蛋白质组学的研究进展

蛋白质组学是近几年出现的生物学者研究的热点和新领域.人类基因组"工作框架图"的完成,标志着后基 因组时代的来临,在后基因组时代,研究的中心将从揭示生命的所有遗传信息转移到在整体水平上对功能的研究,主 要以蛋白质组为中心阐述了一些与其相关的概念、研究内容、技术及其应用方面的研究进展;在这其中,蛋白质组学 的相关概念包括结构基因组学和功能蛋白质组学;而研究技术主要有2-DE技术、生物质谱技术、蛋白质芯片技术以及 生物信息学技术等.     

蛋白质组技术的研究进展

基因组学的研究已从结构基因组学转移到功能基因组学上来。以大规模分析蛋白质作为其主要内容的蛋白质组是功能基因组学研究的一个主要内容。综述了蛋白质组研究所使用的主要技术，包括：二维凝胶电泳技术、质谱技术、蛋白质芯片技术、蛋白质复合物纯化技术、酵母双杂交技术、嗜菌体显示技术。     

蛋白质组学及其研究进展

蛋白质组学作为后基因时代研究的一个重要内容,已广泛深入到生命科学和医药学的各个领域,近年来蛋白质组学技术发展迅猛。本文对蛋白质组学的概念、产生背景进行了介绍,综合论述了蛋白质组学的技术路线以及研究进展。     

蛋白质组浅谈

本文将针对蛋白质组的概念、方法、常用研究技术以及目前现状作一简单的介绍 .     

蛋白质组技术的研究进展

基因组学的研究已从结构基因组学转移到功能基因组学上来.以大规模分析蛋白质作为其主要内容的蛋白质组是功能基因组学研究的一个主要内容.综述了蛋白质组研究所使用的主要技术,包括:二维凝胶电泳技术、质谱技术、蛋白质芯片技术、蛋白质复合物纯化技术、酵母双杂交技术、嗜菌体显示技术.     

蛋白质组技术研究进展

探讨了蛋白质组的由来,分析了蛋白质组学研究的特点和内容。综述了研究蛋白质组的技术和方法．其主要包括：双向电泳技术、质谱分析、生物信息学等,并对蛋白质组研究的前景作出了展望。     

金乌贼视神经节蛋白质组分离方法的初步研究

选用TCA/丙酮沉淀法、缓冲液法、柱层析法、裂解液法和裂解液-超速离心法分别提取金乌贼视神经节蛋白质,其中蛋白质得率较高的方法有裂解液-超速离心法、裂解液法,其次为TCA/丙酮沉淀法.经双向凝胶电泳分离,并采用Melanie 4 Trial软件统计蛋白质斑点数目.发现pH 5~8范围的载体两性电解质适合于分离视神经节蛋白质组,其电泳图谱中多数蛋白质斑点清晰可见,显示出高分辩率、重复性好和易取样供质谱分析的优点,适合于开展视神经节蛋白质组学研究.裂解液-超速离心法是金乌贼视神经节最佳蛋白质提取方法.     

用蛋白质组学技术分析家兔MODS血清蛋白质组的方法初探

应用蛋白质组学技术比较家兔肠源性多器官功能障碍综合征(MODS)模型复制前后的血清蛋白质组表达差异,探索该技术在家兔肠源性MODS研究中应用的可能性.取家兔肠源性MODS模型复制前后血清各50 μL,去除高丰度蛋白后用丙酮将洗脱液中的蛋白沉淀,加入水化液使沉淀中的蛋白充分裂解,离心后取上清液上样.双向电泳后银染,用PDQuest7.4软件进行胶图分析,比较两组血清双向电泳图谱中的差异蛋白点.家兔肠源性MODS前后血清双向电泳图谱清晰,分辨率高,重复性好,可以满足进一步研究的需要.其中11个点在复制MODS后表达上调,8个点下调.复制家兔肠源性MODS前后血清双向电泳图谱存在显著差异;初步建立的家兔血清蛋白质双向凝胶电泳技术,将为进一步开展疾病的血清蛋白质组学研究奠定基础.     

