不同时间的乳化氟碳保存液处理对供体肺抗炎抗氧化能力及组织结构的影响

目的:观察乳化氟碳保存液(FCE)和UW液处理供体肺在不同时间对肺组织抗炎、抗氧化能力及其结构的影响.方法:选择48只约350~400 g SD雄性大鼠随机分为两组(FCE组与UW组),FCE组与UW组分别又随机各分为两个亚组.对每只大鼠进行麻醉、气管插管与机械通气后,剖胸,全身肝素化后将灌注管自大鼠右心室插入肺动脉,再用保存液进行灌注,灌注完后快速取下心肺组织置入相应的保存液中进行保存.乳化氟碳组(FCE)用乳化氟碳进行灌注与保存,一组保存6 h(FCE-6 h),另一组保存12 h(FCE-12 h).UW液组(UW)用UW液灌注与保存,保存方法及保存时间同FCE组.在相应时段取肺组织,检测白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、丙二醛(MDA)、髓过氧化酶(MPO)、超氧化物歧化酶(SOD)的水平并观察其组织结构变化.结果:(1)两组保存液处理6 h,肺组织MDA、MPO含量及病理积分显著低于12 h组(P0.05),SOD活性则显著高于12 h组(P0.05);(2)FCE组两个时段肺组织MPO含量及病理积分显著低于UW组(P0.05);(3)FCE组在病理改变较轻微,而UW组则较重.结论:与UW液相比,乳化氟碳同样具有抑制炎症,延缓并减轻缺血保存期肺损伤的能力,且乳化氟碳在两个时段的抗氧化能力均强于UW液.     

大鼠外周血单个核细胞保存方法研究

通过观察大鼠外周血单个核细胞（PBMCs）的形态,了解不同保存方法和不同保存时期对PBMCs活性和细胞周期分布的影响,建立其短期保存方法．用密度梯度离心法获得大鼠外周血单个核细胞,分别在RPMI1640培养液中4℃保存和冷冻保护剂中－80℃保存,并分别在第1－4天和第7天,14天,21天,28天,35天用台盼蓝染色法测定细胞活力,用流式细胞仪检测细胞周期．结果分离获得的PBMCs成活率为97．69％±1．59％,基本处于G0／G1期．PBMCs置4℃保存4d后,存活率在60．84％±2．75％;置－80℃保存35d后,存活率在78．54％±2．97％,PBMCs基本处于G0／G1期．最后得出－80℃低温保存方法对PBMCs活性和细胞周期检测有一定影响,但其活性率接近80％,是一种简便易行短期保存PBMCs的方法的结论．     

杨梅素通过PI3K/AKT/NF-κB信号通路对骨性关节炎发展的影响

目的:探讨杨梅素通过PI3K/AKT/NF-κB信号通路对骨性关节炎(OA)发展的缓解作用及其机制研究.方法:通过CCK-8法筛选出IL-1β诱导损伤的最适质量浓度;采用诱导损伤最适质量浓度的IL-1β构建体外骨性关节炎损伤模型,通过CCK-8测定不同浓度的杨梅素对损伤细胞存活率的影响,筛选杨梅素的最适作用浓度.细胞实验使用分离提取的软骨细胞,分为对照组、IL-1β模型组、杨梅素组;克隆形成实验检测各组细胞的增殖能力;流式细胞术检测各组细胞的凋亡能力;酶联免疫法检测各组细胞上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10的质量浓度;Western blot检测各种细胞中PI3K/AKT/NF-κB信号通路相关蛋白的表达情况.动物实验使用SD大鼠,分为假手术组、OA模型组、杨梅素组,并通过灌胃进行给药;Masson染色观察各组大鼠软骨组织的组织结构变化;ELISA检测各组大鼠关节液中TNF-α、IL-6和IL-10的质量浓度.结果:与质量浓度为0、1、5、50、100 ng/mL的IL-1β相比,当IL-1β的质量浓度为10 ng/mL时,细胞抑制率为48.36%(P0.01),接近半数致死量,因此IL-1β诱导损伤的最适质量浓度确定为10 ng/mL.与浓度为5、20μmol/L的杨梅素相比,当杨梅素浓度为10μmol/L时,能明显提高损伤后的软骨细胞的活性(P0.01),因此杨梅素的最适作用浓度选择为10μmol/L;杨梅素能提高软骨细胞的增殖能力(P0.05),降低软骨细胞的凋亡能力;同时使TNF-α、IL-6的质量浓度均减少(P0.05),IL-10的质量浓度增加(P0.05);杨梅素也能使软骨细胞中PI3K、AKT、NF-κB P65、IKKαβ、IKBα蛋白的磷酸化程度均下调(P0.05),IKBα蛋白表达上调;Masson结果显示:杨梅素使受损的软骨细胞形态变规则,软骨组织的胶原纤维排列变紧密,同时使大鼠关节液中TNF-α、IL-6的质量浓度均减少(P0.05),IL-10质量浓度增加(P0.05).结论:杨梅素可促进软骨细胞增殖,抑制软骨细胞的凋亡,抑制骨性关节炎炎症反应,抑制PI3K/AKT/NF-κB信号通路的激活,明显缓解关节软骨的退变,降低骨性关节炎的进展水平.     

