罗丹明B-硫氰酸钾共振光散射测定三苯基锡

酸性介质中,三苯基锡化合物与硫氰酸钾和罗丹明B相互作用会产生共振光散射(RLS)增强信号,在250~500 nm波长范围内有两个散射峰,分别位于329.2 nm和370 nm处,其中最大散射峰位于329.2 nm处.考察适宜的反应条件和影响因素,在最佳条件下,329.2 nm处增强的RLS强度与三苯基锡(TPhT)的浓度呈线性关系.用于三苯基锡化合物的测定,检测限为5.2μg.L-1.方法用于实际水样的测定,回收率为95.8%~107.5%.     

Tat-p21融合蛋白的表达及其在A549细胞中的活性研究

在本研究中,通过分子克隆的手段,将编码Tat跨膜转运结构域的CDS与人野生型p21蛋白的CDS相连接,并通过原核表达系统表达纯化相应蛋白;然后用该蛋白按浓度梯度:100,200,400,800,1000nmol/L与A549细胞共同孵育,各浓度在10,60,120,240min终止反应,通过Western Blotting检测进入细胞的p21蛋白量,以此确定最佳的转导条件;接着检测了转导进入A549细胞的Tat-p21融合蛋白在细胞中稳定存在的时间.然后通过绘制细胞生长曲线的方法比较了转导Tat-p21的细胞与负对照实验组生长速度的区别.结果发现,融合Tat跨膜结构域的p21蛋白能够高效进入A549细胞,并在细胞内发挥相应生物学功能,使细胞的生长受到抑制,增殖减慢;而作为负对照的p21蛋白则无相应功能.     

新型雌激素受体ERα36与窖蛋白-1在皮肤组织细胞中的表达和分布特征

采用蛋白免疫印迹杂交和免疫细胞荧光等方法首次研究了新型雌激素受体ERα36和窖蛋白-1（Caveolin-1）在大鼠皮肤组织中以及角质细胞系中的表达,探讨了二者的表达关系和分布特征.结果发现：（1）大鼠皮肤中有ERα36的表达,其表达的量与Caveolin-1的表达量呈负相关,且存在性别差异和部位差异;（2）表皮角质细胞中有ERα36的表达,主要分布在细胞膜上,且与Caveolin-1共定位.提示新型雌激素受体ERα36存在于皮肤细胞中,且可能参与Caveolin-1介导的雌激素信号转导,在雌激素治疗皮肤疾病过程中发挥一定作用.     

Reductase activity of human thioredoxin-like protein and its effects on cell apoptosis

Thioredoxin is a ubiquitous dithiol oxidoreductase found in many organisms and involved in numerous biochemical processes. Human thioredoxin-like protein (hTRXL) is differentially expressed at different development stages of human fetal cerebrum and belongs to an expanding family of thioredoxins. Recombinant hTRXL and truncated hTRXLs corresponding to the N-terminal (hTRXL-N) and C-terminal (hTRXL-C) domains are expressed and purified. In insulin disulfide reduction assay, both full-length hTRXL and hTRXL-N show reducing activity for the insulin disulfide bonds. As expected, the hTRXL-C failed to reduce insulin. MCF-7 cell stably transfected with hTRXL cDNA exhibits increased sensitivity to apoptosis induced by phorbol myristic acetate (PMA) and ionomysin.     

MEKK3蛋白K391位点突变对其影响的生物信息学分析及活性鉴定

MEKK3是丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)家族的重要成员,主要参与激活c-Jun氨基末端激酶(c-Jun NH2-terminal kinases, JNK)和细胞外调节(extracellular regulated protein kinases, ERK)两条通路。利用生物信息学分析野生型MEKK3(MEKK3WT)及突变型MEKK3(MEKK3K391M)蛋白的理化性质、亲/疏水性、跨膜区、二/三级结构、相互作用蛋白等。结果表明,MEKK3K391M蛋白的稳定性增强,亲/疏水性最强位点未改变,α-螺旋、β-折叠及蛋白结合位点与MEKK3WT不同。三级结构分析显示,MEKK3K391M空间位阻增大。据GenBank提供的人源MEKK3的cDNA序列(NM_203351),扩增出野生型MEKK3WT目的基因,用重叠延伸PCR定点突变技术扩增突变型MEKK3K391M目的基因,并将其克隆至带有FLAG标签的真核表达载体pCMV-tag-2c中。DNA序列分析结果表明,MEKK3K391M基因序列成功将编码赖氨酸(Lys, K)的密码子AAG突变为编码甲硫氨酸(Met, M)的密码子ATG;免疫印迹分析显示,MEKK3WT、MEKK3K391M重组体均在PC12细胞中高效表达;MEKK3WT可以激活JNK,使JNK发生磷酸化反应,其条带灰度值明显高于对照组和MEKK3K391M组。MEKK3K391M组的P-JNK与对照组相差不大。总之,MEKK3中K391的氨基酸突变引起了蛋白结构和功能的改变,特别是三级结构的空间位阻加大,使MEKK3K391M与ATP结合能力减弱,从而无法呈递磷酸基团催化相应的底物,失去生物学活性。本研究对寻找神经系统疾病JNK通路中与MEKK3相互作用的蛋白分子、探索蛋白相互作用机制提供实验基础。     

