K-RRneo细胞生长与分化特性的检测

细胞分化实质上是基因的选择性表达和特异性蛋白质的合成.珠蛋白基因开启、血红蛋白表达是红系细胞分化的典型标志.当红系细胞癌变时这一分化特征丧失,机理未明.薛社普等经过大量的研究发现,骨髓瘤细胞与网织红细胞同种或异种间进行杂交后,在出现去恶性分化特征(癌基因表达抑制/关闭)的同时,往往伴有珠蛋白基因产物(血红蛋白)的表达.我们报道了兔网织红细胞与人红白血病细胞K_(562)融合后形成的K-RRneo细胞生长活动较     

真核细胞基因中存在插入顺序

关于基因表达的知识,大部分来自对简单的原核细胞(如细菌)的研究。原核细胞中,基因的DNA首先转录为被叫作信使核糖核酸(mRNA)的相应的RNA分子,然后,mRNA又指导充当细菌细胞的酶或起结构成份作用的蛋白质的合成。真核细胞基因的表达则与细菌大不相同。例如,有些科学家发现,真核细胞的许多基因的某些核苷酸顺序,在相应的mRNA中不能找到,它们被称为插入或间隔顺序。     

盘基网柄菌肌球蛋白分子缺失对生长、发育的影响

将４种在盘基网柄菌肌球蛋白分子尾部不同部位缺失突变（ｉｎｔｅｒｎａｌ ｄｅｌｅｔｉｏｎ ｍｕｔａｔｉｏｎ）的重链基因ＭｙａａΔ８２４－９４１,ＭｙａａΔ９３４－１４５４,ＭｙａａΔ９３４－１１９４,ＭΔ１１５７－１４５４,用标准电转化方法导入内源肌球蛋白重链基因封闭了细胞（ｍｙｏｓｉｎ ｈｅａｖｙ ｃｈａｉｎ ｇｅｎｅ Ｔ－ｎｕｌｌ ｃｅｌｌ）中表达,以野生型肌球蛋白重链基因细胞为对照,测试比较了     

细胞表面与基因调控

本文所说的细胞表面,包括细胞膜及其邻近的一薄层细胞质,例如动物卵细胞的“周质”(cortex,或译“皮质”)。细胞表面可以接受外界环境和其他细胞的信息,引起其本身结构、化学成分、通透性或其他性质的改变,并通过细胞质进而影响核内基因的活动,这就为遗传基因接受外界环境和其他细胞的信息     

步入基因组后的时代

步入基因组后的时代林元凯译，任大明校随着基因数据库的逐渐充实，下一步将通过测定一组组基因的活性或者分析细胞中蛋白质的数量来弄清基因到底都干了些什么。维持有机体的正常运转是一件十分复杂而又奇妙的过程。例如，从单个的受精卵细胞发育成为一个成人个体并保持健...     

基因抑制蛋白质揭示干细胞奥秘

科学家已经采取措施来揭示“干细胞性质”的奥秘:将对是什么促使胚胎干细胞(ES)能无休止地复制并保持其演变成为任何种类人体细胞的潜能作出解释。近期《细胞》和《自然》杂志上发表的论文称,保持干细胞特性的关键因素是称为多冠状聚合蛋白质的分子。美国麻省理工学院(MIT)和剑桥怀特黑德生物医学研究所的研究小组报道,这些蛋白质和其他蛋白质协同作用以抑制大部分调节基因(调节基因的蛋白质启动起关键作用的发育基因),使胚胎干细胞保持处于未分化状态。已知多冠状聚合蛋白质在诸如果蝇和人等不同生物体的发育上,都具有关键性的抑制基因的…     

枯草杆菌(Bucillus subtilis)细胞质中的二硫键蛋白质

二硫键是维持蛋白质二维和三维结构的重要因素之一,目前已知的二硫键蛋白质主要存在于细胞周质(Periplasm)或真核细胞的细胞器中,大多数是分泌蛋白质或是膜蛋白质,很少存在于细胞质内.一般认为细胞质的高还原势是其缺乏二硫键蛋白质的重要原因,但是,细胞环境不是影响二硫键形成的唯一因素,在细胞(Escherichia coli)的细胞周质内已发现3个能催化二硫键形成的蛋白质,它们是分泌蛋白质形成二硫键必需的.Derman等将细菌中硫氧还蛋白还原酶(Thioredoxin reductase)的基因缺失后,发现在细菌细胞质中合成的外源碱性磷酸酶及其他外源蛋白质能形成二硫键,认为细胞质有催化二硫键形成的机制,只是某些因素如硫氧还蛋白还原酶阻止了二硫键的形成.本文报道了枯草杆菌细胞质中的一个二硫键蛋白质,并讨论了细胞发育状态对该蛋白质合成的影响.     

