SFRP1基因启动子区甲基化与宫颈癌及癌前病变的相关性研究

应用MassARRAY DNA甲基化定量分析方法检测58例宫颈癌组织、57例CIN2/3组织、36例CIN1组织及28例正常对照组织中SFRP1基因启动子区各CpG位点甲基化,探讨SFRP1基因启动子区甲基化与宫颈癌演进及与HPV16感染的相关性。结果显示:2110个CpG单位中甲基化率低于30%的CpG单位1612个,占总数的76.4%;甲基化率大于80%的CpG单位为4.4%,多分布于CIN2/3和宫颈癌组织之中。其中SFRP1基因启动子区CpG12.13和CpG18位点的甲基化率宫颈癌组高于对照、CIN1和CIN2/3组,差异具有统计学意义(P0.05)。CpG12.13和CpG18位点甲基化率与HPV16感染无相关性(P0.05)。提示SFRP1基因在CpG12.13和CpG18位点上高甲基化可能与宫颈癌的演进相关。     

DNA甲基化与基因调控

ＤＮＡ甲基化或去甲基化,改变了ＤＮＡ分子构象,导致某些重要基团的隐蔽或暴露,削弱或增强了ＤＮＡ与蛋白质因子的结合能力,从而改变了基因表达．     

人乳头瘤病毒基因分型在宫颈鳞癌及癌前病变的分布规律及临床意义

为探讨人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)基因分型在宫颈鳞癌及癌前病变中的分布规律及其与宫颈鳞癌发生发展的关系,应用PCR-反向点杂交技术对109例宫颈病变患者(宫颈鳞癌40例、CIN69例)进行HPV感染基因分型测定.结果显示,109例标本中HPV阳性检出率为100%,最常见HPV基因型为HPV16型;随着病变程度增加HPV单一感染比例逐渐升高,多重感染比例逐渐下降,单一感染以高危型HPV16型感染为主;HPV16型在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、SCC中阳性率分别为30.77%(8/26)、59.09%(13/22)、90.48%(19/21)、90%(36/40),阳性率呈依次上升趋势.宫颈鳞癌及癌前病变与HPV感染直接相关,宫颈癌癌前病变是高、低危HPV共同作用的结果;高危型HPV持续感染是高级别子宫病变及癌变发生的必要条件;HPV16型病毒感染是国人子宫颈鳞癌形成的主要原因.     

核干细胞因子在宫颈鳞癌中的表达及意义

采用免疫组织化学方法,分析了57例宫颈鳞癌组织、39例癌旁不典型增生组织及57例正常宫颈黏膜组织中核干细胞因子(Nucleostemin,NS)蛋白的表达.结果显示:NS蛋白在正常宫颈黏膜组织、癌旁不典型增生组织及宫颈鳞癌组织中表达的阳性率依次升高,分别为15.8%、41.0%及71.9%,组间比较有显著性差异(χ2=39.015,P<0.01).此外,NS蛋白的表达与病人年龄和肿瘤直径无关(P>0.05),而与肿瘤分期、淋巴结转移和肿瘤分化具有明显的相关性(P<0.05),提示NS在宫颈鳞癌中的高表达可能与宫颈鳞癌的发生、发展密切相关,NS蛋白检测有望成为新的诊断和治疗宫颈鳞癌的重要指标.     

CXCR7在宫颈鳞癌组织中的表达及临床意义

检测趋化因子受体7(chemokine receptor 7,CXCR 7)在正常宫颈组织、CIN宫颈组织及宫颈鳞癌宫颈组织中的mRNA及蛋白水平的表达情况。采取江西省妇幼保健院2016年6月-2017年12月新鲜宫颈组织标本103例,应用Western blot与RT-PCR技术,检测CXCR 7蛋白及mRNA在18例正常宫颈组织、18例宫颈鳞状上皮内瘤变组织、35例Ⅰ期宫颈鳞癌组织及32例ⅡB、ⅢB期宫颈鳞癌组织中的表达情况,并分析CXCR 7与宫颈鳞癌临床病理特征,如患者年龄、肌层浸润、肿瘤大小、FIGO分期之间的关系。结果表明,CXCR 7可能参与了宫颈鳞癌的增殖、生长、分化、侵袭等恶性行为,在对宫颈鳞癌早发现、早治疗及预后方面的研究中,CXCR 7可能提供了新的思路。     

