CM-DiI标记兔外周血平滑肌祖细胞可行性分析

采用荧光染料CM-DiI标记兔外周血平滑肌祖细胞(SPC),评价其生物可行性.分离和培养SPC,采用CMDiI进行标记,通过荧光显微镜和流式细胞仪检测标记效果和传代后的细胞标记率.同时,进行细胞爬片培养后免疫荧光染色,观察标记后细胞表达平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、钙调节蛋白(Calponin)和增殖细胞核抗原(PCNA)的情况.进行台盼蓝排斥实验、细胞粘附实验、细胞增殖实验和细胞迁移实验,观察标记后的SPC存活率以及粘附、增殖和迁移能力的变化.结果发现,培养4d左右可见SPC开始生长,一周后出现SPC克隆.通过免疫荧光和流式细胞术分析,CM-DiI标记率为96%左右,连续传代2周后标记率仍在40%以上.标记后的细胞可表达α-SMA、Calponin和PCNA.同时发现,标记后的细胞存活率无明显降低,细胞粘附能力、增殖能力和迁移能力无明显改变.本研究证明采用CM-DiI标记SPC操作简便,效果好,不改变细胞表型,不影响细胞的存活率和粘附、增殖及迁移能力,可作为SPC的荧光示踪剂.     

外周血内皮祖细胞在去细胞猪主动脉瓣膜上种植的体外观察

为在体外观察外周血内皮祖细胞种植到去细胞猪主动脉瓣上的生长情况.采用TritonX-100联合胰蛋白酶、核酸酶去除猪主动脉瓣膜细胞.从志愿者外周血中分离培养内皮祖细胞,免疫荧光鉴定细胞后.将从外周血培养的EPC种植到去细胞猪主动脉瓣膜上,用HE、免疫组化染色和免疫荧光染色观察种植效果.结果显示猪主动脉瓣内的细胞去除彻底,但纤维支架保存良好.人外周血培养出的细胞,免疫荧光染色示ac-LDL和UEA-1阳性,提示为内皮祖细胞,种植后行HE染色可见到去细胞猪主动脉瓣膜表面单层内皮细胞生长,并且表达von Willebrand因子和CD31.     

左旋精氨酸对大鼠主动脉平滑肌细胞增殖和血管内皮生长因子表达的的影响

观察左旋精氨酸(L-Arg)对大鼠主动脉平滑肌细胞一氧化氮(NO)含量,细胞增殖以及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,探讨其发生机制。原代培养的大鼠主动脉血管平滑肌细胞分为2组,对照组和L-Arg组。各组培养24 h后检测NO、XTT、VEGFmRNA。L-Arg组NO释放量,VEGF表达量远远高于对照组(P<0.01),但XTT显示细胞增殖活性明显下降(P<0.01)。L-Arg可有效抑制血管平滑肌细胞的增殖、增加NO、VEGF的表达,其机制可能与NO的作用,以及NO与VEGF之间的相互调控有关。     

兔血管平滑肌细胞和聚羟基丁酯（PHB）的细胞相容性实验研究

探索血管平滑肌细胞和新型可降解材料聚羟基西酯（PHB）的细胞相容性,为组织人工血管的构建寻找理想的支架材料。将组织法体外培养的兔血管平滑肌细胞种植在PHB膜片和PHB三维微孔支架上,在相差显微镜下观察细胞的粘附和生长情况,用MTT法测定细胞粘附率和细胞增殖指数,复合培养7d后进行扫描电镜观察并用流式细胞仪（FCM）测定细胞周期、DNA指数。结果兔血管平滑肌细胞在PHB膜片上粘附率为77％,细胞增殖符合细胞的生长曲线,在PHB三维微孔支架上生长情况良好,并被证实为二倍体细胞。结论是兔血管平滑肌细胞和聚羟基西酯（PHB）的细胞相容性较好,但细胞与材料间的粘附有待进一步改善。     

兔尿道海绵体平滑肌细胞的原代培养及鉴定

目的为构建组织工程化尿道提供种子细胞。方法切取新西兰兔阴茎头．采用组织块贴壁培养法体外原代培养，光镜、HE染色等观察细胞形态，MTT法作生长曲线间接反应细胞增殖能力，以及免疫组化法鉴定细胞本质。结果经10～14d养后，培养瓶底铺满梭状细胞，呈明显的“峰一谷”样生长。免疫组化法鉴定确认为尿道海绵体平滑肌细胞。结论兔阴茎头平滑肌细胞组织块贴壁法培养简便可靠，细胞可大量扩增，可为于组织工程尿道构建的研究提供种子细胞。     

内皮前体细胞的分离与培养

骨髓、外周血和脐血中包含内皮前体细胞,具有分化为成熟内皮细胞的能力,在血管新生和血管修复中起到功能性重要作用,因此,内皮前体细胞的分离与体外培养对于血管疾病的治疗具有重要的意义。本文主要论述了内皮前体细胞的分离、培养、鉴定以及在血管生成治疗中的作用。     

