应用噬菌体检测对虾发光病致病菌哈维氏弧菌的可行性研究

探讨了应用哈维氏弧菌噬菌体检测对虾发光病致病菌哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)的方法和可行性.实验表明,从对虾育苗场分离的哈维氏弧菌噬菌体对对虾发光病致病菌哈维氏弧菌的噬菌作用具有相当高的特异性,它不能裂解同样来源的溶藻弧菌、副溶血性弧菌、光合细菌,却能特异地裂解本实验所用的不同来源的哈维氏弧菌,噬菌斑出现率可达80%~100%,并且噬菌斑的出现率与虾苗发生发光病的发病程度有一定的相关性,可应用于哈维氏弧菌的检测和对虾发光病致病菌的诊断.     

哈维氏弧菌和溶藻弧菌对大黄鱼6种酶活性的影响

以哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)和溶藻弧菌(Vibrio anguilarum)分别对大黄鱼(Pseudosciaena crocea)进行病原接种实验,24 h后测定肝、脾、鳃的碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,AKP)、酸性磷酸酶(Acid phosphatase,ACP)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、溶菌酶(Lysozyme,LSZ)和酚氧化酶(Phenoloxidase,PO)活性.结果表明:弧菌入侵24 h后,与吞噬作用相关的水解酶ACP、AKP变化不显著,肝脏溶菌酶LSZ活性降低,出现典型病症,可能是由于应激反应引起非特异性免疫机能下降所致;抗氧化酶CAT、SOD变化显著,对清除代谢产生的活性氧有重要作用;6种酶中,LSZ、CAT、SOD和PO对病原反应敏感,适合作为2种弧菌入侵的检测指标.     

哈维氏弧菌人工感染大黄鱼的组织病理学研究

从患病大黄鱼病灶中分离出病原哈维氏弧菌,并且人工回接感染大黄鱼,病鱼出现典型的皮肤溃疡病症.对患病大黄鱼进行病理组织学观察,结果发现病鱼病变组织头肾、脾、胸腺、肝和粘膜性淋巴组织肠的上皮细胞出现不同程度的变性以及坏死.细胞超微病变观察发现,这些组织的线粒体出现空泡化,头肾出现较多空泡,肾小管上皮细胞变性、坏死.颗粒细胞的细胞核核膜部分溶解.脾窦和脾索分界不明显,脾颗粒细胞核核膜溶解,胸腺中有较多空泡.肝细胞胞浆内脂滴积累多.肠绒毛萎缩,肠上皮细胞胞质多数线粒体、内质网等相互聚集固缩,粘膜上皮细胞坏死、脱落,以上研究结果有利于今后进行其致病机理的研究.     

哈维氏弧菌TS-628菌株抗原性研究

哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)是海水鱼虾养殖中常见的致病菌,由该菌引发的病害给世界各地的养殖业带来重大经济损失,但对其有效抗原的筛选或相关疫苗的研究报道相当少,对其病害的防治也尚无有效措施.本文以患病青石斑鱼分离到的病原菌哈维氏弧菌TS-628菌株为研究对象,分别提取它的鞭毛蛋白、脂多糖(LPS)和外膜蛋白(OMP),并采用Western blot技术分析检测这3种成分的抗原性.结果显示,鞭毛蛋白主要的免疫印迹带约有4条,其中43、52 ku为主要免疫反应显色带;OMP主要的免疫印迹带约有5条,其中43 ku为最主要免疫反应显色带, 35、38、47和52 ku也具有较强的免疫显色反应.LPS没有检测到免疫印迹反应.这一研究结果将为灵敏检测哈维氏弧菌以及研制高效疫苗奠定基础.     

哈维氏弧菌黑鲷分离株BK-1培养条件优化研究

从患病黑鲷Sparus macrocephalus 的肾脏分离到一致病菌株BK-1,经鉴定为哈维氏弧菌.对哈维氏弧菌BK-1株的最佳生长条件及培养基优化进行了测定.结果表明:不同的培养条件和培养基成份均会影响其产量.哈维氏弧菌最适宜生长条件为:盐度为2%、pH8、温度为30℃;最佳培养基成份为:蛋白胨0.5%,牛肉膏0.75%,甘油0.05%,CuSO40.15 mg/L,CaCl2 0.01 g/L.     

