两种方法检测汉坦病毒滴度的比较研究

【摘要】 目的：比较双抗体夹心ELISA法与直接免疫荧光(DFA）法在检测汉坦病毒灵敏度方面的差别。方法：用汉坦病毒76-118株感染Vero-E6细胞,取不同时间点的病毒感染细胞制备细胞爬片或细胞培养物冻融上清,分别用本室制备的抗汉坦病毒单克隆抗体标记荧光素或辣根过氧化物酶（HRP）建立直接免疫荧光法和双抗体夹心ELISA法检测上述细胞中的病毒抗原,并比较两者的检测灵敏度,用空斑形成实验结果作为金标准,以评价两种方法在检测病毒抗原灵敏度方面的差异。结果: 用两种检测方法测定不同时间点的汉坦病毒培养物抗原,双抗体夹心ELISA法不仅检出的时间早,而且其病毒滴度均较IFA法高（P＜0.01）。结论：ELISA法检测汉坦病毒滴度的灵敏度较IFA法更高,并且操作简单,可重复性好,便于大批量规模化检测,因此更适用于汉坦病毒的检测。     

利用^99mTc直接法标记单克隆抗体及其HPLC分析

比较了２－巯基乙醇（２－ＭＥ）、二硫苏糖醇（ＤＴＴ）和抗坏血酸（ＡＡ）做为抗体还原剂进行９９ｍＴｃ直接标记ＩｇＧ的结果．以ＤＴＴ做为抗体还原剂进行了９９ｍＴｃ标记单克隆抗体３Ｈ１１及其Ｆａｂ片段研究．建立了分析鉴定９９ｍＴｃ标记抗体的ＨＰＬＣ方法．采用ＴＳＫ４０００ＳＷ为色谱性（１３μｍ,７．５ｍｍ×３００ｍｍ）和０．１ｍｏｌ／ＬＰＢＳ（ｐＨ７．０）为流动相,同时进行紫外检测和放射性检测,可快速地同时测定样品的蛋白质含量和标记率．     

广西肝细胞癌与丙型肝炎的关系

用４种抗丙型肝炎病毒蛋白的单克隆抗体，免疫酶染色法直接检测肝细胞癌的病理组织中丙肝病毒蛋白。结果８／５２例（１５．４％），一至数种抗体阳性，阳性反应物主要定位于肝和癌细胞的胞浆中，值得注意的是本组几乎全部病例为乙肝，丙肝两种病毒混合感染，表明广西丙型肝炎的混合感染的比较高，乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）加上黄曲霉毒素（ＡＦＢ１）或丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）可能是广西肝细胞癌（ＨＣＣ）高发的原因。     

脊髓灰质炎病毒Ⅰ型抗体胶体金检测试纸条的研制

目的:为研制快速检测脊髓灰质炎病毒Ⅰ型抗体的胶体金试纸条.方法:以辛酸-硫酸铵沉淀法纯化脊髓灰质炎病毒Ⅰ型单克隆抗体,用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,胶体金标记单抗,再结合脊灰病毒抗原形成复合物,固定于金标垫上,将鼠抗人IgG和羊抗鼠IgG分别包被于试纸条的T (检测线)处和C (质控线)处,应用该试纸条进行性能检测.结果:以已知的脊灰病毒Ⅰ型阳性血清作为检测样品,试纸条检测的灵敏度为1:80;特异性试验证明该试纸条与甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、麻疹病毒抗体阳性血清没有交叉反应;检测结果与脊灰病毒Ⅰ型疫苗抗体检测试剂盒(ELISA)试验的符合率为86.7%.结论:该试纸条检测脊灰病毒Ⅰ型的抗体水平具有较好的特异性与灵敏性,适用于大规模临床血清抗体水平检测,具有良好的应用前景.     

抗体形成细胞体外定量测定——溶血空斑技术与溶血素光电比色法的比较(英文)

本文比较了用溶血空斑技术计算小白鼠单个抗体分泌细胞数和用光电比色法测定小鼠脾细胞抗体分泌量的方法。由8个经绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞混合制成的悬液,准确计数后制成每ml含1×10~7及2×10~6细胞数,然后由每个稀释度分别测定PFC及溶血素OD值。PFC测定重复20个平皿,而溶血素OD值测定重复10管。由此计算出两种方法所得数字的标准差与标准误。结果指出,用光电比色测溶血素OD值的方法的准确度要比溶血空斑测定法高2.7—2.8倍。但根据同一试验结果,也发现光电比色法的不足之处,当所用免疫脾细胞数相差5倍时(1×10~7,2×10~6),PFC值相差约6.5倍,而OD值之差不到一倍。就此点看来,光电比色法虽较准确,但其敏感度不如溶血空斑技术。因此单独使用溶血素OD值为测定B细胞功能的指标,则不够理想。溶血空斑测定法虽人为影响因素较多,但如严格控制条件,重复性仍较好。     

