小鼠脑脊髓炎病毒GDⅦ株的繁殖及其血清学检查方法

MEV-GDⅦ株脑内接种小鼠5～7天收获的脑悬液,经胰酶处理可获得高滴度HA抗原。本病毒接种BHK-21细胞后5天有细胞病变,而且病毒抗原阳性细胞可达90％。据此建立了HI和玻片EIA法检测GDⅦ血清抗体的方法。已应用于实验小鼠和豚鼠的常规检查。     

反复冻融次数和不同保存温度对伪狂犬病毒的神经环路标记效果的影响

伪狂犬病毒(pseudorabies virus, PRV)是常用于神经环路示踪研究的嗜神经病毒工具之一,然而目前缺乏 PRV的保存条件对其感染滴度以及在体神经环路示踪效果影响的研究.首先,将2 h内在－80℃及室温下同一批次的PRV分别进行1～4次冻融,利用噬斑法在BHK-21细胞上检测其滴度,研究结果显示1～3次冻融对PRV的滴度改变无显著影响,而第4次冻融使PRV病毒的滴度显著下降.其次,从－80℃冰箱中取出同一批次的两份PRV,将其冻融1次,分别在－80℃和－20℃保存两周后,利用噬斑法在BHK-21细胞上检测其滴度;同时,将两份PRV利用在体立体定位分别注射于小鼠齿状回(dentate gyrus, DG)区,取相同的感染时间点,对DG输入环路标记效果进行分析,研究得出不同温度下长期保存对PRV的滴度及标记效果有较大影响.该研究结果对于PRV病毒的保存及其在神经环路标记中的应用具有一定的参考意义.     

HBs和HCVc基因双顺反子质粒在BALB/c小鼠体内的分布

 采用注射含双顺反子质粒后,PCR法扩增不同组织中HBsAg和HCVc基因,同时检测HBV和HCV抗体应答水平.研究注射基因免疫用双顺反子质粒在小鼠组织中的分布.pcDNA3.0BApc154S₂S 1次注射BALB/c小鼠后,24 h内主要分布于血液、肝、脾、骨髓、淋巴结、注射部位肌肉、肺和肾等含血液丰富的组织中.注射后2 d主要在骨髓、血液和注射部位肌肉中存在.7 d后仅在注射部位肌肉中能检测出来,并可持续到第9周.组织切片镜检质粒注射初期肌肉细胞轻度浊肿,随后肌膜细胞轻度增生,未见其它明显的组织病理学变化.质粒多次免疫BALB/c小鼠未见明显的临床症状和病理组织学变化.质粒在小鼠体内不同组织存在时间不一致.     

狂犬病毒糖蛋白衍生物作为靶脑载体初探

血脑屏障（blood-brain barrier, BBB）阻碍了具有治疗潜力的大分子化合物从外周组织进入脑内。为了寻找一种高效、快速通过BBB的靶向性载体,本实验通过罗丹明B标记的狂犬病毒糖蛋白衍生肽（RDP）注射入昆明小鼠体内,与15min、5h取大脑、脊髓及肝、肾等外周组织,冷冻切片观察其在体内的分布,并通过构建pET28a-RDP-luciferase重组质粒,结果发现融合蛋白能快速的穿过血脑屏障分布于中枢神经系统,为治疗中枢神经系统的药物开发提供新的思路。     

敏感鼠系和抵抗鼠系对自然途径接种致死量JHM株鼠肝炎病毒的反应

<正> 现已发现,除宿主基因型和年令外,接种途径、毒株及其传代史,都会影响各株鼠肝炎病毒的致病性和感染情况。同一毒株,如JHM株,以不同途径接种不同品系小鼠所产生的病变、病毒复制部位以及组织中病毒滴度均有差异。给刚断奶的BALB/cByJ小鼠鼻内接种MHV—JHM病毒,死亡率很高,而同样接种随机繁育的CF1小鼠,则无临床症状。此处所报道的工作的目的之一,是要确定经鼻接种致死量MHV—JHM后,该病毒在敏感鼠和抵抗鼠的复制部位。另外,本实验室的体外实验表明:各野生型MHV诱生干扰素的能力均很差,但对干扰素敏感,故本实验还要确定在天然宿主身上是否也有同样现象。第三个目的,是要确定预先感染MHV—JHM能否保护小鼠抵抗致死剂量的同型和同种异型病毒(MHV—3)的感染。     