人参多糖通过抑制ROS水平和凋亡保护H2O2诱导的心肌细胞氧化应激损伤

为探讨人参多糖缓解心肌氧化损伤的功效,利用过氧化氢(H2O2)诱导的H9c2大鼠心肌细胞建立体外心肌氧化损伤模型,利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞存活率,试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA),流式细胞术检测活性氧(ROS)和细胞凋亡,Western Blot法检测细胞凋亡相关蛋白.结果表明：与对照组(Con)比较,H2O2能够使细胞存活率显著下降(P<0.001);与H2O2诱导组(模型组,Mod)比较,6.25 μg/mL人参多糖预防治疗24 h将细胞存活率由(57.47±5.08)%提高到(85.65±4.28)%(P<0.001),说明人参多糖能够对抗H2O2诱导的细胞毒性作用.流式细胞术DCFH-DA染色结果显示：与Con组比较,H2O2显著升高细胞ROS水平;而人参多糖预防治疗24 h后细胞ROS水平降低,提示人参多糖能够抑制H2O2诱导的H9c2细胞活性氧水平升高,并通过降低MDA含量及提高SOD活性缓解氧化应激损伤.同时,人参多糖可通过增加H2O2诱导损伤引起的Bcl-2/Bax比值,降低凋亡相关蛋白表达来缓解氧化应激导致的细胞凋亡.总之,人参多糖通过抑制ROS水平和细胞凋亡保护心肌细胞氧化应激损伤,为阐述人参保护心脏功效机制及产品研发提供了实验依据.     

肝X受体α在小胶质细胞激活致神经元损伤中的作用研究

[目的]研究肝X受体alpha(LXRα)在小胶质细胞激活致神经元损伤中的作用.[方法]小鼠小胶质细胞株(BV2细胞)置于6孔培养板培养,分为对照组、Aβ组、干扰组、干扰+Aβ组、假干扰+Aβ组.应用倒置显微镜观察各组BV2细胞的形态学变化,Western blot方法检测LXRα蛋白表达变化,ELISA检测各组上清液中COX-2、iNOS的表达水平.收取BV2细胞上清液作为条件培养基用来培养人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞),并通过CCK-8和免疫荧光法检测SH-SY5Y细胞的存活率和凋亡蛋白Bax表达情况.[结果]与对照组相比,Aβ组及干扰组的BV2细胞表现为胞体变圆变大,细胞突起减少,呈阿米巴样活化状态,LXRα蛋白水平明显下调(P0.05),细胞上清液COX-2,iNOS的表达含量明显升高(P0.05),Aβ处理组和干扰组的细胞上清液明显引起SH-SY5Y细胞存活率降低、凋亡蛋白Bax表达增加(P0.05).与假干扰+Aβ组相比,干扰+Aβ组的细胞胞体变大,突起减少,LXRα蛋白表达减少,COX-2,iNOS的表达增加,干扰+Aβ组的细胞上清液导致SH-SY5Y细胞存活率降低,Bax表达增加(P0.05).[结论] LXRα参与调控Aβ诱导的小胶质细胞激活及炎症因子的释放,在AD的炎症机制中发挥重要作用.     

