粉尘螨Ⅰ、Ⅱ类抗原(Der f 1,Der f 2)的cDNA克隆测序

粉尘螨Der f 1、Der f 2 cDNA的克隆及测序分析.设计合成引物,常规抽提粉尘螨螨体总RNA,RT-PCR获得cDNA,经纯化回收后分别克隆至pMD-18T,转化大肠杆菌E.coli JM109,经PCR初筛挑选阳性克隆并测序.从粉尘螨基因组RNA中扩增出Der f 1、Der f 2 cDNA片段,分别测得其核苷酸序列.Der f 1 cDNA测序结果与GenBank提供的Der f 1基因(emb|X65196.1)去掉内含子后的序列经Blast分析,发现它们核苷酸同源性为99.52%,而Der f 2 cDNA序列与郝敏麒等报道的广州地区粉尘螨Der f 2的cDNA序列(AF346905)相比,未发现有插入序列.成功地对粉尘螨Der f 1、Der f 2 cDNA进行克隆测序,发现不同动物区系粉尘螨的Der f 1、Der f 2 cDNA序列存在差异.     

粉尘螨Der f14基因克隆与分子特征的分析

从纯培养的粉尘螨中,根据本课题组前期合成的尘螨基因序列,将扩增的Der f14分别克隆到pUC57载体中,经扩增后用SmaI双酶切将目的片段连接到 pET-28a表达载体上得到重组质粒pET28a- Der f14.在线软件ExPaSy,NCBI网站对测序结果进行分析.分析结果表明:获得的目的基因Der f14 cDNA全长为5 013 bp.编码蛋白由1 666个氨基酸组成.粉尘螨Der f14与屋尘螨序列比对同源性达95;,信号肽序列存在1～18个氨基酸,二级结构是由a螺旋(35.83;)﹑延伸链(17.17;)﹑无规则区(47;)组成.目的蛋白是一种卵黄蛋白原.     

粉尘螨Der f4基因的克隆和蛋白分子特征分析

从深圳地区采集粉尘螨纯培养,提取总RNA,根据香港中文大学合成的尘螨基因序列并设计的引物,RT-PCR扩增出Der f4基因,克隆到pUC57载体后测序和进行生物信息学分析.将该目的基因克隆到pET-28a表达载体上得到重组质粒pET-28a-Der f4.用生物软件分析尘螨变应原Der f4序列. RT-PCR获得目的基因Der f4 cDNA全长为1593 bp.推测编码蛋白由526个氨基酸组成,生物信息学分析表明,Der f4具有多种磷酸化位点,含有信号肽,为疏水性蛋白,包含淀粉酶抑制剂功能结构域.获得Der f4基因全长,其编码的细胞外疏水性蛋白可能具有淀粉酶抑制剂活性.     

粉尘螨Der f15的基因克隆与其表达载体的构建

先挑取纯培养的粉尘螨,提取总的RNA,后采用RT-PCR方法进行反转录出cDNA.由cDNA提取出目的基因进行片段扩增,产物连接入T载体(pMD18-T).经扩增后,用EcoR I和Xho I双酶切,将目的基因分别连接到pET28和pET32的表达载体上,得到重组质粒pET28和pET32,即粉尘螨的基因克隆与 表达载体构建成功.     

找到特异性过敏和哮喘的病因

开辟治疗慢性过敏的研发新途径 特异性皮炎和哮喘等慢性过敏病症一直以来都没有找到根本有效的治疗方法，让很多患者吃尽了苦头。长久以来，一种叫“好盐基球”的细胞没有受到我们的注意，以日本东京医科牙科大学为中心的研究小组彻底查明了这种细胞正是引发慢性过敏的“司令部”。现在，针对这种细胞进行的新治疗方法的开发受到了极大的关注。     

f1×f2与f1,f2的一些动力性质间的关系研究

利用伪轨跟踪性质和一些其他方法,研究了紧致系统(X1×X2,f1×f2)和(Xi,fi)(i=1,2)的一些动力性质间的关系,有些结果推广了文献[1]、[2]、[3~6]、[9~11]中相应结果.     

Anti-HER2免疫脂质体的制备及其靶向特异性的检测1

目的 将靶向HER2过表达细胞的HER2抗体偶联在纳米脂质体上,探索抗体偶联脂质体的方法.方法 通过乙醇注入法制备脂质体,表面修饰HER2抗体,成功制备Anti-HER2免疫脂质体;由SDS-PAGE电泳检测抗体偶联脂质体的连接效率;通过MTT检测免疫脂质体对乳腺癌细胞的细胞毒性;采用共聚焦显微镜和流式细胞技术检测免疫...     