哈维氏弧菌vgrG基因的原核表达及多克隆抗体的制备

VI型分泌系统(T6SS)是革兰氏阴性菌特有的一种多功能分泌系统,它与致病菌的致病性密切相关;而vgrG则是T6SS系统的结构蛋白之一,它与T6SS的功能直接相关.为了获得哈维氏弧菌vgrG基因的外源重组蛋白及制备其多克隆抗体,本研究以哈维氏弧菌QT520菌株的DNA为模板,在扩增获得vgrG基因后,构建了原核表达载体pET32a-vgrG并将其转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行原核表达.结果显示,在16℃和1mmol·L^-1 IPTG诱导20 h的条件下,可诱导重组蛋白rvgrG大量表达,条带大小与预期的分子量(88 kDa)一致;通过Ni²⁺亲和层析柱对融合蛋白rvgrG进行纯化,获得了纯度较高的目的蛋白rvgrG;将rvgrG重组蛋白通过腹腔注入小鼠体内后观察其毒性,结果显示rvgrG对小鼠无毒害作用;进一步用纯化蛋白rvgrG制备多克隆抗体,经ELISA检测,vgrG多克隆抗体的效价高达1∶320 000;蛋白免疫印迹(Western blot)检测表明,本实验所制备的vgrG多克隆抗体特异性强,可为后续进行vgrG蛋白的致病性及致...     

特异性检测卵形鲳鲹源哈维氏弧菌的核酸适配体的筛选与鉴定

哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)是海水养殖动物常见的主要致病菌之一,严重危害着我国华南沿海地区水产养殖业的健康可持续发展.针对哈维氏弧菌的快速检测诊断技术和抑菌技术等方面进行系统研究,并开发具有市场发展潜力的快速检测试剂盒和抗菌功能产品,对控制哈维氏弧菌的危害极其重要.为此,本研究以哈维氏弧菌为靶标,利用指数...     

检测海洋弧菌的酶联免疫吸附试验研究

研究建立中国对虾病原菌－副溶血弧菌的间接酶联免疫吸附试验快速检测技术，间接ＥＬＩＳＡ技术中的副溶血弧菌的特异抗血清由家兔制备，羊抗兔ＩｇＧ用碱性磷酸酶标记，酶的底物为对磷酸基硝基苯。将该技术标准化后，测定了抗血清与１３株其它副溶血弧菌菌株２９株其它弧菌标准菌株的交叉反应，并进行了苗期对虾样品中副溶血弧菌的检测。     

中子辐照技术对中国对虾育苗的影响

实验表明:用剂量为6.75×10~5n/cm~2·s辐照中国对虾受精卵2～3min,其孵化率平均为73.81,成活率为37.56,而对照组则分别为62.26和25.03,辐照组比对照组分别增加了11.55和12.53;经t检查P<0.05,说明差异显著。目前,对虾养殖业正在飞速发展,全世界对虾养殖产量已由1980年的五万吨增长到五十多万吨,亚洲在对虾养殖的产量约占全世界的70％,特别是我国海岸长气侯适宜,对虾养殖业取得了世人瞩目的成就,雄居世界的首位。近年来,国内外利用低剂量电离辐     

长毛对虾育苗中饵料问题的探讨

1999年5～8月,在浙江省海洋水产研究所试验场,用金藻、蛋黄、冰冻轮虫、酵母、虾片、日本产对虾配合饲料、卤虫无节幼体等饵料进行分组投喂培育长毛对虾幼体,结果表明:金藻、冰冻轮虫、卤虫无节幼体作为各期幼体培育时的饵料,具有较好的饲效.     

对虾弧菌病的研究进展——回顾对虾弧菌病的病原种类、致病机制与条件、症状与组织病变及对虾的防御机制

就对虾弧菌病的病原种类、致病机制、典型症状与组织病理变化、致病条件及对虾的防御机制作了一简单回顾,并就对虾弧菌病的中草药防治与基因缺失减毒活疫苗防治途径作了评述与展望.     

