蛹虫草废弃培养残基中虫草素的提取工艺研究

优化并比较了微波辅助和超声波辅助提取蛹虫草培养残基中虫草素的工艺方法.采用L 9(34)正交试验设计,考察了料液比(g:mL)、乙醇含量(%)、微波功率(微波法)或提取温度(超声波法)、提取时间等4个因素对虫草素提取率的影响.结果表明:微波提取以25倍料液比、40%乙醇、240 W下微波提取1.5 min,提取2次为最佳工艺,该条件下浸膏得率为28.33%,虫草素含量为0.378 mg/g;超声波提取在45 kHz功率下,以25倍料液比、40%乙醇、60℃下超声提取30 min,提取2次为最佳工艺,该条件下浸膏得率为38.24%,虫草素含量为0.362 mg/g.比较了超声波提取2次、微波提取2次、微波—超声波联合提取以及超声—微波联合提取等方式对虫草素的提取效率,最终确定微波提取2次为最佳工艺,该工艺适用于蛹虫草培养残基中虫草素的快速高效提取.     

不同原料来源的虫草素的提取研究概况

虫草素是蛹虫草中有效成分之一,具有多种生理活性和重要的药用价值,因此对虫草素的提取也成为研究热点.随着研究的不断深入,不仅在提取方法上采用更为先进的技术,而且在提取原料上,也从蛹虫草子实体扩展到蛹虫草菌丝体和栽培料,为虫草素的获得开辟了更为广阔的途径.本文对不同原料虫草素的提取相关研究做了较为系统的叙述,并对虫草素的提取进行了展望.     

蛹虫草中活性成分虫草素的研究进展

虫草素具有多重的药理功效,在现代医学中发挥着越来越重要的作用,本研究以蛹虫草为例,详细介绍了提高其虫草素含量的方法 ,以适应强大的市场需求.     

中药蛹虫草的抗肿瘤活性及机制研究

中药治疗肿瘤越来越受到医学界的重视,研究了中药蛹虫草及其人工培植品的主要抗肿瘤相关活性成分的特点及药理作用,探讨了蛹虫草及其人工培植品的抗肿瘤作用及其抗肿瘤机制.随着研究的深入,中药蛹虫草及其人工培植品对人类抗肿瘤将发挥重要作用.     

蛹虫草虫草素和虫草多糖综合提取工艺的研究

蛹虫草（Cordyceps militaris）在我国本草文献中已有记载。近年来的研究更进一步证实了蛹虫草与冬虫夏草C.sinensis有相同或相似的化学成分和药理作用,是可供开发的新产品,并可以之作为冬虫夏草的替代品。现代科学论证蛹虫草不仅具有特殊的营养价值,而且有明显的药用价值。其中尤以虫草素、虫草多糖等多种生物活性物质的药用价值最为显著。虫草素是一种具有抗菌活性的核苷类物质,对核多聚腺苷酸聚合酶有很强的抑制作用。在DNA转录 mRNA过程中使mRNA成熟障碍,抑制癌细胞的生长。并有降血糖的作用。虫草多糖是一种高度分枝的半乳甘露聚糖,它能促进淋巴细胞转化,提高血清1gG的抗体含量和机体的免疫功能,增强机体自身抗癌抑癌的能力。因此分离纯化虫草素和虫草多糖,对此类抗癌药物的开发具有很大社会价值和意义。本次研究以蛹虫草粉末为原料,研究了蛹虫草中虫草素和虫草多糖的综合提取工艺技术,探讨了采用超声波水提法、超声波醇提法、水热回流法和醇热回流法4种提取方法,选择虫草素和虫草多糖的最优提取办法。并通过用正交试验方法研究考察了水热回流法中提取温度、提取次数、提取时间、料液比4个因素对虫草素和虫草多糖综合提取效率的影响。建立了从蛹虫草中综合提取虫草素和虫草多糖的最佳工艺。采用正交试验对蛹虫草中虫草素和虫草多糖综合提取工艺进行了研究,为进一步开发利用提供有价值的参考数据,也将会对今后产品开发研究具有重要的意义。     

HPLC法测定人工蛹虫草子实体中虫草素

为测定人工蛹虫草子实体及培养基中的虫草素，采用高效液相色谱法(HPLC)，以十八烷基硅烷键合相硅胶为固定相；磷酸盐缓冲溶液(pH6．5)-甲醇(85：15)为流动相；检测波长260nm；其流速为lmL／min。结果是人工蛹虫草子实体中虫革素含量在1．1l％～1．44％之间，平均值为1．29％，RSD为9．6％。天然冬虫夏草中仅测得痕量虫草素。结果表明：不同的人工蛹虫草样品中虫草素含量有一定差异，且高于天然冬虫夏草。     