ras-onc蛋白P21片段(56—66)抗血清与某些人癌组织的反应

c-ras癌基因及其产物蛋白P21与恶性肿瘤的发生、发展起着重要的作用。c-ras-onc的激活一般有两种机制:(1)基因中第12位或第61位密码子发生点突变,使相应的编码蛋白P21中的氨基酸发生改变;(2)P21的过量表达。C-ras-onc家族的成员均编码分子量为21,000的蛋白质(P21),它们与细胞膜结合具有GTP结合及GTP酶的活性,它们还参与正常细胞的增殖,还可能与信号传递有关。例如在Harvey鼠肉瘤病毒转化的细胞中胰岛素     

分泌改善的重链促进基于蛋白内含子的双载体共转全长FVⅢ基因

在甲型血友病基因治疗中, 其疗效受FVⅢ的低分泌性和较大的FVⅢ基因难以为腺相关病毒(AAV)载体运载等因素的不利影响. 研究表明, 重链的分泌低下是导致FVⅢ分泌低效性的主要原因. 我们最近的研究表明, 应用蛋白质剪接技术的双载体转B区缺失型FVⅢ(BDD-FVⅢ)基因, 通过表达后重链和轻链的共价连接, 轻链可顺式促进剪接BDD-FVⅢ的分泌, 但重链分泌的低下影响分泌的水平. 本文将具有促进FVⅢ分泌作用的L303E/F309S点突变引入FVⅢ的重链, 通过蛋白质剪接的双载体共转断裂全长FVⅢ基因, 观察了重链和剪接全长FVⅢ的分泌和生物活性的变化. 构建了一对融合Ssp DnaB蛋白内含子(intein)的突变重链和轻链真核表达载体, 瞬时共转染培养的COS-7细胞, Western blotting结果表明转基因细胞有明显的剪接FVⅢ蛋白表达; 突变重链单独转基因后的分泌量为(39±11) ng/mL, 明显高于野生型重链的分泌量; 与轻链共转基因的重链分泌量增加到(123±13) ng/mL, 培养上清中分泌的剪接FVⅢ量和活性分别为(86±14) ng/mL和(0.61±0.08) IU/mL, 明显高于断裂的野生型FVⅢ共转基因. 另外, 转突变重链和轻链基因细胞的合并培养上清中亦检测到剪接的FVⅢ蛋白和生物活性, 且高于转野生型重链和轻链基因细胞的合并培养上清. 结果表明, 重链分泌性的改善可提高运用蛋白质剪接技术的双载体转断裂的全长FVⅢ基因的功效, 为动物体内进一步运用双AAV载体转全长FVⅢ基因提供了实验依据.     

染色体泡起提供基因开关的线索

动物细胞中,基因是如何开关的,——比如说,在发育期间当细胞分化为不同的组织的时候,以及在一个已分化了但不是经常处于活动状态(如分泌蛋白质)的细胞中,基因如何开关,这是分子生物学家们很希望得到解答的问题之一。     

蛋白质核酸分子在固体介质中能形成专一结合的复合物

为阐明生命活动的一些基本过程,如DNA复制、重组及基因调控等,归根结蒂,需要对蛋白质核酸的相互作用有详尽的了解。近年来用凝胶电泳定量研究蛋白质核酸的相互作用已有重大突破,所用方法非常灵敏,蛋白质和核酸的浓度只需10~(-12)—10~(-14)mol/L。其基本原理如下:一般先将有关的DNA片段用放射性同位素标记,然后用它与细胞抽提物混合,细胞抽提物中能与DNA专一结合的蛋白质就与DNA形成蛋白质核酸复合物,它在凝胶电泳中     

普遍存在的"混血儿"

事实上,在多细胞动物的进化过程中,也常常出现个体间彼此交换基因片段的现象,例如杂交就在其进化中起到了非常重要的作用,它所产生的"混血儿"至今仍生活在地球上. 早在1985年,就有生物学家对此做出了预测,只不过那时没有确凿的证据.     