高集油田高6断块E1f1-E1f2沉积相研究

以取心井单井相标志的精细研究为基础,结合区域地质背景、沉积特征等,确定高集油田高6断块阜宁组一段(E1f1)-阜宁组二段(E1f2)分别为一套三角洲前缘和滨浅湖亚相沉积:三角洲前缘中发育的微相类型包括水下分流河道、河口坝、远砂坝、间湾、席状砂,滨浅湖中则识别出滨浅湖砂坝、滨浅湖滩砂、灰岩、浅湖泥4种沉积微相。对沉积微相平、剖面展布特征进行研究,研究发现:垂向上不同砂组在区内沉积相展布具有一定的时空演化规律;水下分流河道、河口坝、生物灰岩及滨浅湖砂坝微相是油气的富集区和剩余油挖潜的最有利部位。     

条件命题1/f′(ξ_1)+1/f′(ξ_2)=2的证明及推广

利用介值定理和拉格朗日中值定理证明了命题:设函数f(x)在[0,1]上连续,在(0,1)内可导,且f′(x)0,f(0)=0,f(1)=1,则存在ξ1,ξ2∈(0,1),使得1/f′(ξ1)+1/f′(ξ2)=2。通过对命题证明过程的分析,对命题进行了推广。     

兰州地区秋季变应性鼻炎患者血清总IgE及过敏原检测结果分析

回顾性分析兰州地区秋季变应性鼻炎(AR)患者血清总免疫球蛋白E(总IgE)及19种吸入-食入组过敏原检测结果,总结该季节AR患者血清总IgE阳性检出率及主要过敏原种类,为AR患者的疾病防治提供参考依据.选取2017年8月1日-2017年10月31日就诊于甘肃省中医院耳鼻喉科的AR患者52例,检测血清总IgE和19种吸入...     

f1×f2×…×fn及fn的拓扑遍历性

讨论了f1×f2×…×fn及fn的拓扑遍历性,证明了扑拓全遍历,n-拓扑遍历与拓扑遍历是等价的.给出了这个结果在动力系统中的一些应用.得到了f1×f2×…×fn及fn是拓扑遍历的一些充要条件和充分条件,同时还研究了f °g的拓扑遍历性,得到扑拓遍历性质是拓扑共轭不变性.     

特异性抗体和特异性免疫复合物的检测对结核病的诊断意义

以ＥＬＩＳＡ检测１０８例活动性肺结核、３９例稳定期肺结核、３０例肿瘤、１０１例非结核性肺部疾病患者及２０２例正常人血清的抗结核菌纯蛋白衍生物（ＰＰＤ）ＩｇＧ抗体（简称抗－ＰＰＤ）和循环免疫复合物（ＣＩＣ）中的抗－ＰＰＤＩｇＧ抗体（简称ＣＩＣ－ＰＰＤ）。结果表明，活动性肺结核患者的抗－ＰＰＤ和ＣＩＣ－ＰＰＤ水平明显高于正常人和各疾病组患者的水平（Ｐ＜０．００１），但与其病变范围无关。单一测定活动性肺结核患者的抗－ＰＰＤ，敏感性为８５．２％，特异性为９８．５％；测定ＣＩＣ－ＰＰＤ，敏感性为８６．１％．特异性９６．９％。以两者任一项阳性作为诊断活动性肺结核的标准，则敏感性为９３．５％。此外，对１１例活动性肺结核患者的动态观察表明，随着治疗天数的增加和临床症状的改善，患者的抗－ＰＰＤ和ＣＩＣ－ＰＰＤ水平会逐渐降低，前者于治疗后第２０～２４周降至正常水平，后者则于治疗后第１２～１６周降至正常值。研究结果提示测定患者的抗－ＰＰＤ和ＣＩＣ－ＰＰＤ的水平，可用于结核病诊断，对结核病的疗效判定亦有帮助。     

鱼类肌肉中过敏蛋白的检测与分析

采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹(Western blot)方法,分别对淡水鱼(鲤鱼、鲢鱼、鲫鱼)和海水鱼(黄鳍鲷、金鲳)等5种鱼肌肉,鳕鱼丸、鲢鱼丸两种鱼糜制品以及鲮鱼、沙丁鱼、鳗鱼3种鱼罐头中过敏原(小清蛋白)的含量进行了分析.结果显示,应用抗蛙小清蛋白单克隆抗体(PARV-19)可以分别在5种鱼白色肉和红色肉的肌浆蛋白中检测到特异性杂交条带,其分子量大小约为12～14.4 ku,且白色肉中的含量明显高于红色肉.但在5种鱼的肌原纤维蛋白、2种鱼糜制品和3种鱼罐头中,均未检测到小清蛋白.因此得到结论,无论是淡水鱼还是海水鱼,小清蛋白主要存在于白色肉肌浆蛋白中;经过加工的鱼制品中小清蛋白的含量有很大程度的降低.     