北虫草及其活性成分的研究与开发

冬虫夏草为非常珍贵的天然药材,资源严重缺乏,价格已超过黄金,无法满足社会需求。因北虫草的化学成分和药理功能与冬虫夏草非常相似,其主要功能活性物质含量高于天然冬虫夏草,被作为冬虫夏草的最佳替代品,受到广泛关注和重视,本文总结了近年来北虫草及其生物活性成分的研究与开发结果。     

海藻多肽的提取分离及抗肿瘤活性研究进展

海藻是重要的海洋生物,也是人们食物的重要来源.前期广泛的研究已经证实,海藻含有大量的蛋白质.但由于多肽含量低,在提取纯化时,传统的方法存在一定难度,目前较常用酶解法和化学提取法进行提取,用色谱法和膜分离法进行纯化,从海藻中获取较高纯度的多肽,使用与MS相关的技术对其结构进行鉴定.海藻多肽对抗肿瘤具有较强作用,其作用机制表现在多个方面.本文综述了海藻多肽最新的提取纯化和鉴定方法及抗肿瘤活性的研究进展,为其进一步开发利用提供参考.     

RSM优化蛹虫草菌产虫草素液体发酵培养基

文章采用响应曲面法(RSM)对蛹虫草液体发酵培养基成分葡萄糖、酵母粉、KH2PO4和MgSO4进行优化,并采用多元二次回归方程拟合4种因素与虫草素产量之间的函数关系。通过响应面回归分析,确定了培养基中4因素的最佳质量浓度分别为:葡萄糖30.16g/L,酵母粉10.00g/L,KH2PO42.040g/L,MgSO41.460g/L。在该条件下,响应面模型预测的虫草素产量为63.69mg/L,最佳培养基条件下的验证试验结果为64.15mg/L,与模型的预测值基本一致,表明模型可较好地预测虫草素的产量。     

呋喃骈呋喃木脂素的体外抗肿瘤活性

利用ＭＴＴ快速比色法，以长春新碱（ＶｉｎｃｒｉｓｔｉｎＳｕｌｆａｓ）为阳性对照，研究了从玄参科（Ｓｃｒｏｐｈｕｌａｒｉａｃｅａｅ）兰石草属兰石草（Ｌａｎｃｅａ ｔｉｂｅｔｉｃａ Ｈｏｏｋ Ｆｅｔ Ｔｈｏｍｓ）中提取的呋喃骈呋喃木脂素对人肝癌细胞（ＳＭＭＣ－７７２１），人宫颈癌细胞（Ｈｅｌａ），中国仓鼠肺成纤维细胞（Ｖ７９）及小鼠黑色素肉瘤细胞（Ｂ１６）的体外抗肿瘤活性，结果显示，呋喃骈呋喃木脂素Ｌ     

固相萃取-高效液相色谱法测定蛹虫草中虫草素的含量

建立了超声提取样品、固相萃取-高效液相色谱法(SPE-HPLC)测定蛹虫草中虫草素的方法.实验对样品的提取和净化方法以及检测条件进行了选择和研究,具有操作简便、快速、重现性和精密度好的特点.方法用于实际样品中虫草素的测定,加标回收率在93.2%~98.7%之间,相对标准偏差<3.2%.     

RP-HPLC定量检测蛹虫草培养基中活性成分

建立一种反向高效液相色谱法定量检测蛹虫草培养基中活性成分腺苷含量和虫草素含量的方法.色谱柱为Eclipse XDB-C18柱(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相:0.02 mol/L KH2PO4∶甲醇(体积比85∶15)溶液;流速:1.0 mL/min;检测波长:260 nm.腺苷的线性测量范围为0.5~100μg/mL(R=0.999 9),平均回收率为105.3%,标准品RSD=0.76%(n=5),样品RSD=1.87%(n=5);虫草素的线性测量范围为0.5~100μg/mL(R=0.999 9),平均回收率为104.0%,标准品RSD=0.95%,样品RSD=1.23%.本测定方法线性范围宽、分离度好、具有良好精密度,可定量、准确分析不同蛹虫草培养基中活性成分腺苷和虫草素含量.     