生命科学的尖端研究课题

日本科学技术厅不久前提出一篇调研报告,认为遗传工程、细胞融合技术等方面的研究课题和不久的将来要优先达到的目标如下。(一) 基因、细胞、蛋白质等的系统利用技术(1) 携带遗传信息的物质的分部分离和鉴定①基因分级分离技术和鉴定技术; ②染色体分级分离技术和鉴定技术; ③细胞器分级分离技术; ④细胞选择技术; ⑤蛋白质等分级分离技术和鉴定技术。     

人的DNA指纹

一、引言遗传标志(genetic marker)是任何遗传学分析的基础。一直到70年代末,几乎所有的生化标志(biochemical marker)仅限于蛋白质的多态性(例如,若在血中出现大量的HbA(?)或大量的HbF,则可诊断为β地中海贫血)。随着DNA克隆技术和Southern杂交技术的应用,在基因组DNA水平上直接分析变异性(variability)成为可能.最初通过β珠蛋白基因族中限制性内切酶酶切片段长度变异的分析(例如,经Bam HI限制酶切割后,β~0地中海贫血患者出现含β     

在一名XY女性的SRY基因中发现的新生突变——Codon 113 GCA→ACA

动物性别决定的最新研究成果揭示了在胎生哺乳动物(包括人类)的Y染色体短臂上存在着决定性别的主宰基因SRY(Sex-determining region of the Y)。SRY是一个高度保守的、核心序列为250个碱基的单拷贝基因。该基因编码主结构为80个氨基酸的DNA结合蛋白质,它具有HMG盒(high mobility group box)的特征。生命科学的这一重大突破为     

1990年诺贝尔奖(自然科学)获奖成果简介

生理医学奖由于发现动物肿瘤病毒的致癌基因源出于细胞基因(即所谓的原癌基因——proto-oncogenes),旧金山加利福尼亚大学的美国教授J.迈克尔·毕晓普(J.M-ichael Bishop)和哈罗德·瓦穆斯(Harold Varmus)分享了今年的诺贝尔生理医学奖。早在70年代初期,致癌基因假说就风行一时。当时罗伯特·许伯纳(Robert Huebner)和乔治·托达洛(George Todaro)提出,绝大多数哺乳动物细胞的基因组中携带的类逆转录病毒基因通常均处于休眠状态,但它们一旦被致癌物所激活,则终将导致肿瘤生成。另一派(少数派)的观点认为,被激活的是正常基因,作为     

传染性喉气管炎病毒糖蛋白G基因的原核表达、细胞定位及功能研究

克隆测定了传染性喉气管炎病毒(ILTV)北京E3和Zhonghai毒株的糖蛋白G基因(gG)序列, 并与多种动物的Ⅰ型α-疱疹病毒gG基因序列作了比对. 通过克隆gG基因至原核表达载体pET30a(+)构建pET30a-gG质粒, IPTG诱导表达含pET30a-gG重组质粒的阳性宿主菌后, 分离纯化得到分子量约35 kD的His-GG融合蛋白. 利用该融合蛋白制备的纯化的抗His-GG大鼠多抗血清, 观测ILTV糖蛋白G的在细胞上的分布, 发现糖蛋白G主要存在于宿主细胞的细胞核外周及细胞膜上, 在散在细胞内的分布较为分散, 而在融合细胞的结合部位分布较为集中. 利用抗体中和病毒糖蛋白G的实验结果表明, 糖蛋白G可能参与病毒从细胞到细胞的直接感染(CTCS), 从而影响病毒复制和噬斑的形成.     

使蛋白质特性和结构散发光芒的三重奖诺贝尔化学奖纵横光谱

继基因革命而来的时髦新词是蛋白质学(PRO-TEOMICS)——研究从活细胞产生的蛋白质的多样性的学说。今年的诺贝尔化学奖颁发给三位研究人员——他们研制出了用于分析蛋白质的二项关键工具。     

未折叠蛋白响应:2014年拉斯克基础医学研究奖解读

<正>2014年的拉斯克基础医学研究奖(Albert Lasker Basic Medical Research Award)授予了日本京都大学的Kazutoshi Mori教授和美国加州大学旧金山分校的Peter Walter教授,以奖励他们对未折叠蛋白响应(unfolded protein response,UPR)的先驱性研究.细胞依赖这套UPR的质量控制系统,监测在内质网腔中具有细胞毒性的没有正确折叠的蛋白质,传递信号到细胞核内并启动一系列纠正措施重新建立细胞内的蛋白质稳态(protein homeostasis).Kazutoshi Mori和Peter Walter分别独立发现了这一通路的核心组件,鉴定了     

如何饲养恐龙?

即使我们有了恐龙的DNA,让它成长为一头成年动物的过程也是极为复杂的.古生物学家约翰·吉解释说:要让它顺利长大,首先要将DNA完整地组合起来.DNA的许多部分与叫作组蛋白的蛋白质复合物缠绕在一起,而它们的缠绕方式对生物体发育过程中的基因状态有着很大的影响,例如基因是否开启,以及何时开启等.