NHEJ信号通路关键基因mRNA表达与宫颈鳞癌同步放化疗敏感性的关系

探讨NHEJ信号通路关键基因XRCC4,XRCC5,XRCC6,LIG4,PRKDC及DCLRE1C的mRNA表达水平与宫颈鳞癌同步放化疗敏感性的关系。以42例宫颈鳞癌活检样本为研究对象,采用荧光定量PCR(qRT-PCR)技术分析上述6个基因的mRNA表达水平,并将检测结果与患者的同步放化疗敏感性进行关联分析。XRCC6 mRNA高表达患者应答率为47.6%,低表达患者应答率为90.5%(P=0.003);其他5个关键基因的mRNA表达水平与患者的应答率无显著性关联;多因素Logistic回归分析显示XRCC6 mRNA表达水平与患者同步放化疗敏感性有显著性关联(P=0.008)。XRCC6 mRNA表达水平与宫颈鳞癌患者同步放化疗敏感性密切相关,可作为评估其临床疗效的分子标志物。     

凋亡基因Survivin在宫颈鳞癌中的表达及其相关性

目的:探讨不同分期宫颈鳞癌组织中Survivin基因表达的特征及其临床意义.方法:应用免疫组化法(S-P法)及图像分析技术检测凋亡基因Survivin在38例宫颈鳞癌的表达情况.0期9例、Ⅰ b期10例、Ⅱa期7例、Ⅱb期7例、Ⅲa期5例,将0期及Ⅰ b期合并为早期,Ⅱa期～Ⅲa期合并为晚期.结果:在早期和晚期宫颈鳞癌组织中均有凋亡基因Survivin的阳性表达,但表达强度不同,早期宫颈鳞癌组织中Survivin PU值为(20.65±4.57),而晚期宫颈鳞癌组织中Survivin PU值为(24.94±5.64),两者比较有统计学差异(P<0.05).结论:Survivin基因在宫颈鳞癌组织中异常表达与宫颈鳞癌的发生及临床分期相关.     

人类乳腺癌异常甲基化基因分析

运用Illumina HumanMethylation27BeadChip数据,利用sam函数中Delta值与FDR值的关系,选取最佳Delta值,识别人类乳腺肿瘤组织和正常乳腺组织中显著差异甲基化基因.分析这些差异甲基化基因在人类各条染色体的分布,进一步通过这些差异甲基化基因对肿瘤样本和正常样本进行双向非监督聚类分析.接着,利用limma包计算乳腺肿瘤组织样本和正常乳腺组织样本中差异表达基因,对既发生差异甲基化又同时发生差异表达的基因,进行GO生物分子功能富集分析.结果发现低甲基化的基因皆与蛋白质及核苷酸结合功能相关,高甲基化基因则主要富集到与运输载体活性相关的分子功能上.这些研究结果,有助于我们从基因功能角度进一步理解乳腺癌发生的原因,对乳腺癌的预后和临床诊断起到帮助作用.     

胞嘧啶甲基化前后的势能变化研究

人们推测,普遍存在于DNA中的胞嘧啶的甲基化作用很可能具有重要的生物学功能,但这些功能的性质至今仍旧不太清楚.大量的实验和我们近几年来所做的理论研究以及其它的研究都表明,生物分子的反应性会因某些位置引入甲基基团而受到复什的影响. 若干年来,不少人认为DNA的甲基化与基团调控有关,并十分引人注目,但实验事实却令人捉摸不定.为了探讨DNA甲基化作用与基因功能的关系,我们在对胞嘧啶碱基的甲基化作量子生物学分析的基础上,又对其C_5位甲基化前后的势能和分子静电势变化作了计算. 方法1,胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶的势能图计算公式:     

