中华绒螯蟹Eriocheir sinensis两个地理种群的微卫星DNA多态性分析

为了获取中华绒螯蟹群体遗传多态性的基本数据，寻找合适的遗传标记区分不同种类及不同水系的河蟹种群，采用微卫星DNA分型技术，对江苏地区两个地理种群（本地种与荷兰种）的中华绒螯蟹共计140个样本，通过DNA提取、PCR扩增、聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染检测的方法，进行了两个微卫星基因座（Esin 67和Esin 87）的遗传多态性分析．结果表明：中华绒螯蟹本地种与荷兰种的两个微卫星基因座均有较好的多态性；在Esin 67基因座中，本地种和荷兰种绒螯蟹均有8个等位基因，两组的最高频率等位基因均为8重复序列；在Esin 87基因座中，本地种绒螯蟹有9个等位基因，荷兰种有7个等位基因，两组的最高频率等位基因均为9重复序列．同时中华绒螯蟹荷兰种这两个基因座的杂合度和多态性信息含量均高于本地种．这些结果提示了江苏本地的绒螯蟹可能受到其它地区河蟹的种质污染，基因多态性下降，因此需要加强对种质资源遗传变异的深入研究，以便采取措施对河蟹资源进行合理的管理、保护和开发利用．     

绒螯蟹的分类与中华绒螯蟹种质资源研究进展

绒螯蟹主要有新绒螯蟹属(Neoeriocheir)和绒螯蟹属(Eriocheir)两个有效属,新绒螯蟹属仅有狭颚绒螯蟹(N.leptognatha)一个有效种,绒螯蟹属有直额绒螯蟹(E.recta)和日本绒螯蟹(E.japonica)两个有效种,日本绒螯蟹有日本绒螯蟹指名亚种,日本绒螯蟹中华亚种和日本绒螯蟹合浦亚种3个不同的地理亚种.分布在我国大陆的是日本绒螯蟹中华亚种和日本绒螯蟹合浦亚种.中华绒螯蟹在我国大陆被按水系分成南方组与北方组,组内水系间为同种不同地理种群.利用RAPD等分子生物学技术,可以鉴别出中华绒螯蟹的中华亚种和合浦亚种,各种群间的鉴别还有待于进一步研究.     

中华绒螯蟹与日本绒螯蟹线粒体COI基因片段的序列比较研究

以相应引物PCR扩增了黄河口中华绒螯蟹线粒体细胞色素氧化酶Ⅰ亚基基因（COI）片段,PCR产物经T载体连接之后进行了克隆、测序,得到709bp的碱基序列,其A,T,G,C含量分别为34．41％,27．93％,20．03％和17．63％。并比较它与珠江流域中华绒螯蟹COI序列和日本绒螯蟹COI序列的差异,发现黄河口中华绒螯蟹与珠江 流域中华绒螯蟹COI序列完全相同,而与日本绒螯蟹差异非常明显,709或658（不计引物）位点中核苷酸差异数为32,核苷酸差异率为4．51％或4．86％（不计引物）,其中25个位点为转换,7个位点为颠换。作者倾向于支持存在中华绒螯蟹和日本绒螯蟹,或它们为同一种的两个地理亚种的观点。     

中华绒螯蟹弧菌病及病原检验

对一起自然发生的中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis H．Milne-Edwards）病例进行了检验,结果表明该病是由鳗利斯顿氏菌（Listonella anguillarum）所引起的病害。对从病（死）蟹肝胰腺中分离做纯培养的6株菌（HF010522-1至HF010522-6）进行了形态特征、主要理化特性等方面的鉴定;同时,选择代表菌株（HF010522-1）对健康蟹进行了人工感染试验,结果显示出较强的致病作用;另外,测定了HF010522-1菌株的16S rRNA基因序列、构建了系统发育树;选用37种抗菌类药物对3株菌做药敏试验,结果均表现对头孢噻肟等31种药物呈现敏感或高度敏感、对头孢拉啶低度敏感、对青霉素G等5种耐药。     

中华绒螯蟹内源性白斑综合症病毒基因EjsWSSV的克隆与鉴定(英文)