两种杂交群（BALB／c♂×不同♀系）与BALB／c小鼠繁殖性能及单抗腹水产量的比较

对两种杂交群（ＢＡＬＢ／ｃ♂×ＫＭ，ＢＡＬＢ／ｃ♂×ＬＡＣＡ♀）的繁殖能力及制备单抗腹水的产量同ＢＡＬＢ／ｃ近交系进行比较。实验表明，两杂交群的各项繁殖指标均优于ＢＡＬＢ／ｃ，总离乳鼠数分别为ＢＡＬＢ／ｃ的１．９８、２．０７倍，接种人肺炎支原体Ｆ８瘤细胞，ｋＣＦ１（ＢＡＬＢ／ｃ×ＫＭＦ１小鼠）的腹水产量为ＢＡＬＢ／ｃ的２．５倍，效价相同；制备六种单抗腹水ＬＣＦ１（ＢＡＬＢ／ｃ×ＬＡＣＡＦ１）的产量均优于ＢＡＬＢ／ｃ，分别为ＢＡＬＢ／ｃ的１．１７～２．８８倍，除Ｅ１０抗体滴度低外，其它各抗体效价相同或接近于ＢＡＬＢ／Ｃ。     

免疫分析试剂异硫氰酸异鲁米诺的发光标记性能研究

研究了新化学发光免疫分析试剂异硫氰酸异鲁米诺（简称ＩＴＣＩ）的发光及标记性能。在ＮａＯＨ－Ｈ_２Ｏ_２－Ｋ_３Ｆｅ（ＣＮ）_６介质中，测定ＩＴＣＩ的线性范围为３个数量级，检测限为６．６×１０^－１１ｍｏｌ／Ｌ，测定５０×１Ｏ^－９ｍｏｌ／ＬＩＴＣＩ，相对标准偏差为５．２％。标记酵母ＲＮＡ、ＡＦＰ抗体和羊抗人抗体（ＳａＨＩｇＧ）的反应条件温和，反应速度较快，标记率较高，每克酵母ＲＮＡ可与１．５×１０^－５ｍｏｌ／ＬＩＴＣＩ结合；标记ＡＦＰ抗体和羊抗人抗体的标记卒分别为０．４０和０．３５。     

灵芝浸液对小鼠免疫功能的调节作用

报道了灵芝对Ｂａｌｂ／ｃ小鼠产生抗绵羊红细胞（ＳＲＢＣ）抗体的能力及对迟发性变态反应（ＤＨＴ）等免疫功能的影响。实验小鼠分为高、中、低剂量组，经胃灌注不同剂量的灵芝浸液，每天灌注１次，连续灌１５ｄ，对照组自由摄水。用ＳＲＢＣ免疫小鼠，免疫后第５ｄ用溶血空斑实验（ＰＦＣ）进行抗体生成细胞检测，以反映Ｂ细胞生成ＩｇＭ抗体的能力；于免疫后第４ｄ用足底增厚法测定ＤＨＴ强度，以检测Ｔ细胞功能；用碳粒廓清实验检测巨噬细胞吞噬功能。结果：高、中剂量组溶血空斑数目明显高于对照组，ｐ＜０．０５；高、中剂量组能明显提高小鼠ＤＨＴ反应程度，ｐ＜０．０５。表明灵芝能提高小鼠Ｔ细胞和Ｂ细胞的功能。碳粒廓清实验用药组与对照组无显著差异。     

BaFCl：Eu^2＋的正电子湮没谱研究

利用正电子湮没谱研究了不同离子数（Ｆ）／离子数（Ｃｌ）比ＢａＦＣｌ：Ｅｕ＾２＋系列粉末样品。实验结果表明：当晶体中的离子数（Ｆ）／离子数（Ｃｌ）〈１时，可以有效地产生Ｆ离子空位缺陷，当离子数（Ｆ）／离子数（Ｃｌ）比值在０．９２附近的空位缺陷浓度最大。     