蛋白质组亲和分离研究(Ⅰ)蛋白质氨基生物素化反应条件的研究

运用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法,以马心肌红蛋白为代表研究蛋白质氨基生物素化的条件,包括蛋白质与生物素量的关系、反应物浓度、反应完全所需的时间以及蛋白质助溶剂对反应的影响等,为基于生物素—抗生物素蛋白质相互作用的亲和分离,简化复杂蛋白质组体系,实现蛋白质的分析鉴定奠定基础。     

文蛤抗癌多肽抑制肝癌细胞SMMC-7721差异蛋白质组分析

为了研究文蛤抗癌多肽对肝癌细胞抑制作用的蛋白表达差异,寻找并鉴定差异蛋白质,探讨多肽抑制肝癌细胞的作用机理,本文通过双向电泳、考马斯亮蓝染色、Melanie 4双向软件分析、质谱技术(MALDI-TOF-MS)和数据库检索分析多肽作用SMMC-7721后的差异蛋白质.利用差异蛋白质组方法分析了抗癌多肽对肝癌细胞SMMC-7721抑制后的蛋白变化,找到差异点并进行了质谱鉴定(MALDI-TOF-MS).结果表明,通过对差异蛋白功能的分析,推测抗癌多肽可能引起了肝癌细胞的凋亡,为进一步的抗癌多肽抑制肝癌细胞作用的研究提供了理论基础.     

Proteomic analysis of long-term salinity stress-responsive proteins in Thellungiella halophila leaves

Salinity is one of the most severe environmental factors that may impair crop productivity. A proteomic study based on two-dimensional gel electrophoresis is performed in order to analyze the long-term salinity stress response of Thellungiella halophila, an Arabidopsis-related halophyte. Four-week-old seedlings are exposed to long-term salinity treatment. The total crude proteins are extracted from leaf blades, separated by 2-DE, stained with Coomassie Brilliant Blue, and differentially displayed spots are identified by MALDI-TOF MS or QTOF MS/MS. Among 900 protein spots reproducibly detected on each gel, 30 spots exhibit significant change and some of them are identified. The identified proteins include not only some previously characterized stress-responsive proteins such as TIR-NBS-LRR class disease resistance protein, ferritin-1, and pathogenesis-related protein 5, but also some proteins related to energy pathway, metabolism, RNA processing and protein degradation, as well as proteins with unknown functions. The possible functions of these proteins in salinity tolerance of T. halophila are discussed and it is suggested that the long-term salinity tolerance of T. halophila is achieved, at least partly, by enhancing defense system, adjusting energy and metabolic pathway and maintaining RNA structure.     

子宫内膜异位症小鼠差异蛋白组学研究

利用所构建的BALB/c小鼠子宫内膜异位症(EMs)模型,通过对正常和EMs小鼠在位子宫内膜样品双向电泳图谱的比较,找到61个差异较明显的蛋白质斑点,结合质谱分析技术和数据库信息检索最终鉴定出23个蛋白,包括11个调控蛋白、4个信号转导相关蛋白、1个代谢相关蛋白、5个膜联蛋白、1个细胞骨架蛋白和1个RNA解旋酶.将蛋白质组学技术应用于EMs的研究,可以从分子水平探索EMs的发病机理,对EMs的诊断及治疗具有重要意义.本研究结果为进一步探索EMs发病机理提供实验基础,同时也为寻找该病早期诊断的标志物和治疗的靶点提供理论依据.     

蛋白质组学研究与应用

蛋白质组学是继基因组学之后20世纪末兴起的前沿学科热点．阐述了蛋白质组的概念、蛋白质组学研究的内容与特点和研究意义；综述了蛋白质纽学研究中蛋白质组样品的制备方法、所运用的蛋白质组分离技术、鉴定技术等研究技术手段及其特点，以及蛋白质组学在基础生物学、基础医学、疾病诊断与治疗、新药研究开发中的应用现状与前景；介绍了国内、外蛋白质组学研究领域的最新进展．     

Proteomic analysis of long-term salinity stress-responsive proteins in <Emphasis Type="Italic">Thellungiella halophila</Emphasis> leaves