硒对NO诱导的内皮细胞损伤的抑制机制研究

用外源性NO供体S－亚硝基谷胱甘肽（GSNO）处理人脐静脉内皮细胞系ECV－304细胞，研究其对细胞的损伤机制，并探讨硒在这一过程中的保护作用，通过MTT法测定细胞存活率，分光光度法[测定细胞LDH漏出率及细胞脂质过氧化水平，采用荧光标记技术研究细胞膜流动性变化，结果表明，NO可引起细胞脂质过氧化水平升高，细胞膜流动性下降，导致ECV－304细胞损伤，其作用具有浓度效应，细胞内硒可通过抑制细胞脂质过氧化水平及细胞膜流动性变化从而抑制NO诱导的细胞损伤。     

硒对NO诱导的内皮细胞损伤

用外源性NO供体S-亚硝基谷胱甘肽(GSNO)处理人脐静脉内皮细胞系ECV-304细胞,研究其对细胞的损伤机制,并探讨硒在这一过程中的保护作用.通过MTT法测定细胞存活率、分光光度法测定细胞LDH漏出率及细胞脂质过氧化水平,采用荧光标记技术研究细胞膜流动性变化.结果表明,NO可引起细胞脂质过氧化水平升高,细胞膜流动性下降,导致ECV-304细胞损伤,其作用具有浓度效应;细胞内硒可通过抑制细胞脂质过氧化水平及细胞膜流动性变化从而抑制NO诱导的细胞损伤.     

Effect of nerve regeneration factor on differentiation of PC12 cells and its signaling pathway

The effects of nerve regeneration factor (NRF) on neuronal differentiation of PC12 cells and its signaling pathway are investigated by morphological observation and immunofluorescent cytochemical method, and the activity of ERK1/2 in NRF-treated PC12 cells in absence of serum is also studied by immuno-coprecipitation and Western blot analysis. The MEK1/2-specific inhibitor U0126, the broad-spectrum protein kinase C (PKC) inhibitor G?6983 and tyrosine protein kinase (TPK) inhibitor genistein were used to determine the roles of the activation of ERK1/2 by NRF and the involvement of certain kinds of PKC or TPK receptor in this activation process. The results show that U0126 and G?6983 inhibit the activation of ERK1/2 by NRF to different extents, while genistein has no effect on it, demonstrating that NRF remarkably induces neuronal differentiation of PC12 cells through activating ERK1/2 in a dose-dependent and time-dependent manner.     

融合蛋白GSH-bFGF的构建、表达及体外活性检测

目的:设计构建和表达新型融合蛋白谷胱甘肽-碱性成纤维细胞生长因子(Glutathione-basic fibroblast growth factor,GSH-b FGF),并检测其体外抗氧化、抗衰老能力.方法:采用RT-PCR,酶切,连接,转化等分子克隆技术构建新型融合蛋白GSH-b FGF,并通过镍柱亲和层析、阳离子交换层析纯化该目的蛋白.通过CCK-8试剂盒检测GSH-b FGF对鼠源成纤维细胞NIH-3T3的促增殖活性.同时,经总抗氧化检测试剂盒检测GSH-b FGF的抗氧化能力.结果:克隆表达并纯化获得融合蛋白GSH-b FGF.CCK-8促增殖结果显示质量浓度为20 ng/m L的GSH-b FGF可显著促进鼠源成纤维细胞NIH-3T3增殖.体外抗氧化结果显示GSH-b FGF有显著的抗氧化活性,纯化得到的GSHb FGF蛋白的GSH浓度约为(0.06±0.02)μmol/L,抗氧化能力为(0.56±0.23)mmol/g.结论:新型融合蛋白GSHb FGF有显著的体外促增殖能力及抗氧化活性.     