基于已获得的表达序列标签序列,应用RACE技术从中华绒螯蟹基因组中获得了一个白斑综合症病毒基因(EjsWSSV)的全长cDNA序列,全长为3 864 bp并包含一个3 732 bp的开放阅读框,编码一个138.25 kDa的含1 243个氨基酸的多肽,编码的氨基酸序列包含一个VWA结构域.通过序列比对、序列结构比较和一些生物信息学预测分析,表明EjsWSSV蛋白序列与白斑综合症病毒基因组的ORF16具有高同源性,它不含有信号肽和跨膜区,为非分泌型和α-螺旋型蛋白,可能定位于细胞质.通过PCR检测验证,EjsWSSV基因可能为内源性病毒基因.     

克隆与序列分析中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis）HSP70基因全长ORF的RACE

采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆中华绒螯蟹(Edocheirsinensis)的Hsp70基因并进行序列分析.以中华绒螯蟹卵组织cDNA为模板,克隆测序后拼接得到一条长2 429 bp的cDNA序列,序列分析表明其覆盖了完整编码区,编码649个氨基酸.经antheprot分析发现2个Hsp70基因的签名序列:IFDLGGGTFDVSIL,IVLVGGSTRIPKIQK;Dnak特征基序DLGTF-S-V;非细胞器基序:RARFEEL;核定位信号标签:KKDPSESKRALRRL;胞质Hsp70特征基序GPTIEEVD.经BLASTn和BLASTx软件分析,该编码区核苷酸序列与凡纳滨对虾(Litopenaeus uannamei)、斑节对虾(Penaeus monodon)的相似性分别为85.30%和84.89%.根据核苷酸序列所推导出的Hsp70氨基酸序列,其与斑节对虾、罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)的相似性分别为93.23%和93.40%.本研究克隆了中华绒螯蟹的Hsp70基因,为进一步深入研究锯缘青蟹的抗逆机理及其遗传改良奠定了基础.     

中华绒螯蟹呼肠孤病毒病组织病理学观察

取纯化病毒人工感染的中华绒鳌蟹(Erioeheir sinensis)组织进行超薄切片，用电镜观察呼肠孤病毒感染所引起的蟹组织病理学变化．结果表明：该病毒能感染中华绒螯蟹的肠、肝胰腺、心脏等多种组织．在感染组织的细胞质中可观察到55nm的无囊膜球状病毒，但观察不到病毒包涵体．随着病毒的增殖复制，可观察到细胞核中染色质凝结、电子密度增高，线粒体组织结构严重破坏、内脊消失，粗面内质网异常发达。溶酶体大量出现等明显的细胞病变．     

莠去津对中华绒螯蟹蜕皮激素分泌的影响

为了研究除草剂莠去津对中华绒螯蟹蜕皮激素分泌的影响,利用不同质量浓度(0.001,0.01,0.1,1mg/L)的莠去津对中华绒螯蟹进行染毒处理,采用酶联免疫吸附技术(ELISA)分析其对中华绒螯蟹血清蜕皮激素含量的影响.结果表明:低质量浓度(0.001,0.01mg/L)以及高质量浓度(1mg/L)莠去津暴露后,中华绒螯蟹血清中蜕皮激素含量相较对照组无显著变化,而中间质量浓度0.1mg/L的蜕皮激素含量则显著低于对照组,该质量浓度下中华绒螯蟹的蜕皮会受到一定的影响.     

中华绒螯蟹高血糖素的分离及其功能初探

以中华绒螯蟹眼柄视神经节为材料,通过蛋白液相色谱仪分离具有提高血糖浓度的物质;同种生物体内活性鉴定结果显示,样品9具有高血糖活性,为高血糖素或含有高血糖素.经进一步对样品分离和收集后对其部分生化性质进行分析,初步确定它是具有高血糖的作用和酸性等电点的热稳定产物.     