猪冠状动脉平滑肌细胞的分离、培养及鉴定

目的:建立体外分离培养猪冠状动脉血平滑肌细胞(PCASMC)的技术方法并观察其生长特征.方法:酶联合消化法原代分离猪冠状动脉来源的CASMC,利用倒置显微镜观察细胞生长情况;免疫荧光染色法鉴定细胞;台盼蓝法、绘制生长曲线法测定冠状动脉PCASMC传代细胞的成活率和生长特征.结果:分离培养的细胞3d后呈梭形生长,7~8d后生长迅速可传代;第2代细胞在显微镜下观察3~5d即可见典型"峰-谷"状生长;免疫荧光染色显示胞浆内α-平滑肌肌动蛋白表达阳性,细胞成活率为97.5%;细胞生长曲线近似"S"形.结论:本研究建立了高效分离和培养PCASMC的方法,细胞均稳定地表达α-平滑肌肌动蛋白,为血管疾病的研究提供了理想的细胞模型.     

猪冠状动脉平滑肌细胞的分离、培养及鉴定

目的:建立体外分离培养猪冠状动脉血平滑肌细胞(PCASMC)的技术方法并观察其生长特征.方法:酶联合消化法原代分离猪冠状动脉来源的CASMC,利用倒置显微镜观察细胞生长情况;免疫荧光染色法鉴定细胞;台盼蓝法、绘制生长曲线法测定冠状动脉PCASMC传代细胞的成活率和生长特征.结果:分离培养的细胞3d后呈梭形生长,7~8d后生长迅速可传代;第2代细胞在显微镜下观察3~5d即可见典型"峰-谷"状生长;免疫荧光染色显示胞浆内α-平滑肌肌动蛋白表达阳性,细胞成活率为97.5%;细胞生长曲线近似"S"形.结论:本研究建立了高效分离和培养PCASMC的方法,细胞均稳定地表达α-平滑肌肌动蛋白,为血管疾病的研究提供了理想的细胞模型.     

超声对体外培养大鼠血管平滑肌细胞增殖影响

探讨影响大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的超声辐照强度和时间,分别用30、60、100、150、200W等辐照强度和10、30、60、100 s等辐照时间处理VSMCs.MTT法和细胞上清液NO含量测定法检测细胞的增殖状态.研究结果表明:超声辐照强度为30、60 W和时间为100 s时抑制细胞的增殖显著,且时间与强度之间无互作效应.     

血管内皮生长因子反义核酸增强HL60和K562细胞对As2O3的敏感性

目的：探讨血管内皮生长因子(VEGF)反义核酸能否提高HL60和K562细胞对三氧化二砷(As2O3)的敏感性。方法：采用经筛选所得的最优反义核酸(A7)，20个碱基经过全硫代修饰；以脂质体介导转染细胞，反义核酸和AsO3联合作用72h以后，用MTT法检测细胞生长情况，求IC50值；用ELISA法检测培养液中VEGF蛋白的浓度，用流式细胞仪检测细胞凋亡百分数。结果：VEGF反义核酸可显降低HL60、K562细胞对As2O3的IC50值，下调VEGF蛋白的表达，增加As2O3诱导的HL60、K562细胞凋亡作用。结论：VEGF反义核酸具有增强HL60和K562细胞对As2O3的敏感性，增强As2O3诱导的HL60和K562细胞凋亡作用；提示内源性VEGF蛋白具有使细胞产生耐药性的作用。     

当归注射液对兔主动脉平滑肌细胞中增殖细胞核抗原表达的影响

目的：观察当归注射液对平滑肌细胞（ Ｓ Ｍ Ｃ） 中增殖细胞核抗原（ Ｐ Ｃ Ｎ Ａ） 表达的影响。方法：用免疫组织化学 Ｌ Ｓ Ａ Ｂ 法检测培养的兔主动脉 Ｓ Ｍ Ｃ 中 Ｐ Ｃ Ｎ Ａ 的表达,同时测定培养液中超氧化物歧化酶（ Ｓ Ｏ Ｄ） 、脂质过氧化物（ Ｌ Ｐ Ｏ） 、前列环素（ Ｐ Ｇ Ｉ２） 及环磷酸腺苷（ｃ Ａ Ｍ Ｐ） 的含量。结果：当归注射液能增加 Ｓ Ｏ Ｄ 活性,降低 Ｌ Ｐ Ｏ 和升高 Ｐ Ｇ Ｉ２ 、ｃ Ａ Ｍ Ｐ 水平,抑制 Ｓ Ｍ Ｃ 中 Ｐ Ｃ Ｎ Ａ 的表达（ Ｐ＜ ００５ ～００１） 。结论：当归有抑制 Ｓ Ｍ Ｃ 增殖的作用。     

Regulation of angiotensinⅡon Gaq/11 protein of vascular smooth muscle cell and its underlying mechanism

To study the regulation of angiotensin Ⅱ(Ang Ⅱ) on Gαq/11 protein of vascular smooth muscle cell (VSMC) and its underlying mechanism, the protein synthesis was detected by [3H]-leucine incorporation. G?q/11 expression was measured by Western blot in cultured VSMC of rat aorta. The results showed that the level of G?q/11 was downregulated after stimulated by AngⅡ for 1-6 h, while it was upregulated significantly by 12-24 h stimulation (P < 0.01) in VSMC. The [3H]-leucine incorporation of VSMC was increased after 24 h Ang Ⅱ stimulation. The biphase regulation of Ang Ⅱ on G?q/11 protein was blocked by the Ang Ⅱ type Ⅰ receptor (AT1) specific antagnist losartan or PLC inhibitor U73122, while PD98059 did not have this effect. These data indicated that Ang Ⅱ contributed to VSMC hypertrophy by regulating the level of G?q/11, and this effect was mediated mainly through AT1 receptor-PLC signal transduction pathway.     

