农杆菌介导的Bt基因转化马铃薯的研究

马铃薯块茎蛾的危害极为严重,通过植物基因工程将Bt基因的Cry1Ab类型导入马铃薯,以期获得抗虫性提高的马铃薯基因工程植株.以马铃薯品种‘会-2’为受体材料,对影响转化效率的因素进行了优化,结果表明:3号(1/2MSO+50μLAs+2 mL农杆菌悬浮液)浸染液有利于抗性芽的分化,乙酰丁香酮可以提高叶片的转化率,共培养3 d的分化率较高.共获得经过卡那霉素筛选的114个转化植株,对初筛株系进行PCR分子鉴定,结果有55%的植株扩增出目的条带,初步证明Cry1Ab基因已整合到马铃薯的基因组中.转化植株的抗虫性鉴定正在进行中.     

根癌农杆菌介导的马铃薯遗传转化体系的研究

以重庆主栽品种的叶片和茎段为外植体,研究了不同转化条件(菌液浓度、感染时间、预培养及共培养时间)对转化效率的影响,以及选择压和培养基对抗性愈伤出芽的影响,初步建立了马铃薯品种"台湾红"和"Spunta"的遗传转化体系并获得了转化植株.     

根癌农杆菌介导的马铃薯遗传转化体系

随着分子生物学研究的深入,植物功能基因组研究以及后续的大规模基因工程都必将依托于高效的植物遗传转化体系,因此植物遗传转化体系越来越成为分子生物学研究和遗传改良的重要技术基础．农杆菌介导转化法被认为是最具发展潜力的植物遗传转化方法．本文介绍了根癌农杆菌介导的马铃薯遗传转化体系．     

农杆菌介导的单子叶植物基因转化研究进展

综述了影响农杆菌介导单子叶植物基因转化的因素,消除基因沉默的策略及农杆菌介导单子叶植物基因转化的研究进展。     

农杆菌介导法的植物遗传转化

农杆菌介导的基因转化是一种使外源DNA转移到目的植株的天然系统,通过植物表达载体上DNA的加工与转移将外源DNA转运到植物细胞中。因其具有易操作、低费用、高效率、插入片段确定性好和转基因拷贝数低等独特优点,已经成为转基因策略中的首选方法,在植物的遗传转化中得到广泛应用。     

农杆菌介导的胆碱脱氢酶基因(betA)转化小麦及影响转化效率的因素

用LBA4404／pCDH，Agl 1／pUNN2和Ag;P(无质粒)3种菌株分别转化小麦品种济南177、99P、核生3号幼胚诱导的愈伤组织以及济南177的幼胚．其中以胚性愈伤组织为外植体，获得了转基因植株．PCR和PCR-Southem分析证实转化植株中包含了外源基因．通过染色体分析，发现胚性愈伤组织在农杆菌LBA4404侵染后形成的染色体削减比经Agl1侵染和未经感染的对照形成的染色体削减程度更大，甚至发现较多的染色体断片．分析了农杆菌菌株，材料的基因型，外植体类型，培养时间和温度以及筛选的时间和周期对于转化效率的影响．     

农杆菌介导遗传转化中辅助处理方法的改良

在农杆菌菌液与植物材料混合培养时辅以Ｔｗｅｅｎ２０和负压处理。用ｇｕｓ报告基因的瞬间表达作为指标,与仅用Ｔｗｅｅｎ２０或仅用负压处理的样本进行了比较研究。实验结果表明：适当的负压处理可提高转化频率,而过度的负压处理会对材料造成较大的伤害,从而降低其成活率,如同时使用Ｔｗｅｅｎ２０可以减轻这种伤害。     

农杆菌介导的大豆遗传转化

大豆遗传转化的方法很多，其中最常用的是农杆菌介导法。对近年来利用农杆菌法进行大豆遗传转化的外源基因种类、研究进展和存在问题做了全面阐述。     

农杆菌介导GNA基因对水稻的遗传转化

在ｐＣＡＭＢＩＡ３３００质粒中插入带有ＲＳｓ－１启动子的ＧＮＡ基因,并利用农杆菌介导的遗传转化将其导入水稻的微不定芽受体,得到了再生植株。ＰＣＲ,Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ的检测结果初步证明ＧＮＡ基因已经整合到水稻的基因组中并得到表达。     