液氮下三种抗冻液对保存猪皮活力的比较研究

目的：寻求一种在液氮条件下冻存猪皮的最佳冷冻保护剂.方法：将新鲜巴马香猪皮肤消毒处理后分为3组,分别用A.20%二甲基亚砜（DMSO）、B.20%二甲基亚砜＋6%丙二醇（PG）、C.20%二甲基亚砜＋6%丙二醇＋0.5 M海藻糖（Trehalose）3种抗冻液作冻存处理后直接投入液氮保存,于15 d、30 d后复温进行活力检测.结果：0.5 mol/L海藻糖与二甲基亚砜、丙二醇联合作为抗冻液所处理的猪皮,复温后其活力明显高于其它两组.结论：海藻糖能有效提高低温储存皮肤的活力,医院在保存皮肤时可以在抗冻液中加入海藻糖以得到较高活力的猪皮用于临床.     

液氮下三种抗冻液对保存猪皮活力的比较研究

目的：寻求一种在液氮条件下冻存猪皮的最佳冷冻保护剂.方法：将新鲜巴马香猪皮肤消毒处理后分为3组,分别用A.20%二甲基亚砜（DMSO）、B.20%二甲基亚砜＋6%丙二醇（PG）、C.20%二甲基亚砜＋6%丙二醇＋0.5 M海藻糖（Trehalose）3种抗冻液作冻存处理后直接投入液氮保存,于15 d、30 d后复温进行活力检测.结果：0.5 mol/L海藻糖与二甲基亚砜、丙二醇联合作为抗冻液所处理的猪皮,复温后其活力明显高于其它两组.结论：海藻糖能有效提高低温储存皮肤的活力,医院在保存皮肤时可以在抗冻液中加入海藻糖以得到较高活力的猪皮用于临床.     

山药多糖对体外培养大鼠胰岛细胞活性及胰岛素分泌的影响

为评价山药多糖对胰岛细胞功能的影响,以不同质量浓度葡萄糖刺激胰岛素释放,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测胰岛β细胞活性,同时以反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测胰岛细胞的抗凋亡基因bcl-2的表达,研究山药多糖与大鼠胰岛细胞共培养对胰岛细胞活性与胰岛素分泌水平的影响,并对其影响机制进行探讨.结果发现,1600 mg/L组胰岛细胞活性稍有下降,但是与对照组没有显著差异(p0.05);其余各组随培养液中山药多糖质量浓度的增加,胰岛细胞活性增加.低糖或高糖质量浓度环境中实验组与对照组的胰岛素分泌没有显著差异(p0.05),RT-PCR发现实验组的bcl-2表达显著高于对照组(p0.05).800 mg/L山药多糖明显提高胰岛细胞的存活率,改善胰岛功能.     

牙周上皮细胞中CD24与Twist2的表达水平与牙周炎的关系

目的 探讨牙周上皮细胞中CD24多肽抗体和Twist2抗体的表达水平及与牙周炎的关系.方法 将培养生长良好的牙周膜上皮细胞随机分成3组,即对照组、实验1组和实验2组,其中,对照组用α-MEM培养液进行培养,实验1组用含1μg/mL LPS的α-MEM培养液进行培养,实验2组用含1μg/mL LPS的α-MEM培养液进行培养,并加入CD24多肽抗体.用LPS处理牙周细胞,模拟牙周炎炎性环境,将牙周细胞应用Trizol法提取总mRNA后,应用qRT-PCR法检测3组细胞中CD24 mRNA和Twist2 mRNA的表达水平.结果 经1μg/mL LPS刺激24 h后,CD24 mRNA、Twist2 mRNA的表达量显著增加,经CD24多肽抗体处理细胞后Twist2 mRNA的表达量降低(P<0.05).结论 牙周细胞的炎症反应引起CD24和Twist2表达增加,CD24表达受到抑制后,Twist2表达降低,结果显示:CD24参与调节牙周炎中Twist2的表达.     