Screening of functionalized self-assembling peptide nanofiber scaffolds with angiogenic activity for endothelial cell growth

Promotion of angiogenesis in tissue engineering is of vital significance to the survival of transplants,which leads the way of tissue regeneration.In this study,we screened six short peptides with potentially angiogenic activities to functionalize self-assembling peptide nanofiber scaffolds RADA16-I(Ac-(RADA)_4-CONH_2).Fluorescence microscopy images of endothelial cells morphology on peptide scaffolds exhibited good cell attachments and Survivals on these six functionalized peptide scaffolds, especially ...     

西洋参叶二醇组皂苷抑制血管平滑肌细胞增殖及影响原癌基因表达的研究

观察PQDS对VSMC增殖及原癌基因c-myc的mRNA表达的影响,探讨PQDS抑制VSMC的增殖作用及相关机制。方法用组织贴块法培养大鼠胸主动脉VSMC作为研究对象,用AngⅡ诱导VSMC增殖,随机分为：空白对照组、AngⅡ模型组、AngⅡ＋PQDS 25、50、100mg/L不同剂量组。用MTT法、流式细胞术、RT-PCR法观察PQDS对细胞增殖、细胞周期、增殖指数及原癌基因c-myc的mRNA表达的影响。结果PQDS可减低VSMC的增殖能力,将增殖的VSMC抑制在G0/G1期,可以下调VSMC中的原癌基因c-myc的mRNA表达。结论PQDS能抑制VSMC增殖,其机制可能与下调原癌基因c-myc的表达有关。     

维甲酸对胎儿动脉导管和动脉平滑肌细胞的增殖及信号传导通路的影响

目的研究维甲酸在体外对胎儿动脉导管、主动脉及肺动脉平滑肌细胞的增殖活性和其相应的细胞信号传导通路—ERK1/2细胞信号传导通路的影响。方法6例经水囊引产后的胎儿动脉导管、主动脉及肺动脉平滑肌细胞经原代培养及传代培养(5代以内),通过免疫组织化学方法和ELISA方法检测维甲酸对细胞增殖核抗原的表达和ERK1/2细胞信号传导通路的OD值,并与对照组进行比较。结果①胎儿动脉导管平滑肌细胞:维甲酸组PCNA表达升高,同时伴有ERK1/2的OD值升高。②主动脉平滑肌细胞:维甲酸组PCNA表达降低,同时伴有ERK1/2的OD值降低。③肺动脉平滑肌细胞:维甲酸组PCNA和ERK1/2的OD值与对照组相比,无显著性差异(P>0.05)。结论不同来源的平滑肌细胞有着不同的生物学特性,对维甲酸的反应截然不同。     

清热解毒药对血管平滑肌细胞增殖、细胞周期的影响

目的 :观察清热解毒药双花、公英、虎杖、连翘对血管平滑肌细胞生长、贴壁和增殖抑制作用 ,并从对细胞周期的影响角度分析它们的作用机制。方法 :采用细胞计数、MTT法和流式细胞技术。结果 :双花、公英、虎杖、连翘对h PDGF B/B刺激下的平滑肌细胞生长和贴壁均有抑制作用。对平滑肌细胞增殖抑制率分别达 9.2 6%～ 77.35% ,7.78%～ 62 .65% ,5.88%～ 47.81 % ,3.98%～ 33.35% ,其增殖抑制作用呈量效时效关系。通过对细胞周期分析知道 ,双花、公英、虎杖均可以减少 S期 ,增加 G0 /G1期细胞数目。结论 :清热解毒药双花、公英、虎杖、连翘对平滑肌细胞生长及增殖有抑制作用 ,其作用机制可能是通过抑制 DNA合成 ,减少进入 S期细胞数目 ,使细胞增殖停留在 G0 /G1期来实现的     

紫堇总生物碱对血压和离体主动脉平滑肌张力的影响

紫堇总生物碱经耳脉静脉注射家兔,观察血压变化;制备离体主动脉平滑肌条,将其固定于灌流肌槽中记录离体主动脉平滑肌条张力变化.观察了紫堇总生物碱对家兔动脉血压的影响以及对去甲肾上腺素(NA)诱发的离体主动脉肌条的收缩的影响.结果表明,静脉注射紫堇总生物碱可引起动脉血压降低(P<0 05);单独加入紫堇总生物碱未观察到离体血管紧张性的改变,但在NA作用的基础上加入紫堇总生物碱后,引起离体血管收缩效应减弱(P<0 05).因此,紫堇总生物碱具有降低血压和抑制NA引起的血管的收缩效应.