蛹虫草液体培养联产胞外多糖与菌丝虫草素的实验研究

通过对蛹虫草(Cordyceps militaris)液体发酵产胞外多糖和菌丝虫草素的初步实验研究,获得了蛹虫草液体发酵联产胞外多糖和菌丝虫草素的适宜参数.研究结果表明,蛹虫草液体发酵联产胞外多糖和菌丝虫草素的较适宜的氮源是豆粕粉和6%~8%玉米浆粉;较适宜的碳源是玉米面;维生素B1添加量以10 mg/100 m L、微量元素锰添加量以0.01%Mn SO4为宜、培养基初始p H值以5.5为宜;培养温度22~24℃,接种量1%,培养基装量50 m L和5~7 d的培养时间有利于胞外多糖和菌丝虫草素的产生.     

蛹虫草高产菌丝体和虫草菌素的深层培养工艺优化(英文)

蛹虫草Cordyceps militaris是当前用于功能食品和药物开发上较受国内外关注的真菌之一。本研究通过1次一因素法和正交实验设计优化了蛹虫草产虫草菌素和菌丝体的深层培养工艺。最适合菌丝生长的pH值和温度为6.0和20℃,而最适合虫草素积累的pH值和温度为5.0和26℃。蔗糖、蛋白胨、MgSO4、K2HPO4和NAA分别是最适合虫草素积累的碳源、氮源、无机盐和生长因子;培养基的成分对蛹虫草生物量的影响次序为:蔗糖>蛋白胨>MgSO4·7H2O>K2HPO4>NAA;培养基的成分对蛹虫草产虫草素的影响次序为:蛋白胨>K2HPO4>NAA>MgSO4·7H2O>蔗糖。最适合蛹虫草菌丝生长的培养基配比为4%蔗糖,2.5%蛋白胨,0.05%MgSO4·7H2O,0.15%K2HPO4,2.0mg/l NAA;最适合蛹虫草深层发酵产虫草素的培养基配比为4%蔗糖,1.5%蛋白胨,0.05%MgSO4·7H2O,0.05%K2HPO4,4.0mg/l NAA的培养基;在最佳蛹虫草深层发酵产虫草素的工艺条件下,CM8菌株胞外虫草菌素产量达到961.21 mg/l,胞内虫草菌素的含量达到12.87mg/g;菌丝体的产量为22.97 g/l,本研究得出的结论对深层培养提高蛹虫草虫草菌素和菌丝体的产量有借鉴意义。     

蛹虫草纤溶酶液体发酵条件的优化

在发现蛹虫草具有纤溶酶活性的基础上,对蛹虫草产纤溶酶的液体发酵条件进行了优化,以期获得最佳的产酶条件。研究结果表明,蛹虫草纤溶酶的最优培养基组成是：以20 g/L可溶性淀粉为碳源,10 g/L酵母粉为氮源,Mg2＋浓度为7 mmol/L;最适发酵初始pH值为6;最适发酵时间为4 d。     

蛹虫草发酵产物新纤溶酶的分离纯化

笔者所在项目组的前期研究发现,蛹虫草深层培养可以产生至少两种纤溶酶.基于此,文中对蛹虫草深层培养产生的纤溶酶的分离纯化展开了研究.采用硫酸铵盐析、Sephadex G-25凝胶色谱、Phenyl-Sepharose HP疏水相互作用色谱、CM-Sepharose FF弱阳离子交换色谱和Superdex 75凝胶色谱对纤溶酶进行分离.最终纯化后的纤溶酶Ⅰ比活力达1467.44U/mg,纯化倍数为36.07,回收率为5.79%.纤溶酶Ⅱ比活力达1681.58U/mg,纯化倍数为41.33,回收率为4.00%.两种纤溶酶经电泳鉴定均达到电泳纯,相对分子质量分别约为28000和32000.     

北冬虫夏草原生质体的制备及诱变育种

通过对北冬虫夏草(Cordyceps militaris Link)菌种液体发酵培养,离心分离获得菌丝体菌液,分别从渗透压稳定剂、裂解酶、裂解时间及菌龄4个方面优化原生质体制备的条件.结果表明:原生质体制备的最优渗透压稳定剂为0.6 mol/L MgSO_4,最优酶解液为1%纤维素酶,最佳菌龄为5 d,最优裂解时间为2 h.L_(20)(5~4)的正交试验表明,优化条件下制备原生质体为1.46×10~7个/m L.紫外诱变实验结果表明:北冬虫夏草半致死率时的照射剂量约为40 s,诱变距离与致死率成反比,在诱变总时间相同的情况下,诱变受诱变次数影响较小,分次处理和一次处理效果基本相同.以多糖含量为指标,筛选诱变菌株,诱变株多糖含量高于普通菌株,其中17~#菌株多糖含量达6.01%,筛选菌株的稳定性实验表明:继代培养3次,筛选的菌株产多糖能力下降较少,表明筛选菌株具有较好的稳定性.