基于猪链球菌2型烯醇化酶建立的筛查并监控细菌侵袭性感染的ELISA方法

目的探索猪链球菌2型(S.suis2)重组烯醇化酶(Enolase)蛋白的免疫学特性,建立调查S.suis2侵袭性感染的标记和方法,并用于人群及猪群中S.suis 2感染的监控和筛选有效的疫苗抗原。方法 PCR法检测enolase在各血清型菌株中的分布情况,免疫印记检测Enolase的免疫反应性,建立筛查S.suis 2感染的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法。结果 PCR检测显示enolase在多种血清型中广泛存在,Western-blot表明重组Enolase蛋白具有较好的免疫反应性。基于Enolase建立的ELISA结果显示,感染S.suis 2的猪血清中Enolase抗体效价较高。结论基于Enolase建立的ELISA方法能有效地用于S.suis 2感染的筛查和监控。     

2型猪链球菌中国强毒株05ZYH33 ofs N-片段基因敲除株的构建

通过生物信息学分析2型猪链球菌（Streptococcus suis serotype 2,S．suis2）中国强毒株05ZYH33的基凶组,预测并发现猪链球菌血清浑浊因子（Opacityfactor of S．suis,OFS）的编码基因ofs.为了构建ofsN-末端片段ofs^37-683的基因敲除株,首先构建中间为壮观霉素抗性基因,两侧为ofs^37-683上、下游同源序列的基因敲除质粒,并对该质粒进行PCR和酶切鉴定．根据同源重组的原理,通过电转化方法筛选得到ofs^37-683基因敲除株．PCR、测序和RT—PCR分析结果均显示ofs^37-683已完全被壮观霉素抗性基因替代,证实ofs^37-683基因敲除株构建成功．该敲除株的获得为进一步研究ofs在猪链球菌2型致病机制中的作用奠定基础．     

四川S.suis2强毒株溶血素样蛋白HLP序列信息分析及克隆表达产物活性检测

对四川猪链球菌2型(S.suis 2)强毒株05ZYH33溶血素样蛋白(hemolysin-like protein,HLP)编码基因hlp进行序列信息分析、分子克隆表达及溶血活性检测,深入探讨HLP的致病机制.用Blast和Clustal X程序对HLP进行基因同源性分析,用Signal P 4.1和TMHMM Server 2.0分析HLP氨基酸序列.设计合成hlp引物进行PCR扩增,先后将hlp克隆入p MD-18T载体和p ET30a表达载体中,构建p ET30a::hly原核表达质粒.将重组质粒转化至E.coli BL21中诱导表达,并对重组HLP蛋白进行纯化和溶血活性检测.同源性分析表明HLP与多种具有溶血活性的蛋白相似性较高.氨基酸序列分析发现HLP具有信号肽和跨膜区,且由DUF21、CBS和Cor CHly C 3部分组成.序列测定显示hly片段全长1 335 bp,编码445个氨基酸.重组质粒经诱导表达和纯化后电泳显示,HLP分子量约为70 k Da,具有溶血活性.结果表明,HLP是一个膜结合蛋白,不同于能够分泌到细胞外的溶血素Suilysin.重组HLP具有一定的溶血效价,此可能与致病相关.     

猪链球菌分离株的病原学特性

从病死猪体内分离到3株链球菌,并进行了病原学鉴定。细菌在形态上呈链球菌的特征,β或α溶血,分离株的生化试验结果相似,且都不与A~G链球菌群特异性血清发生凝集。经PCR鉴定,结果表明,3株均为猪链球菌2型。动物试验结果表明,3分离株对小鼠的毒力较低,但能在接种细菌12~15 d后使小鼠发病致死。     

西藏虫草属真菌生物学特性研究及其无性型rRNA基因ITS间隔区系统发育分析

研究从新鲜冬虫夏草分离得到的菌株的形态学特征,并验证其对蝙蝠蛾幼虫的侵染能力。对菌株分化的两个亚型菌株进行了生物学特性研究,并对rRNA基因ITS片段进行了系统发育分析。结果表明：①菌株在18±4℃条件下培养两周后,产生乳白色突起,里面有淡黄色孢子,这种情况下的菌体在侵染蝙蝠蛾幼虫后,20天后长出了子实体;②菌株进一步分化成无性型的两个亚型菌株CC-1和CC-3,这两株菌在表观上差异不明显,但是其分生孢子形态上有显著差异。菌株CC-1的分生孢子为线型孢子,而CC-3的分生孢子却为镰刀型孢子,两菌株均存在有性生殖和无性生殖两种生殖方式;③对无性型两菌株CC-1和CC-3的rRNA基因ITS片段的系统发育分析表明,两株菌均与冬虫夏草非常相似。     

食用酵母菌生物特性的研究

研究用的酵母菌是在发酵粉中分离纯化而获得。经形态学观察和糖发酵试验初步鉴定将它归属于汉逊酵母属。试验主要从汉逊酵母菌的生长曲线、蛋白质含量、最适生长温度、生物量等几个方面来研究其生物学特性。结果表明：汉逊酵母菌在室温振荡培养36h时达到生长最高峰。温度28℃,转速120r／min恒温振荡培养,在144h内生物量随着时间的增加而增大,在这个时间段后,生物量趋于稳定;培养12h后,胞外蛋白质含量达到最大,为51.32mg/L。温度在25℃～30℃生长良好。     

一株产纤维素酶的枯草芽孢杆菌 部分生物学特性研究

选用球型压头和十字型压头在RMT-150C岩石力学试验机上对花岗岩分别进行不同加载速率的岩石破碎实验,采用KBD5电磁辐射数据采集系统对岩石破碎过程中产生的电磁辐射信号进行采集处理,应用分形理论分析电磁辐射脉冲数的分形特征.实验结果表明:试件在受载过程中电磁辐射脉冲数与时间具有明显的分形特征,并随加载速率增大电磁辐射信号强度增大,分形维数D也增大,具有很好的相关性;在相同速率的岩石加载破碎条件下,十字型压头电磁辐射分形维数D比球型压头的大,与电磁辐射脉冲信号的强度变化呈相同的规律,利用电磁辐射脉冲信号和分形维数D的相同规律可以更全面地反映岩石的真实破裂过程.     

