啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)营养缺陷型的筛选及原生质体融合

本文采用营养缺陷型的互补进行了啤酒酵母原生质体融合产物的筛选。从DNA含量分析看,融合子多为三倍体,少数为四倍体,融合子的生长速度和酒精产率都比亲株高,种内原生质体融合率为1.21×10~(-4)。     

通过红曲霉-土曲霉属间原生质体融合提高Monacolin K产量

为获得高产Monacolin K的红曲霉菌株,将高产Monacolin K的土曲霉Aspergillus terreus CA99与低产Monacolin K的红曲霉Monascus anka M-3进行原生质体融合．生长24 h的A．terrus CA99和M．anka M-3菌株用0．5％溶壁酶、0．3％蜗牛酶和0．3％纤维素酶混合酶液分别在34℃和30℃下处理5 h和3．5 h,原生质体的形成率分别为1．76×10~7/mL和1．68×10~7/mL．两种原生质体分别置于30W的紫外灯下,距离30 cm照射3 min灭活,等浓度混合后用浓度为30％的PEG 6000融合15min．再生平板上共选取363株融合子,从中筛选得到多株Monacolin K产量高于出发菌株的高产融合子,其中有10株产量的提高幅度超过60％,有2株融合子(F49和F104)产量提高了将近一倍,分别为460μg/mL和457μg/mL．对F49的发酵培养基进行优化,Monacolin K发酵单位达到了1216μg/mL．     

米曲霉与黑曲霉原生质体种间电融合杂交育种

研究了培养基、菌龄、缓冲系统、渗稳剂、酶系统等因素对米曲霉和黑曲霉原生质体制备和再生的影响，探讨了电融合的最佳条件。通过种间原生质体电融合，得到了稳定的重组子。测定了融合子的生长速度、蛋白酶活性和酯酶同工酶酶谱，与亲本进行比较，得到两株生长较快、蛋白质酶活性较高的融合菌株，拮抗实验表明，他们是不同于亲本菌的新菌种。     

米曲霉F16原生质体的制备和再生研究

目的:研究菌龄、酶液组成、酶解时间、酶解温度、渗透压稳定剂、培养基成分等因素对米曲霉F16原生质体制备和再生的影响。结果表明,米曲霉原生质体制备和再生的最佳条件是:菌龄15h,酶液为0.75%纤维素酶、0.75%蜗牛酶、0.5%溶菌酶的混合酶液,酶解时间2.5h,温度为28℃,最适原生质体再生培养基为含有0.6mol/LNaCl的PDA培养基。     

紫罗兰与桂竹香原生质体培养及电激细胞融合的研究

采用电激细胞融合的方法 ,对紫罗兰MatthiolaincanaR Br与桂竹香CheiranthuscheiriL 原生质体培养及电激细胞融合效率导入最适条件作了探讨。紫罗兰的子叶原生质体分裂初期培养最适条件 :培养基为 1 2MS。培养基组成中 ,蔗糖质量分数为 4%、甘露糖醇浓度为 0 6mol L。加入谷酰胺酶无机态氮源时 ,效果明显。次之 ,加入植物生长调节物质 1mg LBA也达到高分裂率。再者 ,添加玉米素时效果也甚好。根据原生质分离前的子叶在 5℃预处理分裂率最高 ,培养温度 2 4～ 30℃为宜。电激细胞融合 (singlepairs)产生效率高的条件为 :紫罗兰原生质体密度 1× 10个 mL ,高周波电强度 1MHz ,15 0V cm ,脉冲幅 70 μs;桂竹香原生质体密度 1× 10个 mL高周波电强度 1MHz,10 0V cm ,脉冲幅 30 μs。     