γ-干扰素在宫颈上皮内瘤变及宫颈鳞癌中的表达及意义

目的:探讨γ-干扰素(γ-Interferon,γ-IFN)在宫颈上皮内瘤变及宫颈鳞癌中的表达及意义.方法:应用免疫组化S-P法检测20例宫颈鳞癌,48例宫颈CIN及10例正常宫颈组织中γ-IFN的表达并应用图像分析技术及阳性单位(positive unit,PU)值表达γ-IFN免疫组化阳性反应的结果.结果:(1)γ-IFN在正常宫颈上皮、宫颈CIN及宫颈鳞癌中表达的PU值分别为(30.80±2.62)、(16.47±1.25)及(9.80±1.62),3组比较P＜0.05;(2)在宫颈CIN Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中γ-IFN表达的PU值为(18.17±2.35)、(13.48±1.75)、(10.20±3.54),3组比较P＜0.01;(3)在高分化、中分化及低分化宫颈鳞癌中γ-IFN表达的PU值分别为(12.75±1.06)、(9.48±1.28)及(6.06±1.13),3组比较P＜0.05;而在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期宫颈鳞癌中Y-IFN表达的PU值分别为(8.91±0.72)、(8.05±0.77)及(7.79±0.45),3组比较P＞0.05.结论:富颈CIN及宫颈鳞癌的发生与γ-IFN的表达减弱有关;而且宫颈鳞癌细胞的分化程度也与γ-IFN表达下调有关.     

宫颈上皮内肿瘤及宫颈鳞状细胞癌组织中HPV16感染与hTERT,P21wafl和Ki67表达关系的分析

为了探讨宫颈鳞状细胞癌(SCC)及宫颈上皮内肿瘤(CIN)组织中人乳头瘤病毒(HPV)16感染及端粒酶反转录蛋白(hTERT)、抑癌基因P21wafl和增生抗原Ki67表达的关系及其意义,在130例正常宫颈组织及宫颈上皮内瘤样病变和宫颈鳞状细胞癌组织中,利用组织芯片技术,结合原位杂交技术,检测HPV16感染及结合免疫组织化学技术检测hTERT,Ki67,P21wafl的表达.结果表明:1)CINⅡ级、CINⅢ级、原位癌、浸润性鳞癌组织HPV16杂交信号阳性率显著高于正常宫颈组织(P均＜0.05),浸润性鳞癌HPV16阳性率也显著高于CIN(χ2=5.670,P=0.017).2)hTERT在CINⅡ级、CINⅢ级、原位癌、浸润性鳞癌组织中的表达都显著高于正常宫颈组织(P均＜0.05),浸涧性鳞癌hTERT表达率也显著高于原位癌及CIN(χ2=18.870,P=0.000;χ2=66.390,P=0.000).CIN三级之间相比差异也具显著统计学意义(χ2=30.468,P=0.000).3)P21wafl在浸润性鳞癌组织中的阳性率显著低于正常宫颈组织(P＜0.05),但与CIN相比差异无显著统计学意义(P＞0.05).CIN三级之间P21wafl表达差异也无显著统计学意义(P＞0.05).4)随着宫颈病变组织学严重程度的增加,Ki67表达逐渐增加(P＜0.05).5)HPV16感染率与hTERT表达之间呈正相关(P＜0.05,r=0.339),与P21wafl表达之间呈负相关(P＜0.05,r=-0.337),与Ki67表达无相关性(P＞0.05):hTERT与P21wafl之间呈负相关(P＜0.05,r=-0.248),与Ki67表达呈正相关(P＜0.05,r=0.398);P21wafl与Ki67表达呈负相关(P＜0.05,r=-0.446).可见:在宫颈上皮内肿瘤及宫颈鳞状细胞癌组织中,hTERT,P21wafl,Ki67表达改变可能与HPV16感染有关,且几者之间互相作用,共同影响CIN的发展及宫颈鳞癌的发生.这些指标综合分析可能为阐明HPV16的恶性转化机制以及为提高宫颈鳞癌及其癌前病变诊断率提供参考依据.组织芯片技术是高效的研究基因及其表达产物的技术平台.     

