林可霉素菌种选育及摇瓶培养基的优化

以林可霉素生产菌L10-18林可链霉菌(Streptomyces linloinensis)为出发菌株,采用紫外线(UV)、甲基磺酸乙酯(EMS)进行双重复合诱变处理,以终点产物林可霉素的产率为选择压力进行菌株筛选,结果表明,诱变得到的林可霉素抗性突变株L13-6-3发酵水平比出发菌株提高14.1%.再经过培养基优化,其组成为葡萄糖12 g/L,豆饼粉3.0 g/L,(NH_4)_2S0_40.6 g/L,玉米浆0.2 g/L的条件下,诱变菌株发酵水平再提高5.2%.     

脱氮假单胞菌发酵生产维生素B12高产菌株的选育

以维生素B12生产菌株脱氮假单胞菌05-04为出发菌株,采用紫外线和5-澳尿嘧啶复合诱变处理,选育到一株抗5-澳尿嘧啶突变株5-BU-3-5,该菌株经摇瓶发酵,发酵单位较出发菌株提高了18.0%.该菌株特性优良,经57m3发酵罐试验,平均发酵单位提高8.9%,是一株性状较稳定可深入开发研究的优良菌株.     

磁场条件下Fe~(2+)对产聚唾液酸大肠杆菌的诱变选育

以产聚唾液酸(polysialic acid,PSA)的大肠杆菌(Escherichia coli)为出发菌株,在磁场条件下利用Fe~(2+)对该菌种进行多轮诱变选育,获得具有高产性能的诱变菌株,在5L发酵罐进行发酵验证.结果表明:在0.5T磁场条件下,Fe~(2+)的最佳诱变质量浓度为90mg·L~(-1);经过5轮诱变和选育,PSA的摇瓶发酵水平从1.09g·L~(-1)提高到2.24g·L~(-1);5L发酵罐发酵水平从4.79g·L~(-1)提高到9.22g·L~(-1),产量提高了92%.     

环孢菌素A产生菌诱变育种及发酵条件研究

采用UV、NTG复合诱变的方法对产环孢菌素A的茄病镰刀菌(Fusarinm solani)进行诱变处理,在含制霉菌素的平板上筛选到产生环孢菌素A水平较高的突变菌株FS-un26,并对突变菌株的发酵条件进行了优化研究,使环孢菌素产量比出发菌株提高了20.6%.     

2-脱氧葡萄糖抗性黑曲霉高产柠檬酸突变株的选育

以黑曲霉 W3为出发菌株 ,通过 60 Co-γ射线诱变 ,在以甘油为碳源的基本培养基上 ,选育出2 -脱氧葡萄糖 (2 - DG)抗性突变株。以玉米粉为原料的柠檬酸发酵的结果表明 ,产酸高于出发菌株(8.4 8g/ 10 0 m L )的突变株约占 13.5% ,其中突变株 KI- 5产酸比 W3菌株提高 18%。     

产乳酸链球菌素的乳酸乳球菌的等离子体诱变选育

采用产乳酸链球菌素(Nisin)的乳酸乳球菌为出发菌株,在含有高浓度Nisin的固体平板上,筛选出了耐受10 000IU/mL Nisin的乳酸乳球菌菌株,其发酵单位达到1 680IU/mL。以此菌株为起始菌株进行常压、室温等离子体诱变,利用24方孔深孔板快速筛选高产Nisin的突变株。结果表明,在诱变菌株的存活率为3%的条件下获得的突变株的正突变率达到27.3%。通过摇瓶发酵进一步考察初步筛选的正突变株的Nisin发酵水平,发现有一个突变株发酵Nisin的活性达到6 120IU/mL。     