麻疯树萜醇Ⅰ的杀虫活性及其对菜粉蝶幼虫PKC活性的影响

研究了麻疯树萜醇Ⅰ对菜粉蝶幼虫的杀虫活性,并利用荧光标记多肽的非同位素检测方法首次检测了取食麻疯树萜醇Ⅰ对菜粉蝶幼虫中肠细胞内蛋白激酶C(PKC)活性的影响.结果显示:麻疯树萜醇Ⅰ对莱粉蝶幼虫无触杀活性,而具有明显的胃毒作用,处理后48h、72h和120h的LC_(50)分别为1.2753,0.8318和0.3991mg/mL.菜粉蝶幼虫对处理叶片的取食量显著少于对照组,24h和48h的拒食中浓度(AFC_(50))分别为0.3789mg/mL和0.5706mg/mL.取食麻疯树萜醇Ⅰ后,菜粉蝶幼虫体重增长显著被抑制.麻疯树萜醇Ⅰ对菜粉蝶幼虫中肠细胞内的PKC具有显著地激活作用,处理后PKC的活性逐渐上升,12h时活性为对照组的4.21倍.麻疯树萜醇Ⅰ对菜粉蝶幼虫中肠细胞PKC的激活从而导致的蛋白质磷酸化作用可能是其杀虫作用的重要机理.     

Graves病患者血中细胞因子的变化

目的:探讨白细胞介素6(IL-6),干扰素γ(IFN-γ),肿瘤坏死因子α(TNF-α)在Graves病(GD)发病机制中的作用,寻找GD新的诊断指标.方法:用双抗体夹心ELISA法测定试验组68例GD患者和对照组29健康人IL-6、IFN-γ、TNF-α血中浓度,同时,用电化学发光法测定试验组和对照组成员促甲状腺激素(TSH)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺激素(FT4).结果:试验组GD患者血中浓度IL-6、IFN-γ、TNF-α均高于对照组(P＜0.05).FT3、FT4分别与IL-6、IFN-γ、TNF-α不相关(P＞0.05).结论:IL-6、IFN-γ、TNF-α参与了GD的发病,在GD发病机制中起重要的作用,在临床上似可作为诊断GD的参考指标.     

趋化素样因子1对肾癌细胞ACHN生物活性的影响及其相关机制

多项研究发现,趋化素样因子1(chemokine-like factor 1,CKLF1)是人类多种肿瘤发生和进展的重要调节因子。然而,关于CKLF1对肾癌细胞生物活性的影响知之甚少。通过质粒转染实现CKLF1在肾癌细胞ACHN中过表达,探究CKLF1对肾癌细胞ACHN细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。将实验组pEGFP-N1-CKLF1和对照组pEGFP-N1真核细胞表达质粒分别转染肾癌ACHN细胞,实现趋化素样因子1在ACHN细胞中的过表达。利用荧光显微镜,镜下观察质粒转染效率。利用细胞计数试剂盒8(cell counting Kit-8,CCK8)观察肾癌细胞ACHN转染24、48、72 h后增殖情况;利用流式细胞术检测ACHN细胞转染24、48、72 h后细胞周期的变化情况;利用Hoechst33258染色法观察转染48 h后,ACHN细胞形态变化,利用流式细胞术检测各组细胞凋亡率。采用Western blot法检测CKLF1过表达后,细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、Bcl-2样蛋白1(Bcl-2 like 1,Bcl-xL)、信号传导及转录激活因子3(signal t...     

NaCl溶液中OP在Ni表面的吸附及其缓蚀机理的研究

用分光光度法研究了ＯＰ对Ｎｉ在盐水中的缓蚀作用，应用吸附理论和Ｓｅｋｉｎｅ方法处理实验数据，发现ＯＰ在Ｎｉ表面发生了吸附并服从Ｌａｎｇｍｕｉｒ吸附等温式．求得吸附热为５２．２９ｋＪ·ｍｏｌ－１，可以认为这种吸附是产生缓蚀作用的主要原因．     

鹿角盘蛋白的分离纯化与活性研究

通过超微粉碎技术使坚硬的鹿角盘粉碎,再运用生物化学技术,经过浸提、盐析、透析、分子筛层析等生物技术,分离纯化出一种鹿角盘蛋白APPB,然后通过动物实验考察其活性作用.经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,检测其分子质量在20.1～31.0 KD之间,通过动物活性实验证明,分离得到的鹿角盘蛋白有一定的抗炎镇痛作用.     

鹿茸中促肾上皮细胞增殖蛋白的分离纯化与表征

采用凝胶过滤层析以及离子交换色谱方法,从鹿茸中纯化出一种蛋白,其在SDS-PAGE电泳上显示为一条带,分子质量为53.3 kDa,同时初步考察了该纯化蛋白在6种不同浓度下对狗肾上皮细胞(MDCK)增殖的影响.结果发现,该蛋白在0.124 mg/mL浓度时,MDCK细胞的增殖效果最佳,达73.02%.     