宫颈鳞状细胞癌中联合检测HPV DNA和C-myc基因及E2F1蛋白的研究

为探究高危型人乳头瘤病毒（Human Papilloma Virus,HPV） DNA、C-myc基因及E2F1蛋白在宫颈鳞状细胞癌演进过程中的表达,以及与宫颈鳞状细胞癌临床病理特征的相关性,本研究选取广西医科大学第二附属医院活检及手术切除的宫颈组织石蜡标本,以正常宫颈组织作为对照组,宫颈上皮内瘤变（Cervical Intraepithelial Neoplasia,CIN）Ⅰ级、Ⅱ-Ⅲ级和宫颈鳞状细胞癌组织为实验组。采用原位杂交技术检测高危型HPV （16,18,31,33,35,39） DNA,以及采用免疫组织化学法检测C-myc基因、E2F1蛋白在不同组织中的表达情况。结果显示,随着宫颈病变加重,HPV DNA、C-myc基因及E2F1蛋白的阳性表达率均呈明显增高的趋势（P<0.05）;HPV DNA与C-myc基因、HPV DNA与E2F1蛋白、C-myc基因与E2F1蛋白之间的表达均呈正相关（P<0.05）;在宫颈鳞状细胞癌中,C-myc基因的表达随着肿瘤分化程度的降低而增高（P<0.05）。综上可知,高危型HPV、C-myc基因及E2F1蛋白与宫颈鳞状细胞癌的发生关系密切,联合检测及适时干预有利于预防宫颈癌的发生。     

宫颈癌中CALCA基因甲基化与HPV16-E7致癌蛋白表达的依存关系

 选择HPV16 阳性宫颈癌细胞和RNAi 技术,研究CALCA 基因甲基化与HPV16-E7 致癌蛋白表达的依存关系。构建慢病毒siRNA 重组表达载体,建立稳定表达HPV16-E7-siRNA 的RNAi 细胞模型。以SiHa 细胞和RNAi 细胞模型的基因组DNA 为对象,选择CALCA 基因启动子区富含CpG 岛屿的目标片段,使用亚硫酸氢盐测序法（bisulfite sequencing PCR,BSP）筛查分析,研究RNAi 抑制HPV16-E 7 表达后,CALCA 基因甲基化状态的可逆性程度。选出CALCA 基因启动子区富含CpG 位点的目标片段,其大小为365 bp,含有19 个CpG 岛屿,发现其中13 个CpG 位点的胞嘧啶在SiHa 细胞基因组DNA 中发生了甲基化（13/19）,而在表达HPV16-E7-siRNA 的RNAi 细胞模型中,所有CpG 位点的甲基化已发生逆转（0/19 位点）。本研究从细胞水平证明了宫颈癌细胞内的CALCA 基因启动子高甲基化对HPV16-E7 致癌蛋白表达有依赖性,为进一步研究E7 蛋白的作用及致癌机制奠定了重要的物质基础。     

乳腺癌Jab1蛋白调控Nov基因的表达受甲基化水平影响

为探讨癌基因Jab1在乳腺癌发生发展中的功能,首先在乳腺癌细胞MDA231中建立了慢病毒介导的Jab1基因的表达干扰系统,并通过人基因表达谱芯片分析结果以及实时定量PCR实验筛选出受Jab1调控的下游基因;此外,通过实时定量PCR以及Western blot实验证实Jab1干扰表达能降低Nov基因在转录和翻译水平表达,而且Nov启动子区域存在4个高甲基化CpG位点.进一步使用甲基转移酶抑制剂处理Jab1干扰表达细胞,发现与未使用抑制剂处理细胞相比,Nov基因的mRNA和蛋白质表达水平发生明显上调,说明Jab1基因调控Nov表达受甲基化水平的影响,提示Jab1可能是通过表观遗传学水平调控Nov基因的表达.     