He-Ne激光复合诱变选育柠檬酸高产菌

柠檬酸产生菌黑曲霉经多次物理、化学诱变处理后会对其产生一定的抗性,在菌种改良过程中不易得到优良高产菌株。为此,以黑曲霉(Aspergillus niger)28#为出发菌株,采用金属盐类化合物—LiCl处理黑曲霉的孢子,然后用He-Ne激光辐照对柠檬酸发酵菌黑曲霉进行复合诱变。结果表明,各实验组发生了明显的不同变化,说明该方法能诱发黑曲霉细胞的遗传变异,适合于菌种的改良选育。研究采用玉米粉为原料,摇瓶发酵时间72h,发酵温度35±1℃,通过溴甲酚绿指示性平板辅助筛选和摇瓶发酵,筛选出了3株柠檬酸发酵高产突变菌株,柠檬酸产酸率提高了19.29%,转化率从87.07%提高到103.86%,其中菌株L42遗传相对稳定,可作为进一步诱变筛选的出发菌株。     

利福霉素产生菌诱变育种研究

用离子束及离子束和紫外复合因子诱变处理利福霉素产生菌 ,得到比对照菌株发酵效价提高 10 %以上的菌株共 13株 ,其中提高幅度最大可达 4 2 .70 % ,产生高产株最多的诱变剂量为 3× 10 1 4/ cm2 N+ ,而产量最高菌株的诱变剂量是 7× 10 1 5/ cm2 N+ .产生高产株较多的诱变剂量并不一定就是产生增产幅度最大菌株的诱变剂量 .     

微波诱变选育产物耐受型地衣芽胞杆菌以提高杆菌肽发酵水平

杆菌肽是一种重要的饲料添加剂,其发酵生产过程中存在产物反馈抑制现象,选育产物耐受型生产菌可提高发酵水平。以Bacillus licheniformis Y822为出发菌株,使用微波诱变技术选育产物耐受型菌株,进一步以敏感指示菌复筛,筛选杆菌肽高产菌株。选育得到产物耐受型生产菌Bacillus licheniformis Y8228X,杆菌肽产量和产率分别达到847.28 U/m L和16.74 U/(m L·h),与出发菌株相比发酵水平显著提高。微波诱变结合产物耐受型菌株筛选是一种选育杆菌肽高产菌株的快速、有效方法。     

使用微波诱变选育产物耐受型地衣芽胞杆菌以提高杆菌肽发酵水平

【目的】杆菌肽是一种重要的饲料添加剂,其发酵生产过程中存在产物反馈抑制现象,选育产物耐受型生产菌对于提高发酵水平必要。【方法】以Bacillus licheniformisY822为出发菌株,使用微波诱变技术选育产物耐受型菌株,进一步以敏感指示菌复筛,筛选杆菌肽高产菌株。【结果】选育得到产物耐受型生产菌Bacillus licheniformis Y8228X,杆菌肽产量和产率分别达到847.28 U/mL和16.74 U/mL/h,与出发菌株相比发酵水平显著提高。【结论】微波诱变结合产物耐受型菌株筛选是一种选育杆菌肽高产菌株的快速、有效方法。     

2-酮基-L-古龙酸高产菌株的选育

实验采用离子注入技术对"二步发酵法"生产维生素C中的伴生菌-苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis)进行处理,筛选维生素C的前体2 酮基 L 古龙酸的高产伴生菌菌株,以提高发酵生产水平。经过初筛、复筛,获得了使产酸活性提高的突变株,在筛选的646株菌中,有3株菌使收率提高了1-4%。     

培养温度对多拷贝毕赤酵母猪胰岛素前体的分泌表达和生理特性影响(英文)

研究了培养温度对多拷贝毕赤酵母分泌表达猪胰岛素前体(PIP)的生理特性的影响。将多拷贝重组菌A2(12拷贝)和A3(18拷贝)分别在25℃和30℃培养,25℃培养时PIP表达水平分别比30℃培养时提高了40%和32%,而A3细胞的存活率提高了20%。对A3细胞内相关蛋白折叠和氧化程度的KAR2,PDI1,GLR和TRR1基因转录水平分析发现,相比30℃培养25℃培养时减少了16%~35%,这表明多拷贝重组A3菌株在低温培养时比高温培养在蛋白折叠和氧化协廹响应有明显的减缓效应,从而导致外源蛋白表达提高了40%。     