龙牙楤木多糖提取工艺优化及体外抗氧化活性

目的 建立优化的龙牙楤木多糖水提取工艺,初步探讨其体外抗氧化活性。方法 应用单因素试验结合响应面法分析料液比、提取温度、提取时间、提取次数对龙牙楤木多糖得率的影响;通过苯酚硫酸法、间羟基联苯法、考马斯亮蓝法检测龙牙楤木多糖各类成分组成;通过分析体外自由基清除能力考察龙牙楤木多糖的抗氧化活性,构建PC12细胞氧化损伤模型,考察龙牙楤木多糖体外抗氧化作用。结果 按料液比m(g):V(mL)=1:10在91℃下水提3次,3.2 h/次,多糖得率预测值为4.38%,实际多糖得率为4.29%;响应面优化后所得多糖成分中多糖为21.39%,蛋白为7.9%,糖醛酸为1.08%;龙牙楤木多糖能够有效清除DPPH、超氧阴离子、羟基自由基,龙牙楤木多糖作用于氧化损伤的PC12细胞后,可显著提高细胞内SOD活性(P<0.05,P<0.01),降低MDA含量(P<0.05),提高细胞存活率。结论 该提取方法稳定可靠,制备的龙牙楤木多糖具有明显的体外抗氧化活性,可为防治阿尔兹海默病(AD)提供一定的理论依据。     

兔膝关节骨关节炎模型建立的探讨

摘要: 目的 探讨应用前交叉韧带和内外侧半月板切除的方法制作骨关节炎( OA) 动物模型的可行性及可靠性。 方法 成年雄性新西兰大白兔 20 只,于右后肢膝关节切断前交叉韧带和切除内外侧半月板,左后肢仅打开关节 囊,不对关节内部进行操作,观察术后兔子活动情况; 于第 2、6、10 周处死,观察其左、右两侧后肢膝关节软骨病理 改变。实验动物 2、6、10 周后取右后肢膝关节软骨为实验组,左侧肢体膝关节软骨标本为对照组,比较两组软骨病 变情况。结果 2、6、10 周后,从实验动物活动表现和大体标本观察,兔右后肢膝关节均呈典型的 OA 特征。结论 前交叉韧带和内外侧半月板切除是一个制作 OA 动物模型的较为理想的方法。     

用地塞米松冷藏保存的离体肺顺应性的变化

目的观察用地塞米松冷藏保存的离体肺顺应性的变化。方法将32只家兔肺随机均分至对照组、用地塞米松冷藏(4℃)保存24 h组7、2 h组和120 h组。对照组:测定室温条件下的肺顺应性。冷藏组:在相应时间取出肺,室温条件下复温后,置入生理盐水中,测定注气(生理盐水)和抽气(生理盐水)过程中,肺容积在10mL、20mL、30mL时的肺的顺应性。结果各组与对照组比较,均存在显著性差异,P<0.05或P<0.01。结论用地塞米松冷藏保存后离体肺顺应性增强,其影响程度随冷藏时间增加而增大。     

不同保鲜措施对褚橙保鲜效果的影响

以云南褚橙为实验材料,从失重率、变质指数、维生素C变化率、可溶性糖变化率4个方面的指标来探究薄膜保鲜、低温保鲜、抑菌液处理保鲜和综合处理保鲜对橙子保鲜效果的影响.结果表明橙子放置一周后出现变质现象,各组分维生素C含量均有下降趋势,水分下降趋势更为明显.不同处理中,综合处理保鲜组效果最好,其次为低温保鲜组和薄膜保鲜组,但无论使用何种保鲜方式橙子品质都有所下降.     

中华鲟囊胚细胞的长期保存及其克隆胚胎发育观察

为保存濒危鱼类中华鲟种质资源,在0、-20、-80、-196℃4种不同的温度下对其囊胚细胞进行了长期保存试验,细胞存活期分别为10d、30d和2年,在液氮中(-196℃)保存2年后仍有60.7%存活率;用冷冻复苏后的细胞进行核移植,并对克隆胚胎的发育进行了观察.共移植417枚卵,获得2尾克隆幼鲟,成功率为0.48%,表明长期冷冻保存的囊胚细胞仍具有发育全能性,通过克隆技术能获得存活个体.此项技术为濒危物种的保护开辟了新途径.     