人α－干扰素基因在小菜蛾细胞中的表达及其影响因素探讨

将含有人α－干扰素（ＩＦＮα）基因的杆状病毒转移载体（ｐＡｃ３７３－ＩＦＮα）与苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＮＰＶ）ＤＮＡ经钙磷沉淀法共转染小菜蛾细胞系（ＢＣＩＲＬ－Ｐｘ２－ＨＮＵ３,Ｐｘ）,空斑纯化后,利用细胞致病效应（ＣＰＥ）抑制法检测得到了干扰素效价（６８７２．６ＩＵ）,证明得到了可以在Ｐｘ细胞中表达ＩＦＮα的重组病毒（Ａｃ－ＩＦＮα）．并探讨了培养温度和血清浓度对ＩＦＮα表达水平的影响,结果表明：在２８℃时,培养基中补加２％的小牛血清,可获得最高的ＩＦＮα效价（１７４３５．９ＩＵ）．     

^99Tc^m通过金属硫蛋白标记抗肿瘤单克隆抗体的研究

本文系统研究了^99Tc^m通过双功能联接剂金属硫蛋白（MT）标记抗肿瘤单克隆体的化学问题，并发展了新的实验方法和技术。用交联剂戊二醛制备MT与抗体（Ab)偶联物（MT－Ab)，偶联率为58％。用还原标记法制备^99Tc-MT-Ab，放射性利用率高达90％以上，而非特异标记低于10％。体外试验表明，在强络合剂竞争时，标记物有较高的稳定性。抗结肠癌单抗CL－3标记物的免疫反应活性保留87％。     

BaFCl:Eu~(2 )的正电子湮没谱研究

利用正电子湮没谱研究了不同离子数（Ｆ）／离子数（Ｃｌ）比ＢａＦＣｌ：Ｅｕ２＋系列粉末样品．实验结果表明：当晶体中的离子数（Ｆ）／离子数（Ｃｌ）＜１时，可以有效地产生Ｆ离子空位缺陷，当离子数（Ｆ）／离子数（Ｃｌ）比值在０．９２附近的空位缺陷浓度最大．     

三带喙库蚊和致倦库蚊实验感染流行性乙型脑炎病毒的研究

目的：探讨流行性乙型脑炎病毒对我国三带喙库蚊和致倦库蚊的易感性。方法：用乙型脑炎病毒（Nak株）经口和胸腔接种感染实验室养殖的三带喙库蚊和致倦库蚊，应用空斑实验方法检测蚊虫体内的病毒存在情况和病毒滴度。结果：经口感染的两种库蚊，共计19组，有14组发生感染，空斑形成单位在3．18～4．7910gPFH/ml；在胸腔接种的两种库蚊中，致倦库蚊在10^0-10^-5稀释滴度时发生感染，最高PFU为6．59 logPFU／ml，三带喙库蚊在10^0-10^-4稀释滴度时发生感染，最PFU为5．74 logPFU／ml。结论：三带喙库蚊和致倦库蚊均对乙型脑炎病毒高度易感，胸腔接种的易感性高于经口感染。     

用In－111通过1B4M－DTPA标记单克隆抗体的研究

研究了双功能联接剂１－（４－异硫氰基苄基）－４－甲基二乙三胺五乙酸（１Ｂ４Ｍ－ＤＴＰＡ）与抗体偶联反应以及用Ｉｎ－１１１标记偶联物的条件，得到了体内外稳定的Ｉｎ－１１１标记抗体；用高纯Ｉｎ－１１１通过１Ｂ４Ｍ－ＤＴＰＡ标记了抗胃癌单抗３Ｈ１１，标记抗体免疫活性保持完好，放射性比活度为２．０×１０￣（１１）Ｂｑ／ｇ；荷瘤裸鼠注射标记物２４ｈ后，即得到靶目标的清晰显像，１６８ｈ的瘤／肝放射性比值为２．０。     

ELISA技术及在甘肃马铃薯脱毒种薯生产中的应用现状

酶联免疫吸附（Ｅｎｚｙｍｅ－ＬｉｎｋｅｄＩｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔＡｓｓａｙ）测定即ＥＬＩＳＡ技术，是近年来继免疫荧光技术与放射免疫分析法之后发展应用于植物病毒检测的新方法。它不仅可以定量测定抗体，也可以鉴定抗原，具有灵敏度高、特异性强、测定方法简单、便于直接观察、可快速大规模检测样品的特点。目前已广泛应用于生物学和医学的许多领域，成为检测鉴定病毒的最新血清学方法之一。１ＥＬＩＳＡ技术的起源与发展１９９６年Ｎａｋａｎｅ和Ａｖｒａｍｅａｓ分别用酶代替荧光色素标记抗体，进行生物组织中抗原的鉴定及定位…     