HIV/HCV共感染患者念珠菌检出情况及相关研究

目的通过研究101例HIV/HCV共感染患者念珠菌检出情况,分析其可能的相关因素.方法采集101例HIV/HCV共感染患者口腔、皮肤、指甲标本,采用CHROMagar念珠菌显色培养基培养、45℃生长试验及API-20C-AUX鉴定系统鉴定到种,同时进行单因素和多因素分析.结果 101例HIV/HCV共感染患者中有44例(43.6%)检出念珠菌,所分离到的44株念珠菌中,有19株白念珠菌(43.2%),9株近平滑念珠菌(20.5%),8株季也蒙念珠菌(18.2%),1株为热带念珠菌(2.3%),1株克柔念珠菌(2.3%),5株涎沫假丝酵母菌(11.4%),1株产朊假丝酵母(2.3%).通过单因素和多因素分析发现:该人群念珠菌检出率的CD4计数、病毒载量比较差异具有统计学意义(P0.01).结论 HIV/HCV共感染患者念珠菌主要菌种是白念珠菌、近平滑念珠菌和季也蒙念珠菌;检出率与CD4计数、病毒载量高度相关;检出率可能对HIV/HCV共感染患者判断临床预后有一定参考价值.     

单核细胞增多性李斯特菌对人、鼠脑微血管内皮细胞黏附、侵袭、增殖差异性分析

为探究单核细胞增多性李斯特菌(LM)不同菌株对脑微血管内皮细胞黏附,侵袭以及在细胞内增殖的差异,本实验利用LM90SB2、LM3、LM4,塞氏李斯特菌(L.seeligeri),无害李斯特菌(L.innocua)感染脑微血管内皮细胞,采用BHI平板计数,测定细菌黏附率、侵袭率及不同时间细胞内增殖情况。结果表明:LM90SB2、LM3、LM4对脑微血管内皮细胞黏附率为3.14%~7.83%,统计学分析其差异不显著;LM90SB2、LM3、LM4对人/鼠脑微血管内皮细胞侵袭率(0.036%~0.128%)均大于L.seeligeri(0.0315%、0.00148%),L.innocua不侵袭脑微血管内皮细胞。LM90SB2、LM3、LM4对人/鼠2种细胞的侵袭率存在显著差异(P0.05),临床分离株LM90SB2增殖速度、菌量及持续时间明显高于其它菌株。以上结果提示LM不同菌株的毒力不同。     

利用拮抗细菌防治棉花黄萎病

本项目研究中,从植物根围、根表和植物内部分离到1345株细菌,并测定了他们对棉花黄萎病菌的抑菌性。118株细菌表现较强的抑菌性,抑菌率≥50％。其中25个菌株的抑菌率≥。70％,93个菌株的抑菌率为50％～70％。另外从棉花黄萎菌的微菌核际分离到57株细菌,其中30株细菌能显著地抑制棉花黄萎菌微菌核的菌落生长(5个菌株完全抑制微菌核的萌发和生长,15菌株的抑菌率为40％～97％)。这些拮抗菌的培养滤液也能抑制棉花黄萎菌的生长。室内盆栽实验证明,应用拮抗菌处理棉花种子,有10个拮抗细菌能极显著地防治棉花黄萎病,其中4个菌株(ICB-18、NCD-2、CS-25和CS--27)的防病效果极好,防病效果为72．3％～81．4％,3个菌株(C-94、C-28和NCD-25)的防病效果为55．7％～61．9％。1999～2000年的2年田间小区试验中。NCD-2菌株对棉花黄萎病防治效果显著,并且显著优于国外商品化生防制剂TF,该菌株连续两年的防病效果平均为85．4％;另外4个菌株(ICB-18、CS-25、C-94和C-28)亦能显著防治棉花黄萎病,但防病效果与国外商品化生防制剂TF相当。在田间示范中,应用生防细菌NCD-2制剂拌种后直接播种技术防治棉花黄萎病,防病效果达到51．2％。同时应用生防细菌NCD-2制剂拌种育苗移栽技术防治棉花黄萎病,防病效果达到52．6％并且增产22．85％。本文同时测定了NCD-2对主要大田作物的安全性,证明其对小麦、玉米、棉花、马铃薯、黄瓜、茄子和大豆等7种作物没有致病性,并且对这些作物的出苗、生长和发育没有不良影响。     

