紫外辐射诱导植物细胞DNA损伤的彗星检测

单细胞凝胶电泳(彗星检测)已广泛应用于动物细胞DNA损伤检测.该文报道了单细胞凝胶电泳应用于UV-B诱导植物细胞DNA损伤的检测.通过对动物细胞的单细胞凝胶电泳实验方法的改进,获得了在植物细胞中应用的最佳条件.以植物细胞原生质体为材料,并结合T4 Endonu lease V的运用,显著提高了UV-B诱导植物细胞DNA损伤提高彗星检测的敏感性和特异性.植物细胞DNA损伤的彗星图像经CASP软件处理并量化,结果表明:UV-A和UV-B均能诱导发生DNA单链断裂;UV-A在一定的剂量下诱导少量嘧啶二聚体的形成,而UV-B则强烈诱导嘧啶二聚体的产生.     

单细胞凝胶电泳检测DNA损伤的方法及应用

单细胞凝胶电泳又称彗星试验,是一种在单细胞水平上检测DNA单、双链断裂和碱性不稳定位点的方法,具有敏感、稳定、快速的优点.近些年来,该方法广泛应用于遗传毒理、环境监测和细胞凋亡等的研究.本文就彗星试验检测DNA损伤方法的原理,评价指标,影响因素以及在一些方面的具体应用进行了综述.     

应用单细胞凝胶电泳技术测定农药对蚯蚓的DNA损伤

探讨采用当前国际上较先进的ＤＮＡ损伤检测技术－单细胞凝胶电泳技术,来检测农药对蚯蚓ＤＮＡ的损伤,由于蚯蚓是陆生生物与土壤生物之间传递污染物的桥梁,能很好地指示土壤环境的变化,是评价农药对生态环境安全性的一项重要指标。尝试建立蚯蚓的单细胞凝胶电泳来评价农药对生态环境的影响,结果表明两种新型农药对蚯蚓的ＤＮＡ均有损伤作用。认为蚯蚓的单细胞凝胶电泳技术能敏感地农药对细胞ＤＮＡ的损伤,并可作为农药对土壤污     

单细胞凝胶电泳技术在DNA损伤和细胞凋亡检测中的应用

用不同质量浓度的丝裂霉素C(MMC)、卡铂和5-氟尿嘧啶(5- Fu)处理Hela细胞24h,利用单细胞凝胶电泳( SCGE)技术分析这些药物对细胞DNA的损伤情况,结果发现:各药物处理组细胞都出现“彗星”,且随着各药物浓度的增大,彗星率升高,彗尾的荧光强度和长度也随之增大;各剂量组间存在良好的剂量-效应关系,差异显著...     

基于单细胞凝胶电泳法的不同烷化剂导致DNA损伤的比较研究

从单细胞水平考察单官能团和双官能团烷化剂引起DNA损伤的差异.采用单细胞凝胶电泳法检测并比较单官能团烷化剂甲基亚硝基脲与双官能团烷化剂尼莫司汀在不同浓度下对DNA的损伤情况.研究结果表明药物浓度与彗星尾部DNA含量之间存在线性关系.为了检测DNA交联损伤,选择加入断裂剂作为对照,结果显示双官能团烷化剂尼莫司汀能引起显著的DNA交联.本文从细胞毒性作用和DNA损伤水平考察了烷化剂的毒性,为阐明烷化剂的致癌和抗癌机制提供理论基础.     

融合蛋白PTD-SOD对紫外辐射引起的细胞损伤的保护作用

采用MTT法、琼脂糖电泳以及测定细胞内抗氧化指标的方法研究融合型超氧化物歧化酶PTD-SOD对UVB照射引起的L-02细胞损伤的保护和修复作用.细胞存活实验表明,辐射时间为45 min,SOD活力为1 200U·mL-1时,在PTD-SOD保护和恢复作用下的细胞存活率可达94.0%和82.5%,而野生型SOD作用下的细胞存活率仅为68.2%和54.1%,与正常对照组相近.琼脂糖电泳结果显示,PTD-SOD能有效降低辐射对L-02细胞DNA的损伤程度.酶法检测细胞内的抗氧化指标时发现,PTD-SOD能有效地提高细胞内SOD活性,同时检测到细胞内过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力的增加.相对野生型SOD,融合蛋白PTD-SOD对UVB辐射下L-02细胞的保护和恢复能力得到了显著的增强,具有作为防治UVB损伤药物的潜力.     