曲霉原生质体的制备与非对称灭活

为提高菌丝原生质体的释放量和活力,分别考查了碳源、菌龄、渗透压稳定剂、酶浓度、酶解时间及再生培养基种类对Aspergillus oryzaeHN3042和Aspergillus niger CICC2377原生质体释放和再生的影响,并研究了两个亲本原生质体的非对称灭活参数.确定了亲本原生质体的适宜制备参数.结果表明,以MPY液体培养基为菌丝培养基、0.7mol/L NaCl复合0.4mol/L山梨醇为渗透压稳定剂、以高渗豆汁固体培养基为再生培养基,原生质体有30%以上的再生率.通过非对称灭活曲线确定Aspergillus oryzae HN3042原生质体于15W紫光灯垂直距离13cm处照射15min,Aspergillus niger CICC2377原生质体于65℃水浴10min,可使亲本原生质体临界失活.     

衣康酸产生菌-土曲霉T-730原生质体的制备和再生

以衣康酸产生菌土曲霉T-730为供试菌株,研究了菌丝体培养方式、酶配比、菌丝的菌龄、酶解温度和时间、再生培养方法等因素对土曲霉原生质体形成和再生的影响．结果表明：采用液体静置培养12h～14h的菌丝体,在含有纤维素酶0．6％,蜗牛酶0．3%,溶菌酶0．1％的混合酶系统中,置35℃酶解3.5h,原生质体形成率最高;采用双层平板培养法于32℃再生,再生率达到70.6%     

异常汉逊酵母原生质体形成和再生研究

采用多因子正交实验确定了一株异常汉逊酵母(Hansenula anomala)原生质体形成和再生的最佳条件。对数前期细胞在1％蜗牛酶、0.1％巯基乙醇(ME)。0.1％EOTA,0.9mol.l~(-1)甘露醇和pH5.4,35℃条件下处理30分钟,原生质体形成率和再生事分别为91.4％和9.31％,原生质体形成率×再生率值最大(8.51％)。     

利用原生质体融合技术筛选红霉素优良菌株

以红霉素高产菌HE-08-6及低产优组分菌HA-08-20为出发菌株,其原生质体经紫外诱变后在适宜条件下进行融合,再生培养后挑取融合子89株,经筛选得到3株具有二亲本优良性状的高产菌株HEA-08-01,HEA-08-02,HEA-08-03.其化学效价较出发菌株HA-08-20提高约25%,产品的红霉素A组分含量较出发菌株HE-08-6提高约26%.传代培养证明该菌株具有一定的遗传稳定性,在50L-Fus智能发酵罐上连续3批发酵结果表明,该优良菌种在提高红霉素产品质量及效价上取得较大进展,具有推广应用价值.     

红曲霉Monascus sanguineus X1处理黄水的培养基优化及酯化液制备

黄水是白酒酿造的主要副产物之一,富含多种有机质,可用于制备酯化液促进白酒增香,提高其利用率。研究了一株高产酯化酶的红曲霉菌株Monascus sanguineus X1,以酯化酶活力为指标,从碳源、碳氮比、接种量和pH值4个方面对X1菌株的培养基进行单因素实验及正交试验优化;采用酯化酶液处理黄水,制备酯化液,研究了黄水、乙醇、己酸等酯化前体物质添加量对酯化液制备的影响。结果表明,该红曲霉优化发酵培养基组分(以100mL计):大米粉7.0g,大豆蛋白胨2.0g,NaNO₃ 0.2g,KH₂PO₄ 0.15g,MgSO₄·7H₂O 0.1g,培养基初始pH值5.0,接种量10%(体积分数)。在此条件下,添加体积分数为10%的黄水和体积分数为4%的乙醇,酶活力可达745.80U/mL。向酯化酶液中加入体积分数为0.8%的己酸和体积分数为20%的乙醇继续培养1d后,酯化液中己酸乙酯的体积分数可达0.121%;而向酯化酶液中补加体积分数为10%的黄水后,己酸乙酯和乳酸乙酯的体积分数分别可达0.055% 和0.032%。该结果旨在为将黄水资源用于白酒增香提供理论参考。     