不同菌株对猪粪的除臭效果研究

以本实验室保存的8种菌株对猪粪进行处理,以氨气（NH3）和硫化氢（H2S）的去除率为除臭指标,以有效磷含量为指标判定除臭后粪肥的肥力,并对菌株2、B1和PI进行了革兰氏染色鉴定.结果表明：菌株1、2能明显抑制猪粪中NH3的产生,去除率分别为56.99%和53.31%;菌株14、B1、W-1和Dn-101能明显抑制猪粪中H2S的产生,去除率分别为81.64%、66.29%、65.66%和60.13%;菌株2、B1、PI处理后,猪粪样品有效磷含量的增加率分别为55.59%、26.82%和27.23%.     

黄曲霉毒素B1(AFB1)降解菌的筛选鉴定

以香豆素为唯一碳源和能源的培养基进行初筛,然后将菌株与黄曲霉毒素B1(AFB1)共培养后测定AFB1降解率的方法进行复筛,最后筛选出4株高活性AFB,降解菌;其中G3-21和T1-4-1对AFB1降解率可达到65％,Y2-30和T1-3-7对AFB1的降解率达到45％以上,形态和16S rDNA序列分析鉴定结果表明,G...     

水产养殖水体好氧同时硝化-反硝化脱氮的研究

利用筛选和分离的7株脱氮微生物，在好氧条件下将氨氮转化为亚硝酸氮，随即在好氧反硝化茵的作用下还原为氮气排放．将上述菌株固定在PVA凝胶膜中，研究了水产养殖水体中氨氮、硝酸氮和亚硝酸氮在PVA凝胶膜中的扩散性能和转化脱氮过程，结果表明，氨氮、硝酸氮和亚硝酸氮在PVA浓度为15％，细胞浓度为40g／L凝胶膜中，扩散系数分别为0．55m^2／s，0．46m^2／s，0．45m^2／s．整个生物脱氮过程历时较短，36h内对200mg／L的氨氮去除率达99％，而且无中间产物亚硝酸氮的积累，固定化微生物生长的适宜pH范围为7～9，最适温度为30℃；与游离的硝化细菌和反硝化细菌相比，固定化硝化茵是游离硝化茵对氨氧化速率的70％，固定化反硝化茵是游离反硝化茵对亚硝酸氮还原速率的74％．经过20d的连续处理，固定化微生物的稳定性远大于游离微生物，28d后，游离微生物在反应器内的浓度几乎为零，而固定化微生物的浓度和活性几乎不变．     

降解水体中六六六低温复合菌的筛选

在低温条件（≤9 ℃）下, 对实验室已有降解有机污染物的12种菌进行对比实验, 筛选出3种降解六六六的有效菌, 同时利用正交试验确定了3种单菌的最佳降解条件, 并在同一条件(pH=6.5, 碳氮源为0.8 g/L NH₄Cl和0.6 g/L KH₂PO₄)下, 将驯化后的3种单菌按C²₃和C³₃组合, 进行复合菌的降解效果实验. 结果表明, C³₃组合后的复合菌对六六六的降解效率均高于单菌和C²₃组合后的复合菌, 且最高降解率发生在1号菌、 2号菌和3号菌的投加量之比为1 ∶5 ∶3时, 达到63.27%.     

雌核发育鲢各系及与普通鲢生长的比较研究

在相同池塘养殖条件下,迸行了雌核发育鲢各系(当年鱼)及与普通鲢的生长对比试验。结果表明:所选育的雌核发育鲢1系、2系间无显著差异,杂交系较1系、2系呈一般显著性差异(P<0.05);雌核发育鲢较普通鲢生长快,平均体长增长快7％以上,体重增长快14％以上,呈显著差异(P<0.01);其中雌核发育鲢杂交生长最快,其体重增长比普通鲢快23.8％,体长增长比普通鲢快12.4％,呈非常显著差异(P<0.005)。密度越稀,增长越快,雌核发育鲢各系成活率(83.4％以上)均高于普通鲢(64.8％),且雌核鲢体型较普通鲢肥厚。