含氟液晶MB80.5(F)的结构研究

含氟有机化合物Ｃ８Ｈ１７Ｏ－ Ｏ－Ｏ－ＣＯＯ－Ｏ－Ｃ５Ｈ１１（以下简称 ＭＢ８０．５（Ｆ））呈现比较复杂的液晶相。本文对单畴的ＭＢ８０．５（Ｆ）样品，应用Ｘ光衍射技术，采用二维多丝正比位敏计数器来探测，确定了ＭＢ８０．５（Ｆ）呈现的几种液晶相的类型，及其相变温度。本文还测量了ＭＢ８０．５（Ｆ）的分子表现长度、近邻分子的间距、三种近晶相ＳＡ、和ＳＦ的层厚以及ＳＣ相的分子倾斜角与温度的变化关系。     

国产第一代β-hCG避孕疫苗免疫恒河猴的抗体反应及免疫安全性研究

用国产第一代ｈＣＧ避孕疫苗（以β－ｈＣＧ－ＴＴ为免疫原制备的氢氧化铝吸附制剂）免疫成年雌性恒河猴，评价疫苗在实验猴体内诱发抗ｈＣＧ抗体的能力和免疫安全性．结果显示疫苗能在实验猴诱发抗ｈＣＧ抗体，但抗体滴度较低（峰滴度为１４０００），持续时间较短，加入Ｆｒｅｕｎｄ’ｓ佐剂免疫能显著增强动物的抗体反应（峰滴度可达１６４０００），免疫猴对强化免疫有较好的记忆反应．免疫前后各免疫猴血液红细胞数、血红蛋白含量、白细胞数、白细胞分类计数均未见异常，血清谷丙转氨酶、总蛋白、白蛋白等肝脏功能指标也未见异常．免疫猴心、肝、肾、脾、胰腺、腺垂体、卵巢、子宫等器官未发现组织病理学改变．．     

从关系数据库到扩展置标语言文档的数据映射方法研究

为了将关系数据以扩展置标语言（XML）数据的形式发布，分别提出了将关系模式映射为文件类型定义（DTD）和扩展置标语言方案（XMLSchema)的两种规则；非空表元素规则和空表元素规则，前者将关系模式中的表，记录和字段分别映射为表元素，表元素中的记录元素和记录元素中的字段子元素，后者将表映射为表元素，记录映射为表元素算法，前者借助一个链队列和两个栈分别存放解析得到的各级元素的开始，结束标记和属性，后者借助一个链队列存放解析得到的元素标记和属性，它们均可实现将关系数据写入XML文档，最后对实验结果进行了分析，得出在表数目相同，表中字段数也相同的情况下，表元素非空算法略优于空表元素算法的结论。     

脊髓灰质炎病毒I型单克隆抗体的制备

目的: 为建立脊灰病毒Sabin株I型特异的单克隆抗体．方法:以Vero细胞增殖病毒并用蔗糖密度梯度离心法纯化后,用病毒免疫SPF级Balb/c小鼠．取小鼠免疫脾淋巴细胞与SP2/0-Ag14骨髓瘤细胞进行细胞融合,通过间接 ELISA 法筛选抗体阳性的杂交瘤细胞,并用有限稀释法克隆化．用细胞培养法制备脊灰病毒单抗,并以中和试验测定单抗效价．结果:获得了8株分泌抗脊灰病毒Sabin株I型单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中1株G8G7能够稳定分泌抗体．间接ELISA 法测得单抗的效价为1∶8,中和试验测得中和抗体的效价为1∶58．结论:G8G7分泌的抗体为抗脊灰病毒Sabin株I型特异的单克隆抗体.     

抗体夹心酶联免疫吸附法测定鸡白细胞介素-2

利用抗鸡白细胞介素-2（ChIL-2）单克隆抗体作包被抗体、生物素标记的抗ChIL-2多克隆抗体作检测抗体建立了一个抗体夹心酶联免疫吸附测定系统．此系统对鸡白细胞介素乏的检测灵敏度为50pg／mL．两种抗体与鸡干扰素-α和人白细胞介素-2等细胞因子不产生任何非特异性反应．以不同种类的促有丝分裂剂或鸡病毒刺激鸡淋巴细胞，培养液中分泌产生的天然鸡白细胞介素-2的量用此系统检出．在促有丝分裂剂中，植物血凝素（PHA）导致ChIL-2的产生量最高；在病毒方面，传染性法氏囊病毒最能促使ChIL-2的分泌．本研究建立的抗体夹心酶联免疫吸附测定系统为我们以定量方式测定鸡白细胞介素-2提供了一个灵敏度高、特异性好的工具．