达旦黄与氨基糖苷类抗生素相互作用的分光光度研究及其分析应用

在弱酸性溶液中氨基糖苷类抗生素(AGs)与达旦黄(TY)反应时能导致染料褪色, 其最大褪色波长位于409 nm处, 此反应可用于褪色光度法测定某些氨基糖苷类抗生素, 如硫酸卡那霉素、硫酸庆大霉素和硫酸妥布霉素等. 其摩尔吸光系数(ε/×104 L·mol-1·cm-1)分别为2 0,1 5和2 5. 考察了褪色反应的光谱特征、适宜的反应条件和共存物质的影响. 结果表明: 用褪色光度法测定氨基糖苷类抗生素, 不仅具有较高的灵敏度和较好的选择性, 而且简便、快速. 用于市售氨基糖苷类抗生素注射液含量的测定和血清样品的分析, 结果令人满意.     

Clostridium butyricum蔗糖磷酸化酶的酶学性质及其功能研究

本研究克隆表达丁酸梭菌Clostridium butyricum DSM10702菌株的蔗糖磷酸化酶基因,并探究重组酶的酶学性质和转糖苷功能。从丁酸梭菌C.butyricum DSM10702菌株中克隆蔗糖磷酸化酶基因cbsp,构建重组表达质粒pQE30-cbsp并在大肠杆菌Escherichia coli XL1-blue中诱导表达;将重组蛋白经镍柱纯化后,进行酶学性质和转糖苷功能研究。实验结果表明,以蔗糖为底物,重组酶Cbsp的最适温度为45℃、最适pH为7.0、V_max和K_m分别为(957±23.29)μmol·mg^-1·min^-1和(62.4±4.749) mmol·L^-1。当以葡萄糖-1-磷酸(G-1-P)为糖基供体时,重组酶Cbsp对于多数单糖、糖醇类、(-)-儿茶素、己基-β-D-吡喃葡萄糖苷和L-抗坏血酸表现出转糖苷活性。以上研究结果可丰富蔗糖磷酸化酶相关数据库,为其应用研究提供参考。     

2—氨基—2—2脱氧—β—D—吡喃糖苷合成中氨基保护基的研究进展

介绍了近年来β－1，2－trans-氨基糖苷合成过程中使用邻基参与性的氨基保护基，描述了不同氨基保护基保护的糖基给体在糖苷化反应中实现立体选择性控制的机理以及它们所保护的糖基给体的应用。     

临床分离MRSA中氨基糖苷类双功能修饰酶AAC(6)′-APH(2″)的克隆表达与活性测定

双功能酶AAC(6′)-APH(2″)是一种重要的氨基糖苷类抗生素钝化酶,从临床分离出的6株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的总DNA中克隆得到AAC(6′)-APH(2″)基因,将该基因插入质粒pET-28a中构建表达载体,然后将该重组质粒转入大肠杆菌BL21进行异源表达,在IPTG的诱导下产生大量可溶性目标重组蛋白,该重组蛋白经亲和层析分离纯化,SDS-PAGE鉴定纯度大于90%;建立了此双功能酶的体外测活方法,为建立氨基糖苷类抗生素双功能酶抑制剂筛选模型奠定基础.     

Trichoderma reesei纤维素水解酶的糖苷合成性质

通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(从(Trichoderma reesei天然纤维素水解酶中分离纯化得到了一种相对分子质量约为65 000的蛋白组分.分别以pNP-Glu、pNP-Gal、oNP-Gal和Avicel作为底物,均检出该组分的水解活性.此外该酶对CMC-Na有可被测出的弱活性.以pNP-Glu为底物,45℃时,其水解酶性质的米氏常数Km=3.04 mg/mL,Vmax=3.77 μmol/min.用DNS法和对硝基苯酚法(仅对含有对硝基酚结构的底物pNP-Glu、pNP-Gal和oNP-Gal)分别检测了在180 min反应时段内产物还原糖和对硝基苯酚的含量变化,结果显示在封闭的反应体系中有明显的可逆反应存在,并出现了周期性振荡的特征,有糖苷合成活性的表现,水解产生还原糖和对硝基苯酚的量,呈现出分别为25.43±8.34 min和36.25±2.50 min的含量增减振荡周期.与此同时,为了证实该酶糖苷合成活性的存在,以葡萄糖作为底物与酶反应,得到了7.00±4.83 min的葡萄糖含量周期性波状振荡结果.对底物为pNP-Glu反应15 min后的产物作乙酰化处理GC/MS分析,结果产物中有含二糖结构的产类型,揭示了这个水解酶的糖苷合成的特点.这是首次从Trichoderma reesei纤维素水解酶中分离得到了具有糖苷合成活性的酶.     