SCGE检测人单个核细胞细胞DNA损伤

用单细胞凝胶电泳法检测了人全血在4℃储存时单个核细胞DNA损伤的情况。结果发现，细胞随储存时间延长基础损伤逐渐增高，储存1，24，48，72h时细胞损伤率分别为8.84%，18.5%，45.2%和54.3%，而细胞对H2O2的敏感性却逐渐降低。以50цmol/L H2O2处理后，其细胞损伤率在0，24，48h分别为63%，61.8%和51.5%。     

彗星电泳检测细胞DNA损伤应用新进展

彗星电泳是近年发展起来的一种测定单个细胞DNA损伤的方法 ,因其操作简单、快速及灵敏等特点 ,应用范围十分广泛 .着重介绍了这一技术的发展、图形分析及应用进展     

双酚A对小鼠睾丸细胞DNA损伤的研究

目的探讨双酚A的生殖遗传毒性.方法应用单细胞凝胶电泳试验(SCGE)研究了双酚A对离体小鼠睾丸细胞的DNA损伤作用.结果除10-10mol/L组与对照组比较无显著性差别外,各染毒组拖尾率均明显高于对照组(P<0.05).随着双酚A染毒浓度的增加,小鼠睾丸细胞DNA损伤程度也逐渐增加(P<0.05),在10-5mol/L和10-6mol/L组均出现了Ⅳ级损伤.结论在一定浓度下,双酚A可引起离体小鼠睾丸细胞的DNA损伤,可能对雄性小鼠具有一定的生殖毒性.     

HgCl2与CdCl2对河蟹精子DNA损伤的单细胞凝胶电泳检测研究

采用单细胞凝胶电泳技术，研究了HgCl2和CdCl2对河蟹（Eriocheir sinensis）精子DNA损伤的影响.HgCl2和CdCl2各设置6个相同的浓度梯度，分别为0 mmol/L，0.01 mmol/L，0.05 mmol/L，0.1 mmol/L，1 mmol/L，5 mmol/L，处理温度为37 ℃（水浴），处理时间为1 h；SCGE的检测指标为DNA拖尾长度和DNA损伤率.结果表明，对照组DNA未受损伤，在电场中核DNA几乎不泳动，染色后呈圆形的荧光团，无拖尾现象；各处理组精子DNA均不同程度受损，电泳染色后均呈现彗星状荧光团，且随着HgCl2和CdCl2浓度的升高，河蟹精子DNA迁移距离和损伤率亦随之增加，DNA损伤程度与其浓度之间存在明显的“剂量-效应”关系.此外，本实验亦证实SCGE可用于河蟹精子DNA损伤的检测.     

一氧化氮对食管癌细胞核DNA的损伤作用

以硝普钠 ( Sodium Nitroprusside,SNP)作为 NO( Nitric oxide)的体外供体 ,以食管癌细胞系 EC1 0 9作为细胞模型 ,采用单细胞凝胶电泳法检测不同浓度的 NO作用不同时间后 ,食管癌细胞核 DNA被损伤的情况 .检测结果表明 ,在一定的条件下 ,NO对食管癌细胞核 DNA的损伤作用具有明显的浓度和作用时间依赖性特征 ,总的来讲 ,NO的浓度越大 ,NO对细胞作用的时间越长 ,细胞核 DNA所遭受的损伤越重 .     

SCGE技术在环境污染物检测中的应用

介绍单细胞凝胶电泳技术(SCGE)的原理及其在环境污染物检测中的应用.该技术可用于环境中多种污染物如大气污染物、重金属、醛类及辐射污染的检测,且灵敏度高,具有广阔的应用前景.     