纳豆激酶高产菌株产酶特点及其干燥工艺的研究

在分析菌株产酶特点的基础上,对纳豆激酶(NK)制剂的干燥技术及其保存效果进行了实验研究.结果表明,不同NK菌株的产酶特征有明显差别;冷冻干燥和静态微波真空干燥都可用于纳豆激酶的干燥处理,其中冷冻干燥适用于纳豆激酶实验室干燥,而静态微波真空干燥适用于纳豆激酶制剂的规模化干燥;同时静态微波真空干燥时温度以不超过50℃为宜,温度过高则NK活性急剧下降,而且物料颜色变黑;NK经过干燥处理后室温贮藏24个月时,NK活性仍可达到其原始酶活的80%以上,研究结果为纳豆激酶制剂的产业化开发和应用提供了实验数据.     

不同温度贮藏对秀珍菇SOD和POD活性的影响

探讨了不同温度和贮藏条件下秀珍菇SOD和POD活性与商品性状的关系.结果表明,采用PE膜4℃条件下密封贮藏效果好,此时菇体色泽正常,失水率只有3.690%(8 d);低温能有效地抑制采后菇体内POD的活性和褐变程度,维持SOD的活性;贮藏温度对保鲜期的影响是贮藏温度愈低,保鲜期愈长,4℃下可保鲜8 d以上.     

培养原代小鼠组织细胞检验细胞实验室技术操作规程

目的通过培养小鼠原代组织细胞,检验本科室己建立的一套细胞实验室技术操作规程能否满足细胞培养要求。方法培养小鼠原代成骨细胞、软骨细胞、心肌细胞、肝细胞、肺部细胞、脑部细胞、骨髓间充质细胞和胚胎成纤维细胞。计算原代培养成活率、传代成活率、冷冻及复苏成活率。结果成骨细胞、软骨细胞、心肌细胞、肝细胞、肺部细胞、脑部细胞、骨髓间充质细胞、胚胎成纤维细胞原代培养成活率分别为89%、96%、100%、100%、100%、80%、100%和90%;传代成活率分别为76%、93%、100%、92%、100%、66%、80%和92%;冷冻及复苏成活率分别为100%、100%、100%、100%、100%、100%、100%和100%。结论通过计算KM小鼠8种组织细胞原代培养、传代、冷冻与复苏的成活率,证明现有的细胞室技术操作规程基本上能够保证成功培养出常规原代细胞,并能传代、冷冻和复苏。     

天然生育酚抗氧化活性的研究

对从大豆脱臭馏出物中提取的生育酚浓缩物,分别在80、100、130℃下用电导法(OSI法)及在63±2℃下用烘箱法对其抗氧化活性和其它抗氧化剂作了比较研究.结果表明,其抗氧化活性远强于合成的α-生育酚,在63±2℃的烘箱中和BHA基本相当,在100℃的OSI实验中其抗氧化活性和BHT基本相当,略弱于TBHQ,并且在100℃猪油中浓度高达0.32%时未表现促氧化现象.     

琐琐葡萄多糖对PC12细胞损伤的神经保护作用

 体外培养PC12细胞,采用20μmol/L β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)作用24h诱导细胞损伤,建立阿尔茨海默病(AD)细胞模型,研究琐琐葡萄多糖(VTP)对PC12细胞损伤的神经保护作用。设立对照组、模型组和VTP保护组(20,40,80μg/mL),CCK-8法检测各组细胞的存活率,乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞膜通透性及完整性,化学比色法测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果显示,20,40,80μg/mL VTP可提高PC12细胞存活率,减少LDH渗漏,增加SOD活力,减少MDA含量,降低细胞凋亡率,与模型组比较有显著差异(P<0.01)。由此推论,VTP对Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡和氧化损伤具有明显的保护作用。