2-氨基-2-脱氧-β-D-吡喃糖苷合成中氨基保护基的研究进展

介绍了近年来β-1,2-trans-氨基糖苷合成过程中使用邻基参与性的氨基保护基,描述了不同氨基保护基保护的糖基给体在糖苷化反应中实现立体选择性控制的机理以及它们所保护的糖基给体的应用.     

锰或镍离子取代的氨基酰化酶性质的研究

Ｎ－ａｃｙｌａｍｉｎｏａｃｉｄ ａｍｉｄｏ ｈｙｄｒｏｌａｓｅ（ＥＣ ３， ５， １， １４）是含锌金属酶，每摩 尔酶蛋白含两摩尔Ｚｎ２＋。本实验通过金属螯合剂ＥＤＴＡ对酶透析脱去酶中的锌离子， 生成不含金属离子的ａｐｏ－酶，再分别以 Ｍｎ２＋， Ｎｉ２＋离子对 ａｐｏ－酶重组，生成相 应的金属离子取代酶，研究了它们的活力与ｐＨ值的关系，热稳定性，游离的金属离子 对酶活性的影响，并通过荧光发射光谱考察了相应构象的变化。     

3′-苄氨基甲基取代黄酮的合成及抗菌活性

以苯酚和3-甲基苯甲醛为原料,经酯化、重排、羟醛缩合、关环、卤代反应和氨化6步制备得到了5个N-苄氨基甲基黄酮,化合物的结构经IR,MS和1HNMR得到了证实.测试了它们对白色念珠菌(Candida albicans)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和大肠埃希氏菌(Escherichia coli)3种细菌的抗菌活性.     

海洋链霉菌产生的抗生素S—111—9的研究

抗生素Ｓ－１１１－９是由分离自厦门地区红树根际海泥的一株暂定名为厦海链霉菌所产生的。对该菌发酵液含有的抗生素进行了提取、纯化、理化性质、紫外光谱、红外光谱、快原子轰击质谱、核磁共振谱及元素分析研究，结果表明它是一种碱性水溶性氨基环醇类抗生素，其分子量是６１４，分子式为Ｃ２７Ｈ６４Ｎ７Ｏ８。但与已知的氨基环醇类抗生素比较，在某些理论性质及波谱特征上均有不同，它是氨基环醇类抗生素的一个新成员。     

凝血酶抑制剂抑制动力学研究

由Ｓ－２５４菌株产生的膜血酶抑制剂是一种多组分的肽类化合物，其中Ｒ－Ｔｈｒ－Ｔｈｒ－ａｒｇｉｎｉｎａｌ组分的活力最强。在３７℃、ｐＨ＝７．４的Ｔｒｉｓ缓冲液中，该抑制剂对凝血酶的抑制作用与抑制刑的浓度关系密切。在抑制剂浓度较小的情况下，抑制剂与酶的结合呈直线关系，随着抑制刑浓度的提高，残留活力曲线则出现漂移。根据Ｄｉｘｏｎ图和Ｌｉｎｅｗｅａｖｅｒ－Ｂｕｒｋ图的研究，该抑制剂对凝血酶的结合与底物呈竞争性抑制，抑制常数Ｋｉ＝２．０×１０－７ｍｏｌ／Ｌ。     

仙蜜果花中酪氨酸酶抑制剂提取的探讨

仙蜜果属仙人掌科植物,可用作水果、蔬菜、花卉等,具有很高的经济效益和市场价值.本文分析比较了仙蜜果花不同部位(花瓣、花苞、花芯)以及不同提取方式对酪氨酸酶活力的影响,从而对仙蜜果中提取酪氨酸酶抑制剂的可行性进行探讨.经过比较,发现超声波萃取法提取酪氨酸酶抑制剂优于传统热回流法,醇提法优于水提法,仙蜜果花中花苞部位对酪氨酸酶抑制效果最好,经过石油醚萃取可进一步提纯酪氨酸酶的抑制剂.     