凡纳滨对虾育苗水环境的细菌学初探

通过对凡纳滨对虾育苗过程中细菌的数量、组成以及部分水质因子进行全程跟踪检测,分析了甲醛和抗生素对育苗水体细菌的影响,研究了蛭弧菌微生态制剂的水质调节效果.结果表明,使用甲醛和抗生素不能有效控制育苗水体的细菌总数,但能改变水体的优势菌群和组成,保持水体蛭弧菌的优势地位对控制细菌总数有较为明显的效果.     

对虾养殖中弧菌数量与对虾“红腿病”“黄鳃病”关系研究

对虾养殖中弧菌数量与对虾“红腿病”“黄鳃病”关系研究苏永全，蔡心一，翁卫华，王军（厦门大学海洋学系，亚热带海洋研究所）黄淑莘（马尾水产饲料公司福州）弧菌是养殖虾池和对虾消化道的正常菌群之一￣［１］，但其中的某些种如鳗弧菌（Ｖ．ａｎｇｕｔｌ－ｌａｒｕｍ...     

华南地区海水养殖鱼类主要弧菌病原的分离与鉴定

对海南、广东、广西等华南地区的主要海水养殖系统的斜带石斑鱼、红鳍笛鲷、褐点石斑鱼和珍珠龙胆(棕点石斑鱼♀×鞍带石斑鱼♂)等多种海水鱼类的弧菌病开展了流行病学调查,从病鱼体内共分离获得弧菌63株,人工感染试验结果表明,其中4株为强毒株,17株为弱毒株,42株为无毒株.经鉴定,哈维氏弧菌有43株(19株毒力株)、溶藻弧菌7株(1株毒力株)、副溶血弧菌5株、轮虫弧菌2株(1株毒力株)、需钠弧菌1株、无法确定的弧菌属其他细菌5株.     

中国对虾淋巴组织培养细胞中立克次氏体形态及其感染细胞的病理观察

该文报道在中国对虾淋巴组织培养细胞中发现了一种立克次氏体，大小0．2－0．9um，具有链状，双球状，亚铃状等多形性，存在于细胞质中，在感染细胞中有大量包函体样的结构，包涵体周围包有一层膜，膜内存大量不同形态，大小和电子密度的立克次氏体，在包函体之外，也可观察到许多散在的立克次氏体，感染立克次氏体的细胞，都不同程度地出现细胞病变，表现为核膜溶解，核染色质凝聚，部分线粒体膜溶解，粗面内质网水肿。     

浙江沿海中国对虾标志放流试验

1991～1995年，在象山港及六横南部渔区继续进行中国对虾大规模标志放流。阐述了不同体长，在不同时间、地点的标放的标志对虾在浙江新的海域环境条件下移动、分布规律及生长、成活、产卵等情况，进一步验证了与放流虾群行动分布趋于一致，为我省中国对虾生产性放流增殖提供了可行性依据。     

斑节对虾病原菌河流弧菌(I型)的研究

从患"红体综合症"的斑节对虾(penaeus monodon)体内分离到一株细菌6101号,回归感染证实了其致病性,经形态观察以及生理生化特性检测,鉴定为河流弧菌(I型)．提取河流弧菌6101号胞外产物,分析其酶成分,定量检测了胞外产物中蛋白酶、酸性磷酸酯酶和碱性磷酸酯酶的活性,将提取的河流弧菌6101号胞外产物对健康斑节对虾进行致死试验,证实其胞外产物所具有的毒性甚于该菌的菌悬液．电镜观察致死对虾肝组织细胞严重受损,从细胞病理方面进一步证实了病原菌胞外产物的致病性．     

海洋噬菌蛭弧菌对对虾病原菌及其他细菌的寄生作用

用宿主双层琼脂平板法，测定海洋噬菌蛭弧菌对２５株对虾病原菌和大肠杆菌、枯草杆菌、绿脓杆菌及金黄色葡萄球菌的寄生作用，结果表明噬菌蛭弧菌菌株不同寄生的范围不同，但所有供试寄主细菌都能被某些蛭弧菌寄生，形成清晰的噬斑．用相差显微镜和电镜观察蛭弧菌的形态及噬菌过程