过表达蛋白合成与分泌相关蛋白提高CHO细胞anti-hLAG3产量

对比研究了过表达蛋白合成与分泌途径中的20种蛋白对瞬时表达细胞（ExpiCHO-S细胞）表达anti-hLAG3产量的影响,考察了转录因子XBP1s对ExpiCHO-S细胞生长、抗体产量和抗体亲和力的影响。结果表明,当所研究蛋白的表达质粒与anti-hLAG3质粒以1：4的质量比共转染时,XBP1s能够使抗体产量提高约30%,GADD34、NFKBIz、CERT、C/EBPα和mTOR的过表达则会明显降低抗体产量,其他14种蛋白对抗体产量的影响较小。随着XBP1s共转染比例的增加,其对anti-hLAG3生产的促进作用增强,当共转染比例提高到60%时,相对于共转染比例为60%的EGFP,可使转染后168 h的抗体产量提高到2.1倍。此外,XBP1s的过表达对活细胞密度和细胞活率以及抗体亲和力的影响均较小。以上结果表明XBP1s可作为细胞工程的一个有效靶标用于提高CHO细胞重组蛋白的生产性能。     

bFGF对大鼠坐骨神经损伤后腓肠肌功能恢复的影响

目的：观察碱性成纤维细胞生长因子（ｂ Ｆ Ｇ Ｆ） 对大鼠坐骨神经损伤后腓肠肌功能恢复的作用。方法：以钳夹损伤左侧坐骨神经大鼠为模型,治疗组肌肉注射ｂ Ｆ Ｇ Ｆ,对照组注射等渗盐水,隔日１ 次。术后２ 、３ 、４ 周分别对治疗组和对照组损伤侧及健侧腓肠肌进行肌诱发电位及肌收缩力检测,以健侧为１００ ％ ,求出损伤侧各指标的恢复率。结果：与对照组相比,治疗组腓肠肌诱发电位幅值恢复率明显加快（ Ｐ＜ ００５） ;腓肠肌单收缩力和强直收缩力的恢复率也显著加强（ Ｐ＜ ００５ 和 Ｐ＜ ００１） 。结论：ｂ Ｆ Ｇ Ｆ 能促进大鼠坐骨神经损伤后骨骼肌运动功能的恢复     

茯苓水提液对小鼠学习记忆的影响

目的研究中药茯苓水提液对小鼠学习记忆的影响.方法通过跳台法观察茯苓水提液对东莨菪碱所致记忆获得障碍模型小鼠和30%乙醇所致记忆再现障碍模型小鼠的影响.结果 1)茯苓水提液能减少东莨菪碱所致记忆获得障碍模型小鼠5 min内学习及记忆实验的错误次数,延长潜伏期,P<0.05,P<0.01,差异有统计学意义.2)茯苓水提液能减少30%乙醇所致记忆再现障碍模型小鼠测试实验中5 min内错误次数,延长潜伏期,P<0.05,P<0.01,差异有统计学意义.结论茯苓水提液能改善化学药物所致学习记忆障碍模型小鼠的学习记忆能力.     

Adiponectin levels are associated with the number and activity of circulating endothelial progenitor cells in patients with coronary artery disease

Objective: To study the relationship between plasma adiponectin concentration and the functional activities of circulating endothelial progenitor cells (EPCs) in patients with coronary artery disease (CAD). Methods: Circulating EPCs were enumerated as AC133⁺/KDR⁺ cells via flow cytometry and identified by co-staining with DiI-acLDL and fluorescein isothiocyanate (FITC)-conjugated lectin under a fluorescent microscope. The migratory capacity of EPCs was measured by modified Boyden chamber assay. Adhesion capacity was performed to count adherent cells after replating EPCs on six-well culture dishes coated with fibronectin. Results: The number of circulating EPCs (AC133⁺/KDR⁺ cells) decreased significantly in CAD patients, compared with control subjects [(74.2±12.3) vs (83.5±12.9) cells/ml blood, P<0.01]. In addition, the number of EPCs also decreased in CAD patients after ex vivo cultivation [(54.4±8.6) vs (71.9±11.6) EPCs/field, P<0.01]. Both circulating EPCs and differentiated EPCs were positively correlated with plasma adiponectin concentration. The functional activities of EPCs from CAD patients, such as migratory and adherent capacities, were also impaired, compared with control subjects, and positively correlated with plasma adiponectin concentration. Conclusion: The study demonstrates that the impairment of the number and functional activities of EPCs in CAD patients is correlated with their lower plasma adiponectin concentrations.     

低本底条件下氡及其子体的抑制研究

稀有事例的探测中需要极低的本底,氡及其子体是主要的本底来源之一. 文章依据地下实验室1 725 m³液氮除氡需求,设计了一套液氮除氡系统,初步测试了KC-6系列活性炭在-10~-120 ℃下的除氡效果. 实验结果表明,误差函数能很好的拟合活性炭在不同温度下的穿透曲线. 拟合数据表明在-10和-30 ℃下活性炭对氡的动力学吸附系数分别为23.01 ± 0.33和58.68 ± 0.63 L/g. 有限的数据表明在-120 ℃下没有氡溢出,但是可以算出此时的动力学吸附系数已经大于432 L/g. 文章中所得到的数据将为低放射本底液氮中氡的去除研究奠定基础.