壳聚糖的抑菌作用及其稳定性研究

研究了壳聚糖对食品中常见微生物的抑制作用,结果表明:3种不同分子量的壳聚糖(50 kD,100kD,200kD)对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、短小棒状杆菌、大肠杆菌、白色念珠菌等所有被试菌都有明显的抑制作用,随分子质量增大,壳聚糖的抑菌作用逐渐减小,相应最小抑菌浓度在0.5 g/L以上.同时探讨了壳聚糖抑菌作用的稳定性,结果表明壳聚糖的热稳定性良好,环境中的金属离子对壳聚糖的抑菌性能有一定的影响.     

缓蚀剂与阻垢剂联合法制HEDP的研究

文中提出了一种新型的制备HEDP的方法,即利用缓蚀剂与阻垢剂联合法制备HEDP.该方法解决了常规方法中存在的污染环境、浪费原料、产品质量较低的问题.实验给出当反应温度为35～40℃,原料配比为1:0.9,保温时间为3 h,保温温度为120℃时,产率较高,为最佳反应条件.     

抗生素对微生物的影响

不同抗生素对不同病原菌的作用不同，了解某一抗生素范围的试验，叫抗菌谱试验，实验利用滤纸条法测定青霉素的抗菌谱，即可判断青霉素对不同类型微生物的影响，初步判断其抗菌谱．不同抗生素的抗菌谱是不同的，如青霉素只对革兰氏阳性菌有抗菌作用，故青霉素属窄谱抗生素．     

马铃薯天冬氨酸蛋白酶抑制剂基因克隆和结构分析

以马铃薯基因组ＤＮＡ为模板并基于天冬氨酸蛋白酶抑制剂基因的ｃＤＮＡ序列所设计的两个引物，通过ＰＣＲ扩增得到６６６ｂｐ的天冬氨酸蛋白酶抑制剂基因编码区，并将此片段克隆到ｐＵＣ１８的ＳｍａＩ位点．序列分析结果表明该基因除去末端一终止密码子外其可译框架编码２２１个氨基酸残基，前导肽包括３２个氨基酸残基，故该抑制剂的成熟蛋白由１８９个氨基酸组成，第６７位的精氨酸为抑制胰蛋白酶的活性中心．与ｃＤＮＡ相比核苷酸的同源性为９４．３％，氨基酸的同源性为９０％．基因ＤＮＡ无内含子．     

水稻巯基蛋白酶抑制剂的圆二色谱研究

水稻巯基蛋白酶抑制剂(CPI)圆二色性谱(CD)显示206nm和222nm处的双负峰,CPI分子以α 螺旋构象为主;当CPI与木瓜蛋白酶等摩尔结合后,CPI完全丧失抑制活性,复合物CD谱发生显著变化,α 螺旋含量降低.CPI具有较高的结构稳定性,但在100℃处理时间延长以及pH向酸碱两极变化时,其CD谱发生较大改变,α 螺旋含量减少;而抑制活性仅在pH>9时逐渐下降,在酸性条件下保持不变.用不同试剂修饰CPI分子中的巯基和二硫键,CPI的活性不受影响;DTT、PCMB修饰CPI,其CD谱发生显著变化,NEM修饰CPI,其CD谱变化甚微.4mol/L的脲中,CD谱仅显示206nm负峰、214nm和225～235nm处新的负肩,并在240～250nm之间出现新的负峰,分子中无规卷曲增加,CPI活性未受影响;经NBS修饰,CPI分子中α 螺旋减少,无规卷曲增加较多,CPI完全丧失抑制活性.     

GSK3抑制剂的合成

4-甲酰基-2E-丁烯酸乙酯(8)经醛基保护、与2-氨基吡啶反应成环、加压氨化得到(11);5-氟-2-硝基苯甲醛(1)经醛基保护、Bartoli合成法制成吲哚、与乙醇胺反应并氢化、Boc保护、甲磺酰化、碱环合、与草酰氯甲醇钠反应制得(12);(11)与(12)对接、去保护、酰化得到目标化合物3-[9-氟2-(哌啶-1-羰基)-1,2,3,4-四氢-[1,4]-二氮杂卓艹并[6,7,1-hi]吲哚基-7]-4-咪唑并[1,2-a]吡啶基-3-吡咯-2,5-二酮.以化合物(1)为起始原料计算,共10步反应,总收率18%.