C57小鼠胸腺和睾丸中mPer1基因启动子区CpGs甲基化分析

利用实时定量PCR方法检测胸腺和睾丸组织中mper1基因表达时相特点,采用亚硫氢酸修饰法对两种组织两个时间点该基因2个启动子区域5个E-box CpGs甲基化情况进行研究.结果显示:C57 BL/6J小鼠胸腺和睾丸组织中mPer1基因表达没有显著波动性,mPer1基因启动子区CpGs呈低甲基化状态(<10%).两种组织中E3和E4甲基化频率存在显著差异(P<0.01).在睾丸中,不同时间点E3和E4甲基化频率有显著变化(P<0.01).说明在睾丸中,mPer1启动子E-box3的甲基化状态能够随时间波动.但在胸腺和睾丸中,甲基化并不是mPer1基因调节的主要方式.     

ZrxCe1-xO2的制备及其氢氧化物前驱体的热分解过程研究

采用共沉淀法制备了不同铈锆比的ZrxCe1-xO2(x=0,0.1,0.3,0.5,0.7,0.9,1.0)固溶体.利用热分析方法研究了Zrx(OH)4x.Ce1-x(OH)4(1-x)体系的热分解过程,并运用XRD对其热分解产物进行了表征.实验表明Zrx(OH)4x.Ce1-x(OH)4(1-x)在空气中的热分解是一步完成的,随着锆含量的增加分解温度逐渐提高.应用微分法和积分法相结合对该分解过程的分解机理进行了推测,得出了一系列分解反应的表观活化能E和指前因子A.发现其热分解反应遵循Zhuralev-Lesokin-Tempelman三维扩散机理,其动力学方程为:f(α)=3/2(1-α)4/3[(1-α)-1/3-1]-1;g(α)=[(1-α)-1/3-1]2,其表观活化能大小与样品中的锆含量有关.     

子宫颈癌抑癌基因P16第一外显子CpG岛异常甲基化

利用限制性核酸内切酶-PCR方法分析33例肿瘤组织和15例正常组织抑癌基因p16第一外显子SacⅡ和SmaⅠ酶切位点甲基化,应用SPSS软件进行统计分析。结果显示,18例子宫颈癌在抑癌基因p16第一外显子SacⅡ位点甲基化,8例子宫颈癌在SmaⅠ位点甲基化。正常组织仅有两例在抑癌基因p16第一外显子SacⅡ位点甲基化,正常组织在SmaⅠ位点没有甲基化。另外,抑癌基因p16第一外显子SacⅡ和SmaⅠ酶切位点甲基化易发生在肿瘤的早期。抑癌基因p16第一外显子SacⅡ和SmaⅠ酶切位点甲基化与子宫颈癌相关。     

细胞周期调控相关蛋白Cyclin D1、CDK 4和pRb在宫颈鳞癌中的表达及意义

应用免疫组化方法检测100 例宫颈鳞状细胞癌及50 例非癌宫颈组织中Cyclin D1、CDK 4表达和pRb磷酸化状态,探讨了细胞周期调控相关蛋白CyclinD1、CDK4和pRb在宫颈鳞癌中表达及其意义.结果表明:Cyclin D1和CDK4在宫颈鳞癌组中阳性率分别为75%、87%,与非癌宫颈组相比,差异有统计学意义(P<0.05);pRb磷酸化在2组中差异有统计学意义(P<0.01).这提示Cyclin D1、CDK4 蛋白的高表达及pRb的高磷酸化可能与宫颈鳞癌的发生发展有关.     

甲状腺乳头状癌RASSF1A启动子异常甲基化的检测

为了研究甲状腺乳头状癌组织中RASSF1A基因启动子区甲基化状态,探讨其甲基化与临床参数之间的关系,运用甲基化特异性PCR(MSP)技术,对51例甲状腺乳头状癌组织及10例正常甲状腺组织中RASSF1A基因的甲基化状况进行分析。结果表明:甲状腺乳头状癌组织中RASSF1A基因甲基化率为68.6%(35/51),而正常甲状腺组织中未检测到该基因的甲基化,两者之间的差异有统计学意义(P<0.05);RASSF1A基因甲基化与患者年龄、性别无相关性与肿瘤的浸润和转移有相关性,差异有统计学意义(P<0.05)。因此,RASSF1A基因甲基化是甲状腺乳头状癌组织中常见的分子生物学事件,在腺癌的发生发展过程中发挥重要作用。