而且具有操作简单、经济性好、可控性和重复性好等优点,最适合作为盐藻的转化方法。此外,本文还对影响玻璃珠转化法转化结果的若干因素进行了探讨分析,以期获得更为理想的转化结果,为今后从事盐藻转化研究提供指导和参考。     

表面活性剂脂肪醇聚氧乙烯醚对盐藻的毒性研究

以盐藻作为研究对象,研究脂肪醇聚氧乙烯醚（AE）对盐藻的毒性作用。分别使用含有浓度为0、2.5、5.0、10.0、20.0、40.0mg/L AE的营养液培养盐藻,每日记录细胞总数。在实验的第9d,收集藻液并分别对总谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）、过氧化氢（H2O2）、铜-锌超氧化物歧化酶（CuZn-SOD）、可溶性蛋白和叶绿素a含量进行测定。结果表明较高浓度的AE对藻类的生长具有一定的抑制作用;不同浓度的AE处理9d后,各处理组盐藻叶绿素a和T-GSH含量没有显著差异;4.0mg/L AE组盐藻可溶性蛋白含量显著低于对照组和0.25mg/L组（p〈0.05）;0.25mg/L组和4.0mg/L组MDA含量显著低于1.0mg/L组（p〈0.05）;2.0mg/L组和4.0mg/L组盐藻H2O2含量显著低于0.25mg/L组和0.5mg/L（p〈0.05）;AE浓度为0.25mg/L和1.0mg/L组盐藻中CuZn-SOD含量显著低于对照组和0.25mg/L组（p〈0.05）,AE浓度4.0mg/L组盐藻中CuZn-SOD含量显著高于与0.25、0.5、1.0mg/L组（p〈0.05）。证实AE对盐藻具有一定的毒性作用,为活化剂AE的合理使用和安全评价提供了理论依据。     

流加培养对杜氏盐藻生物量的影响

将微生物工程中的流加培养技术嫁接引用到海洋微藻的培养,对海洋微藻杜氏藻(Dunaliella salina)进行了分批培养、恒速流加培养和变速流加培养三种方法的比较实验。在采用流加技术培养杜氏盐藻中,建立了流加数学模型控制流加。实验结果表明:采用恒速流加培养技术和变速流加培养技术均可明显提高杜氏盐藻的生物量,在变速流加培养方式中,当流加因子A=0.194时,变速流加培养比分批培养方式中杜氏盐藻的生物量增加7~8倍。     

有机磷农药对海洋微藻的若干生物学效应

采用１４Ｃ示踪法和分光光度法,研究甲胺磷对三角褐指藻、球等鞭金藻和盐藻在生长繁殖、光合作用速率和生化组成的生物学效应．实验结果表明,在甲胺磷的胁迫下,３种微藻的生长都受到不同程度的抑制;球等鞭金藻、三角褐指藻和盐藻的７２ｈＥＣ５０分别为４３．０、１５．５和１２．５ｍｇ／Ｌ．甲胺磷对３种藻类光合作用速率和对球等鞭金藻细胞内的碳水化合物、脂类及蛋白质含量的影响有显著的差别     

盐度对盐生杜氏藻叶绿体超微结构的影响

研究不同盐度对盐生杜氏藻（ Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａｓａｌｉｎａ（ Ｄｕｎａｌ．） Ｔｅｏｄ ．） 叶绿体超微结构的影响．结果显示,在ＮａＣｌ 浓度为２ ．７ ｍｏｌ／Ｌ 的培养液中,其叶绿体为典型的杯状结构．在ＮａＣｌ 浓度从２ ．７ ｍｏｌ／Ｌ 增加到４ ．３ ｍｏｌ／Ｌ时,其杯状叶绿体逐渐离解为多个相互连结或分离的部分;叶绿体内的类囊体片层系统解体并出现大量的嗜锇质体小球;在分离的叶绿体间隙中形成多个线粒体．在培养液的ＮａＣｌ 浓度逐步从４ ．３ ｍｏｌ／Ｌ 降低到２ ．７ ｍｏｌ／Ｌ后,盐藻的叶绿体又逐步恢复为典型的杯状结构．由此可知,不同盐度下盐藻叶绿体的结构变化是一个可逆的过程,这种可逆变化是盐藻得以在高盐度,强光照,易蒸发的自然环境中生存的一种适应机制．     

不同浓度氮、磷对杜氏盐藻生长的影响

在实验室条件下,研究了不同氮(0、0.1、0.4、0.8、1.0、1.2 g/L)、磷(0、0.015、0.025、0.030、0.045、0.060 g/L)浓度下杜氏盐藻生长增殖的关系和特征,以及氮磷比(c(N)/c(P))变化等对该藻生长的影响。实验结果表明:杜氏盐藻对氮、磷有着较强的适应能力,浓度增大藻增长率增大,浓度继续增大反而抑制藻的增长,属于营养依赖型藻类。不同氮质量浓度梯度对杜氏盐藻生长具有显著性影响(P<0.05),但对杜氏盐藻生长率K的影响不显著(P>0.05),最适宜的氮浓度为1.0 g/L;不同磷质量浓度梯度对杜氏盐藻的生长和生长率K具有显著性的影响(P<0.05),最适宜的磷浓度为0.025 g/L。当c(N)/c(P)为40时,最适合杜氏盐藻的生长。