不规则缺陷管道失效压力影响因素及评价方法

采用实体有限元模型对不规则形状缺陷管道的失效压力进行研究,不规则缺陷由浅腐蚀缺陷和深腐蚀缺陷组成,深腐蚀缺陷包含在浅腐蚀缺陷内;分析深腐蚀缺陷的轴向间距和尺寸对不规则形状缺陷失效压力的影响;基于不规则缺陷等效形状的有效深度提出一种预测不规则形状缺陷管道失效压力的新方法,采用新的评价方法对不规则形状缺陷管道的失效压力进行预测。结果表明：深腐蚀缺陷轴向间距的增加会造成不规则缺陷管道失效压力增加,深度和长度增加会造成失效压力降低,而深腐蚀缺陷的宽度对失效压力基本无影响;新评价方法对不规则形状缺陷管道的失效压力的预测结果与不同等级管道的试验结果吻合较好。     

NOS阳性神经元在小鼠嗅球的形态与分布

目的:观察小鼠嗅球各层一氧化氮合酶(Nitric Oxide Synthase,NOS)阳性神经元的形态与分布.方法:采用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(NADPH-d)法显示NOS阳性神经元在小鼠嗅球中的形态与分布.结果:NOS阳性细胞群主要位于嗅球边缘的嗅小球层和中央腔周围的颗粒层;强阳性神经元主要位于嗅球边缘的嗅小球层内;僧帽细胞层偶见深染的NOS阳性僧帽细胞和簇细胞;弱阳性神经元分布于内颗粒细胞层,浅染且形态较小.结论:小鼠嗅球内有NOS阳性神经元的表达,这种明显的分布可能与小鼠嗅觉灵敏有关,僧帽细胞层深染的NOS阳性僧帽细胞可能与小鼠对气味感知能力相关.     

树突状细胞瘤内注射联合放疗对小鼠肾癌细胞因子的影响

目的研究树突状细胞(Dendritic cell,DC)瘤内注射联合放疗对小鼠肾癌治疗后脾细胞分泌细胞因子水平的变化。方法用Renca肾癌细胞(2.5×106/只)制作小鼠皮下移植瘤模型,接受肿瘤局部放射治疗,7Gy 6脉伏电子线/次,并在肿瘤部位直接注射未负载肿瘤抗原的DC,1×106/次,第28 d处死小鼠。检测肿瘤生长速度和瘤体重量。ELISA检测小鼠脾细胞IL-2I、FN-γI、L-4、IL-10和TNF-α分泌水平。结果与肿瘤组比较,DC联合放疗组小鼠的肿瘤生长速度明显缓慢,肿瘤体积明显减小,脾细胞分泌IL-2、IFN-γ和IL-4的能力显著提高。结论瘤内树突状细胞注射联合放疗能够有效地抑制BALB/c小鼠肾癌的生长。     

采用Ⅶ型胶原酶构建大鼠脑出血模型

目的:利用Ⅶ型胶原酶构建大鼠脑出血模型,为脑出血研究寻找理想的造模方法.方法:使用健康雄性200~250 g Wistar大鼠,采用立体定位注射的方法向大鼠脑内尾状核部位缓慢注入含0.6 U胶原酶Ⅶ的溶液1 L,术后观察大鼠行为学改变,于术后3d和7d分别取材观察血肿形成情况.结果:术后24h大鼠即有明显行为学改变,3 d可以形成直径3 mm左右的血肿,至7 d血肿区神经细胞大量坏死.结论:Ⅶ型胶原酶定位注射可以建立理想稳定的脑出血动物模型.     

海立啮齿杆菌OmpA的原核表达及免疫效果

目的 探讨海立啮齿杆菌(Rh)外膜蛋白A(OmpA)原核表达蛋白对小鼠的免疫效果。方法 采用原核表达、镍离子亲和层析纯化,制备Rh OmpA重组蛋白,并用SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。获得的OmpA目的蛋白经腹腔、肌肉联合注射和滴鼻两种方案免疫ICR小鼠,由ELISA方法测定其抗体滴度。再分别将Rh ATCC12555、嗜肺啮齿杆菌(Rp)ATCC35149和Rh分离株PP320对免疫小鼠腹腔接种攻毒,评价重组蛋白OmpA对小鼠的保护效果。结果 以表达蛋白OmpA为包被抗原的ELISA方法检测免疫小鼠血清中OmpA特异性抗体水平,平均抗体滴度为19.84log₂。免疫小鼠对两标准菌株和PP320的保护率分别为60%、60%和80%,与未免疫小鼠相比死亡率显著降低(P<0.001)。基于OmpA表达蛋白建立的ELISA方法检测嗜肺巴斯德杆菌(Pp)阳性小鼠血清,抗体阳性率为60%。结论 制备的Rh OmpA表达蛋白有良好的免疫原性,对Rh和Rp具有一定的保护效果,为实验动物中呼吸道病原菌的防控提供参考。