酵母原生质体形成中的电镜观察

用蜗牛酶处理对数期啤酒酵母和异常汉逊酵母细胞,可以有效地从中分离到原生质体透射电镜观察证明了细胞中周质体的存在,揭示了酵母原生质体的释放机理和蜗牛酶的作用位点。     

光合细菌种间原生质体融合及融合子鉴定

以浓度为3mg/l的溶菌酶溶液处理对数生长期的光合细菌球形红假单胞菌(丙酸钠~-)和沼泽红假单胞菌(甘露糖醇~-)50min,获得两菌体形成的原生质体,再生率分别为86％和62％。等量的两亲株原生质体在35％聚乙二醇(PEG,MW.6000)诱导下融合5min,融合率为2.1×10~(-4)。经影印法鉴定,生成的融合子可以分别在丙酸钠和甘露糖醇为唯一碳源的培养基上生长。融合子的体积为3.63um~3,约为两亲株的体积之和。融合子菌落形态特征界于两亲株之间,其降解底物中有机物COD_(cr)的能力,优于任一亲本菌株。获得的融合子杂种细胞,存在着高效降解利用机污染物的优势。     

黑木耳激光诱变及营养缺陷型突变体筛选

利用 He- Ne激光和 YAG激光照射黑木耳担孢子诱发突变 ,共获得 14株营养缺陷型突变菌株 ,并用生长谱法和营养物逐个减少法对缺陷型类型进行了鉴定。实验结果表明 ,利用激光技术诱发黑木耳突变效果良好 ,其突变频率 (0 .0 5～ 0 .19)比传统的紫外线法明显提高。     

出芽短梗霉的原生质体形成及再生研究

采用多因素实验正交优选法对出芽短梗霉（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍｐｕｌｕｌａｎｓ）的原生质体制备和再生条件进行了研究．发现在用ＹＥＰＤ作生长培养基,菌龄２４ｈ,复合酶处理（含０．２５％（ｗ）蜗牛酶＋０．２５％（ｗ）纤维素酶）,０．６ｍｏｌ／ＬＫＮＯ３作渗透压稳定剂的情况下,原生质体制备率最高,酶解１ｈ,制备率为１００％,再生率为０．３５％．如用ＰＤＡ为再生基础培养基,在添加５０ｍｍｏｌ／ＬＣａＣｌ２,１．０％（ｗ）ＰＥＧ（ＭＷ６０００）等再生促进因子的情况下,再生率可提高到１．２３％     

啤酒酵母原生质体融合育种及性能检验

介绍啤酒酵母原生质体融合的杂交方法。通过对重组体的培养观察，检查其形态并测定其生理特性，以选择优良重组体。     

红曲色素生产菌的诱变筛选及培养

本文从Ａｓ．３．７８２作出发菌群,经激光器诱变,获得一株红曲色素高产菌株,通过对该菌株深层发酵培养以及生长测定和色价测定,摸索出适合大量色素的最佳培养基：碳源为栗米粉,氮源为黄豆粉,发酵周期为１４４ｈｒ,发酵液色价可达１８６μ／ｍｌ。     

高产γ-氨基丁酸的红曲霉菌株筛选及发酵条件优化

从实验室保藏的11种红曲霉中,筛选出高产γ-氨基丁酸的红曲霉CH-1菌株.研究了发酵温度、时间、接种量、谷氨酸钠添加量等发酵条件对红曲霉CH-1产GABA含量的影响.经单因素实验及正交试验后得出红曲霉CH-1发酵大米产γ-氨基丁酸的较佳发酵条件为：发酵温度30℃,发酵时间9 d,接种量17%,谷氨酸钠添加量0.10 g,在此条件下,红曲霉CH-1发酵大米产GABA为1.93 mg/g,经高效液相色谱检测,桔霉素含量为0.01μg/g,低于国家标准1μg/g,可利用该产品开发更多形式的红曲食品.