Comparative Studies on Preparation of Large Plant DNA Fragments by Pulse Field Gel Electrophoresis

The preparation of large plant DNA fragments is extremely important to the construction of large insert DNA libraries (YAC, BAC, PAC and TAC). Although several techniques have been developed in each step of large plant DNA fragments preparation, the whole processing remains complicated and difficult. Based on authors‘ research experience and the recent worldwide development in this field, the following aspects are discussed in this paper: techniques of plant high molecular weight (HMW) DNA purification by pre-electrophoresis, the optimal conditions for the partial digestion of the HMW DNA by HindⅢ, the isolation effects of of large plant DNA fragments (100-400 kb) with different parameters of pulse field gel electrophoresis (PFGE), and the recovery of large DNA fragments. Through comparative studies, the advantages and disadvantages of each technique are discussed and some recommendations are proposed for preparing high quality large plant DNA fragments. The suggested techniques have been used in preparing the large DNA fragments of maize, rice, moss, laver, sea tangle and peach, and similar resuits are obtained among all the materials. This paper only reports the results using maize as material.     

Ce(NO3)3对不同细胞DNA的损伤作用研究

以体外培养３Ｔ３ 细胞和ｌｏｖｏ 细胞为研究对象, 运用单细胞凝胶电泳技术, 探讨了Ｃｅ（ＮＯ３）３ 对这２ 种细胞ＤＮＡ 的损伤作用．结果表明Ｃｅ（ＮＯ３）３ 对２ 种细胞均有损伤作用： 低浓度（１ ｍｍｏｌ／Ｌ） 时,ｌｏｖｏ 细胞的ＤＮＡ 损伤率要明显高于３Ｔ３ 细胞ＤＮＡ 的损伤率, 高浓度（５ｍｍｏｌ／Ｌ） 时, 则２ 种细胞的损伤率几近相同, 提示较低浓度Ｃｅ （ＮＯ３） 对正常细胞和癌细胞存在着不同的作用, 稀土对癌细胞具有选择性杀伤作用; Ｃｅ （ＮＯ３） 具有一定的遗传毒性     

几种抗氧化剂对DNA的损伤和保护作用

采用单细胞凝胶电泳法研究了几种抗氧化剂对人外周血单核细胞DNA的损伤及对由H2O2引起的DNA损伤的保护作用.结果表明,槲皮素可引起明显的细胞DNA损伤,并呈浓度依赖性;芦丁在较高浓度时,引起损伤.7,8-二羟基-4-甲基香豆素,7-羟基-4-甲基香豆素即使浓度达100μmol/L也不引起细胞DNA损伤.Vc、亚硒酸钠和甘露醇,在较高浓度时均可引起微弱的损伤,只有Vc引起的损伤较严重.当预先用抗氧化剂保护细胞后再用50 μmol/L H2O2处理,发现7,8-二羟基-4-甲基香豆素的保护作用最强,槲皮素次之,保护作用具浓度依赖性.而芦丁、7-羟基-4-甲基香豆素、Vc和亚硒酸钠在浓度≤50 μmol/L时,无任何保护作用.甘露醇在低浓度可起明显的保护作用,在较高浓度25 μmol/L和50 μmol/L时则保护作用丧失.     

重金属铬对黑斑蛙胚胎和蝌蚪生长发育的影响及血细胞DNA损伤效应

运用单细胞凝胶电泳技术研究了不同浓度重铬酸钾(K2Cr2O7)溶液(2.5,12.5,62.5μmol.L-1)对黑斑蛙(Rara nigromaculata)外周血细胞DNA的链断裂损伤效应,并观察了重铬酸钾对黑斑蛙胚胎和蝌蚪生长发育的影响.结果表明,12.5和62.5μmol.L-1的重铬酸钾具有明显的DNA链断裂损伤诱导效应,染毒15 d的DNA损伤率分别为85%和98%.在测试浓度范围内,重铬酸钾对黑斑蛙胚胎发育的影响不明显;低浓度<(12.5μmol.L-1)重铬酸钾对黑斑蛙蝌蚪生长发育的影响不明显,高浓度(62.5μmol.L-1)重铬酸钾对黑斑蛙蝌蚪的生长发育则具有明显的抑制作用.