发根农杆菌A4转化黄瓜获得发状根再生植株

研究以黄瓜栽培品种津研四号为试材,比较了培养基中添激素对自然生根及发状根诱导的影响。无菌苗子叶及下胚轴经发根农杆菌Ａ４侵染后２周诱导出发状根,发状根在无激素的ＭＳ筛选培养基上能够自主生长,在附加ＢＡ２．０ｍｇ／Ｌ,ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ的筛选分化培养基上分化出不定芽,ＧＵＳ染色表明转化植株呈阳性反应。     

根癌农杆菌介导AtNHX1基因转化小麦

利用根癌农杆菌对 3种基因型小麦进行了转化研究 .发现基因型对转化有明显影响 .将小麦品种烟优 36 1、烟 10 3、核生 3号的胚性愈伤组织用含报告基因NPTⅡ和抗盐基因Na H 反向转运AtNHX1的农杆菌菌株pROK2AT GV310 1感染和共培养后 ,用巴龙霉素 5 0 - 15 0mg L筛选抗性愈伤组织及转化植株 .对抗性植株的总DNA用AtNHX1基因的特异引物进行PCR检测 ,目的基因的PCR阳性频率为 1.3(烟 10 3)和 2 .9% (核生 3号 ) .Southern杂交证实外源基因已经整合到小麦的基因组中     

利用农杆菌介导法将抗虫基因导入油菜的研究

以油菜的子叶柄作为转化的受体材料,经农杆菌感染和共培养,在含卡那霉素的筛选培养上诱导产了大量的不定芽,经生根培养,获得了再生植株,通过PCR扩增和基因组Southern杂交分析,证明其中5株为转基因植株,对转基因植株进行抗虫性检测,有2株表现出较好的抗虫性。     

农杆菌介导的玉米遗传转化进展

本文回顾了根瘤农杆菌的玉米遗传转化的发展历史 .对各种影响农杆菌转化玉米效率的关键因子包括农杆菌的菌株与载体 ,受体材料的基因型和发育程度 ,培养环境 ,培养基成分等因素进行了综述 .对发展现状和未来趋势做了讨论 .     

ACC氧化酶反义基因转化青花菜的研究

以青花菜的下胚轴和带1～2mm子叶柄的子叶为转化受体，建立了根癌农杆菌介导的转化体系，获得了含番茄果实ACC氧化酶反义基因的转基因植株。经筛选获得了5株抗性植株，其中1株来自下胚轴，另外4株来自带子叶柄的子叶。PCR及Southern blot检测证实，外源．ACC氧化酶反义基因已整合进其中2株拟转化青花菜植株的基因组。转化植株移栽到室外均能成活，成熟小花蕾的乙烯测定结果表明乙烯的合成受到了不同程度的抑制。     

农杆菌介导的ACC氧化酶反义基因转化甜瓜品种河套蜜瓜的研究

将从甜瓜品种河套蜜瓜中克隆的ACC氧化酶基因cDNA片段反向构建到植物表达载体pROK II中,获得重组质粒pRACO 1,用三亲融合法将其导入根癌农杆菌LBA 4404中,转化河套蜜瓜子叶外植体,在芽诱导培养基M S IAA 0.8 m g/L BA 1.0 m g/L ABA 0.26 m g/L C ef 500 m g/L K an 75 m g/L中诱导生芽,待芽长到2cm左右转入M S IBA 0.5 m g/L C ef 300 m g/L K an 50 m g/L的培养基中诱导生根,1~2周后可诱导产生大量的根,形成完整的转化小植株.经PCR检测证明,目的基因已整合到河套蜜瓜的基因组中.     

农杆菌介导的大豆反义fad2-1基因转化烟草研究

以烟草无菌苗叶片为外植体,通过根癌农杆菌介导法,将大豆反义油酸脱饱和酶基因导入烟草中,经梯度卡那霉素筛选,获得可在含75mg/L卡那霉素选择生根培养基上再生的抗性植株75株,其中67株抗卡那霉素植株的PCR分析扩增出目的片段;RT-PCR分析表明该基因在烟草中表达.结果表明大豆反义油酸脱饱和酶基因在烟草基因组中整合和表达.这为大豆反义油酸脱饱和酶基因转入大豆和表达奠定基础,也为烟草基因工程育种提供了依据.