11条件命题+=2的证明及推广1/f′（ξ1）+1/f′（ξ2）=2

利用介值定理和拉格朗日中值定理证明了命题：设函数f(x)在[0,1]上连续,在(0,1)内可导,且f ′(x)>0, f(0)=0, f(1)=1,则存在ξ1,ξ2∈(0,1),使得1/f′(ξ1)+1/f′(ξ2)=2。通过对命题证明过程的分析,对命题进行了推广。     

分形分析1/f噪声性能

电子器件的低频噪声通常由闪烁(1/f噪声)噪声、g-r噪声和爆裂噪声3种成分构成。这些噪声通常与晶体管表面状态或内部缺陷有关,其中,1/f噪声已成为对器件的质量评估及可靠性预测的重要指标。提出分形分析方法,对1/f噪声性能进行分析。仿真实验结果验证了该方法的可行性,为今后用分形理论研究器件低频噪声提供了理论依据。     

产生和检测^1O2的化学发光体系

建立了产生和检测单线检测的ＯＨ＾－－ＮａＣｌＯ－Ｈ２Ｏ２－红细胞影泡的化学发光体系，该体系灵敏，可靠，简便，价廉的快速。     

胞壁形式表达融合蛋白Der p2-PEB1重组BCG的构建和鉴定

利用重组BCG技术,构建能以胞壁形式表达屋尘螨Der p2和PEB1抗原的重组BCG口服哮喘疫苗pCW-Der p2-PEB1-rBCG,以pCW-Der p2质粒和pUC-PEB1质粒DNA为模板扩增基因,构建出重组质粒pCW-Der p2-PEB1.将重组质粒电穿导入BCG感受态细胞,潮霉素抗性筛选rBCG阳性克隆.阳性rBCG经PCR特异性扩增目的基因片段Der p2及PEB1,证实其中含有目的基因.用抗Der p2单克隆抗体和制备的小鼠PEB1抗血清对rBCG进行间接免疫荧光鉴定.结果成功扩增了Der p2及PEB1基因,构建出重组质粒pCW-Der p2-PEB1,并将质粒电穿入BCG中,免疫荧光法鉴定其成功.说明成功地构建了胞壁表达Der p2-PEB1融合蛋白重组BCG pCW-Der p2-PEB1-rBCG.为基因工程疫苗的研制奠定了基础.     

急性脑梗死患者血清Lp-PLA2和hs-CRP检测的临床意义

目的:探讨急性脑梗死(ACI)患者血清脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)和超敏C-反应蛋白(hs-CRP)测定的临床价值.方法:测定103例ACI患者及31例健康对照组血清Lp-PLA2和hs-CRP水平,并进行统计学分析.结果:ACI患者血清Lp-PLA2和hs-CRP检测水平分别为(297.36±87.51)ng/m L和(18.27±5.46)mg/L,显著高于健康对照组的(88.37±34.69)ng/m L和(7.15±2.38)mg/L(均P0.01).ACI患者病情越重,血清Lp-PLA2和hs-CRP水平越高(均P0.01).血清Lp-PLA2水平与hs-CRP水平呈显著正相关(r=0.382,P0.05).结论:ACI患者血清Lp-PLA2和hs-CRP水平升高与神经功能缺损程度有关,联合检测两者水平对判断患者病情有一定的临床价值.     

芍药苷单克隆抗体的特异性检测

对已制备的中药活性成分芍药苷的单克隆抗体的效价、敏感度、稳定性以及其与若干化学结构类似物的交叉反应性等进行了测定,据此评价单克隆抗体的免疫反应特异性,为药用植物活性成分的单克隆抗体的制备及其应用研究提供现有条件下的试验方法和依据.检测结果显示免疫小鼠腹水的单抗效价达到1∶ 256 000,来自细胞株P1E6和 P5h10的单抗的灵敏度分别为0.080、0.124 μg/mL,亲和常数1.819×10-7 、2.815 ×10-7 mol/L.同时,所选5种化学结构类似物均显示极低的交叉反应性,证明了芍药苷单克隆抗体的高度特异性.     

1,25(OH)_2VD_3在过敏原特异性免疫治疗花粉过敏哮喘中的应用

以1,25(OH)₂VD₃为佐剂制备软叶针葵花粉变应原疫苗,以小鼠致敏哮喘模型为研究对象进行特异性免疫治疗.通过检测小鼠气道高反应性、血清中特异性抗体、细胞因子以及肺组织病理学切片等指标对治疗模型的构建进行评价,探讨1,25(OH)₂VD₃在过敏原特异性免疫治疗花粉过敏哮喘免疫机制中的作用.结果表明:以1,25(OH)₂VD₃为变应原疫苗能有效抑制花粉特异性IgE的产生和Th2细胞因子IL-4分泌,促进封闭性抗体IgG2a产生和Th1细胞因子IFN-γ的分泌,增加耐受性细胞因子IL-10生产,使Th2反应向Th1反应转变.1,25(OH)₂VD₃在花粉过敏性哮喘治疗中能大幅提高过敏原特异性免疫治疗的疗效.