一株产纤维素酶的枯草芽孢杆菌部分生物学特性研究

为了解藏绵羊源产纤维素酶的芽孢杆菌分离株(SWUN 6407)作为微生物添加剂候选菌株的潜力,用PCR扩增16S r DNA序列对其进行鉴定,刚果红染色法测定其产纤维素酶能力,以比浊法测定其对酸和牛胆盐的耐受力,用纸片法测定其对庆大霉素、链霉素、青霉素G、万古霉素、乙酰螺旋霉素、克林霉素、林可霉素、环丙沙星、红霉素、四环素、卡那霉素、磷霉素、替考拉宁、头孢噻肟、利福平、氨苄西林、呋喃妥因、阿莫西林等18种抗菌药物的敏感性.结果显示,SWUN 6407为枯草芽孢杆菌,水解圈与菌落直径的比值为5.8,在p H 2.0环境中存活率为30.5%,在0.7%牛胆盐环境中存活率为64.1%,对18种抗菌药物均敏感.综上可见,SWUN 6407是纤维素酶高产酶菌株,其耐酸、耐胆盐的能力符合微生物添加剂的要求,且不具有耐药性,是一株良好的高产纤维素酶微生物添加剂候选菌株.     

贵州鸡油菌的应用与生物学特性的研究

为了进一步开发利用贵州鸡油菌资源 ,本文在对贵州鸡油菌资源进行调查的同时 ,对其生物学特性及生长基物作了初步的研究。其结果为 :鸡油菌分布在贵州海拔 2 50～ 1750的地区。子实体生长期为每年的 5～8月 ,生长基物的 pH为 5 8,生长温度为 15 2～ 30 6℃ ,光照强度为 650～ 1650LX ,土壤温度 31 39%～19 4 4 % (土壤深度 1～ 10cm) ,土壤微量元素有 :铝、钡、铍、钴、铬、铜、铁、锰、镍、铅、锑、硅、钛、矾、铟。鸡油菌生长环境的植物种类有 :茅栗、栓皮栎、马尾松、马桑、盐夫木、板栗、化香、槐树、野花椒、地瓜藤、构皮、救军粮。将分离的鸡油菌纯菌种接种于马尾松育苗中 ,能形成菌根 ,可使马尾松幼苗生长速度提高     

人脂肪组织来源干细胞生物学特性研究

为进一步研究脂肪组织来源的干细胞增殖和多向分化潜能,用改进的方法分离脂肪组织来源的干细胞,通过cck-8检测细胞的增殖能力、流式细胞仪检测干细胞相关表面标记的表达、RT-PCR对干细胞相关基因的表达进行分析;并对分离得到的细胞向脂肪、软骨、骨及心肌细胞诱导,观察其多向分化能力.结果显示:采用改进的方法,从400～600 mg脂肪组织可收获约5×105个脂肪组织来源的干细胞,并且细胞可以重叠生长1个月以上,期间细胞表现出几个对数增殖期;所有增殖的细胞其干细胞相关表面标记都呈阳性表达;转录因子Nanog、Oct-4、Sox-2和Rex-1也呈强阳性表达;ADSCs向脂肪、骨、软骨和心肌细胞诱导分化后能够分别表达脂滴、碱性磷酸酶和矿化结节、富含黏多糖的软骨细胞外基质,以及少量心肌特异性连接蛋白Connexin-43,表明ADSCs具有向多个胚层细胞分化的能力.此外,为获得更多具有强增殖能力的细胞,根据生长曲线,对细胞进行每14 d传代而非传统的5 d传代,发现所得到的细胞仍保持强的增殖能力、干细胞表型以及更强的多向分化潜能.     

日本绿露螽的生物学特性研究

日本绿露螽Ducetia japonica Thunberg是直翅目螽蟖科的昆虫,主要以田间及浅坡地里的杂草为食,也吃一些弱小的昆虫。1986～1987年作者在四川卧龙自然保护区发现此种昆虫在这个区以卵越冬,一年发生一代,若虫共有五龄。     

猪链球菌乳酸脱氢酶基因的原核表达及重组蛋白的反应原性研究

为了验证双向电泳筛选出的7型猪链球菌WH分离株免疫相关蛋白乳酸脱氢酶的反应原性,本实验采用克隆表达的方法对其进行研究。根据质谱鉴定的NCBI登录号查找乳酸脱氢酶基因序列,并设计特异性引物,对乳酸脱氢酶基因进行扩增,克隆入p ET30a载体,构建重组质粒p ET30a-LDH,测序后转化入大肠埃希氏菌中。用IPTG进行诱导重组菌,SDS-PAGE和Western blot分析表达产物。SDS-PAGE分析结果显示表达的重组融合蛋白相对分子量为41ku;Western blot分析结果显示该重组蛋白可与7型猪链球菌WH分离株多克隆抗体发生特异性血清学反应。这表明表达的重组LDH蛋白具有良好的反应原性,为预防和控制猪链球菌病提供有效的疫苗候选分子奠定基础。