中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)精子的形态和顶体反应的研究

研究了利用离子载体A23187诱导中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis）精子产生顶体反应的最佳条件．结果表明：从雌性中华绒螫蟹纳精囊中获得的精子，在pH值为6．0，CaCl2浓度为0．2％的人工海水中，用离子载体A23187（40μg／mL）诱导70min，可以得到最大的精子顶体反应率（72％）．在此基础上用光镜观察了顶体反应过程中精子显微结构的变化，并采用天然海水配制的台盼蓝染色液和曙红B染色液对中华绒螯蟹精子的形态进行观察，确定中华绒螫蟹精子的顶体反应过程大致可分为4个阶段：第一阶段为辐射臂收缩，头帽鼓起；第二阶段为顶体囊外翻；第三阶段为顶体管前伸；第四阶段为顶体丝形成．     

中华绒螯蟹致病性嗜水气单胞菌的鉴定及特性

1999年 6月从江苏省启东市某水产养殖场患病濒死的中华绒螯蟹肝胰腺中分离出 3株致病菌 .经回感试验证实了菌株在 2 4小时内对健康蟹的致死率分别为 10 0 %、75 %和 6 0 % ,回感温度升高可导致死亡时间缩短 .经细菌形态、生理生化特性等鉴定为嗜水气单胞菌 ,分别定名为ES 1、ES 2和ES 3菌株 .3株菌的最适生长温度在 35℃ ,pH8,NaCl浓度 0～ 1% .     

中华绒螯蟹二次卵巢发育时肝胰腺的组织结构

中华绒螯蟹肝胰腺肝小管的上皮细胞壁由E细胞(胚细胞)、F细胞(纤维细胞)、R细胞(吸收细胞)和B细胞(分泌细胞)4种细胞组成.二次卵巢发育时肝小管的主要结构特征为:在肝小管中部,几乎都是由R细胞和B细胞组成,表现为肝胰腺活跃的组织特征,R细胞贮存了丰富的脂肪,成熟B细胞转运泡释放入管腔.肝小管管壁细胞纵切面长柱状,横切面多边形,管腔四角星状或三角星状.     

渗透压对中华绒螯蟹生精细胞体外培养的影响

渗透压是影响体外培养细胞生长和存活的重要因子.通过6种渗透压梯度下体外培养的生精细胞的贴壁率、存活率及RNA/DNA值的测定和细胞生长状况实验,研究了渗透压对中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)生精细胞体外培养的影响.实验结果初步确定了中华绒螯蟹生精细胞体外培养的适宜渗透压范围为900～1 000 mmol/L.     

中华绒螯蟹土池生态育苗高产技术的研究

对影响中华绒螯蟹土池生态育苗高产的关键技术进行了详细研讨,结果表明:清池防漏、合理孵幼、调控水质、精心喂养、分级淡化是获取育苗高产的关键所在。     

中华绒螯蟹感光细胞细胞器中的钙离子

用焦锑酸钙沉淀方法对中华绒螯蟹复眼感光细胞的钙离子在亚细胞水平上的分布进行了观察,结果发现细胞的膜下储泡囊、线粒体、多囊体和色素颗粒等细胞器都有焦锑酸钙的沉淀,当感光细胞处于暗适应时细胞器中焦锑酸钙沉淀的量明显多于光适应时细胞中的量,改变细胞外的钙离子浓度也会影响到这些细胞器中钙离子储存量．实验表明,膜下储泡囊、线粒体、多囊体,色素颗粒等储存的钙离子一起参与造成了感光细胞的光适应．     

中华绒螯蟹卵子发生中卵母细胞表面和滤泡细胞的超微结构

利用透射电镜技术观察了中华绒螯蟹卵子发生过程中卵母细胞表面和滤泡细胞超微结构的变化.结果显示:从卵原细胞期到卵黄大量合成时期,滤泡细胞逐渐向卵母细胞迁移,细胞膜向外伸出许多突起,胞质中的细胞器逐渐增多,它们与卵黄蛋白物质一同移入卵周隙.到卵黄合成晚期,滤泡细胞逐渐解体.与此同时卵母细胞表面在卵黄发生初期可见微胞饮小泡;卵黄大量发生期出现大量微绒毛;卵黄合成晚期,卵黄膜形成,卵黄膜上出现多条通道,这些结构为卵母细胞吸收来自滤泡细胞的卵黄蛋白物质提供了保障.