Salinity is one of the most severe environmental factors that may impair crop productivity. A proteomic study based on two-dimensional gel electrophoresis is performed in order to analyze the long-term salinity stress response of Thellungiella halophila, an Arabidopsis-related halophyte. Four-week-old seedlings are exposed to long-term salinity treatment. The total crude proteins are extracted from leaf blades, separated by 2-DE, stained with Coomassie Brilliant Blue, and differentially displayed spots are identified by MALDI-TOF MS or QTOF MS/MS. Among 900 protein spots reproducibly detected on each gel, 30 spots exhibit significant change and some of them are identified. The identified proteins include not only some previously characterized stress-responsive proteins such as TIR-NBS-LRR class disease resistance protein, ferritin-1, and pathogenesis-related protein 5, but also some proteins related to energy pathway, metabolism, RNA processing and protein degradation, as well as proteins with unknown functions. The possible functions of these proteins in salinity tolerance of T. halophila are discussed and it is suggested that the long-term salinity tolerance of T. halophila is achieved, at least partly, by enhancing defense system, adjusting energy and metabolic pathway and maintaining RNA structure.     

基于双向电泳-MALDI质谱分析的蛋白组学本科教学实验

蛋白质组学已成为研究生物学过程及直接描述细胞和组织变化的有力手段。双向电泳结合生物质谱技术是蛋白质组学研究中的最常用的蛋白质分离和鉴定技术之一。该项技术是生物技术专业本科生必须掌握的一门实验技术。通过双向电泳-MALDI质谱分析的蛋白组学本科教学实验的设计,建立了完善的本科教学实验方案,让大型仪器全面支撑本科教学实验,进一步提高了大型仪器的利用率。     

小菜蛾成虫蛋白质组双向电泳图谱的建立及条件优化

通过选择合适的pH范围及长度的胶条,并对蛋白样品上样量、等电聚焦伏小时数、银染时间及样品前处理等进行优化,建立了以双向电泳技术为基础的小菜蛾成虫蛋白质组学研究方法.优化结果表明使用17 cm、pH3～pH10的非线性胶条可以得到分辨率较高的胶图.该方法的建立为小菜蛾抗药性差异蛋白质组学研究奠定了基础.     

蛋白质组分离方法及其进展

介绍了新兴的蛋白质组学领域中较为常用的分离方法二维凝胶电泳、高效液相色谱和毛细管电泳及电色谱的基本原理．对其应用、改进和发展做了一些讨论．     

低温胁迫下克恩氏冬青幼苗叶片差异蛋白质分析

【目的】研究克恩氏冬青叶片应答低温胁迫的蛋白表达情况,探讨克恩氏冬青耐寒的作用机理。【方法】以2年生幼苗为试材,对其进行-8 ℃和-16 ℃低温胁迫处理,运用双向电泳技术(2-DE)结合质谱技术(MALDI-TOF/TOF MS)检测并分析叶片差异表达蛋白,并对差异蛋白进行了生物信息学分析。【结果】在低温胁迫下,克恩氏冬青幼苗叶片中蛋白表达发生了明显变化,胁迫前后发现共有31个显著差异的蛋白质点,经质谱检测及数据库检索,成功鉴定了其中23个差异表达蛋白点。对其中的20个蛋白成功进行了功能分类,主要涉及蛋白质和氨基酸代谢、光合作用、氧化还原平衡、防御作用、碳水化合物代谢、脂类代谢、氮素代谢等生物学过程。【结论】克恩氏冬青应答低温胁迫是多种蛋白质共同作用的结果,主要通过调节多种代谢过程中的相关蛋白表达来发挥作用。     

拟南芥全细胞蛋白质样品制备及其双向电泳条件的优化

对双向电泳方法进行了改进, 包括对样品的制备、 双向电泳参数的选择等关键步骤进行优化. 实验发现, 采用乙酸铵 甲醇沉淀拟南芥全细胞蛋白质, 同时结合高伏时、 长时间的等电聚焦可以获得高分辨率、 重复性好的蛋白质双向电泳图谱. 银染后, 经Phoretix 2D v2004软件分析可分辨出1 000以上蛋白点.