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应用阻抑性RACE方法克隆得到白鲫鱼的两个MT全长CDNA(MT-A和MT-B),它们可读框间的同源性为92.3%.用封闭式充氮层析系统得到高纯度的两个白鲫鱼肝MT蛋白,并用Edman法测定了N-端氨基酸序列.据此证明了MT-B是表达MT-2蛋白的基因,MT-A是表达MT-1蛋白的基因.此外测序过程中发现MT-1的N-端被封闭,而MT-2则是非封闭的,这提示它们在转录及翻译后调控机制的不同.白鲫鱼MT两基因的核酸序列和尾部非翻译区长度的差异(MT-A约150 hp, MT-B约360 bp),以及两 MT蛋白亚型的N-端封闭情况的不同,都为解释它们在组织中分布及其功能的差异性提供了线索. 相似文献
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转基因马铃薯中病原诱导GO基因的表达及其对晚疫病的抗性 总被引:14,自引:0,他引:14
利用PCR技术从黑曲霉(Aspergillus niger)中扩增并克隆了葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,简称GO)基因,并将马铃薯病原诱导型启动子(Prp1-1基因启动子)与其融合构建了植物表达载体pCAMGO。经农杆菌介导转化获得了转基因植株,Southern杂交显示葡萄糖氧化酶基因整合进马铃薯基因组。该基因的表达及所引起的H2O2的生成由淀粉-KI的显色反应得到证实。用马铃薯晚 相似文献
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将小鼠Cacng2基因的编码区与EST数据库进行同源性分析,得到一个与小鼠Cacng2基因在 435 bp中有 75%同源的 EST(GenBank: W29095).在该 EST中设计引物与 cDNA文库载体臂上引物行巢式 PCR和 RACE反应,在人脑前叶皮质 cDNA文库和人脑 Ready cDNA中获得 cDNA序列 1545 bp,其中包含一个 948 bp的可读框,编码 315个氨基酸.该可读框经确证命名为 CACNG3.CACNG3基因与大规模测序中定位于16p12-p13.1的BAC克隆AC004125完全一致,从而将该基因定位于16p12-p13.1,并由此获得它的基因组结构,编码区由4个外显子组成.经RT-PCR分析,CACNG3在成人脑和胎脑有表达.运用PCR-SSCP在视网膜色素变性家系、视网膜色素变性伴耳聋和癫痫家系进行突变检测,未检测到突变. 相似文献
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运用凝胶电泳阻抑法揭示了在活跃表达人ε-珠蛋白基因的K562细胞内存在一个红细胞专一的核基质蛋白(简称ε-NMPk),它能专一与正调控元件ε-PRE-ⅡDNA(-44 ̄419bp)相结合,Southwestern blotting分析表明,-ε-NMPk是由2个分子量约为40ku的亚基所组成,还发现在K562,HEL和Raji细胞中都至少存在着1个核基质蛋白,它们能ε-珠蛋白基因5′旁侧DNA序列 相似文献
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拟南芥profilin2启动子5′端缺失对维管束特异表达的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
用 PCR法扩增并克隆了 profilin2全长启动子(1667 bp),经 5’端不同长度缺失,与 gus(uidA)基因连接,构建植物表达载体,转化伽蓝菜,证实在转基因植株中全长启动子Pfn1.7呈维管束特异表达.5’端缺失分析显示,可将该启动子分为 3个区段:区段 1,-1667—1380 bp,缺失该区段后 gus基因由维管束特异表达变为组成型表达,推测在该区段中存在维管束特异表达元件;区段 2,-1153~-597 bp,强烈抑制 gus基因的表达;区段 3,-597~-1bp,可认为是profilin2的基本启动子. 相似文献
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运用凝胶电泳阻抑法揭示了在活跃表达人ε-珠蛋白基因的K562细胞内存在一个红细胞专一的核基质蛋白(简称ε-NMPk),它能专一地与正调控元件ε-PHEⅡ DNA(-446~-419bp)相结合,Southwestern blotting分析表明,ε-NMPk是由 2个分子量约为40ku的亚基所组成.还发现在 K562,HEL和 Raji细胞中都至少存在着1个核基质蛋白,它们能与ε-珠蛋白基因 5’旁侧 DNA序列内的沉默子 DNA(silencer,-392~-177bp)相结合,它们的结合区带(band K与bandH/R)位置并不完全相同,推测在HEL和Raji细胞内可能共同存在着一个与沉默子DNA专一结合的核基质蛋白.实验结果表明,核基质蛋白可能积极参与了人ε-珠蛋白基因时空表达的调控. 相似文献
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高等真核细胞受极低频磁场作用后特异反应基因的克隆及鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
极低频磁场(ELF MF)生物学效应的机理研究是当前生物电磁学中迫切需要解决的问题.为探索 ELF MF的特异反应基因及这些基因的结构与功能,用 mRNA差异显示技术(differentialdisplay, DD)对受ELF MF辐照与假辐照的Daudi细胞内的mRNA进行了检测,筛选到一个受ELF MF诱导表达的DD片段(>1kb),反向Northern及Northern鉴定进一步证实系磁场诱导所致.经克隆测序及与GeneBank同源性比较表明该基因片段(MF-CA)是人细胞中新发现的受磁场诱导的反应基因。 相似文献
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CD3ε胞浆区2个酪氨酸共同介导T淋巴细胞凋亡 总被引:4,自引:1,他引:3
CD3ε是T细胞抗原受体复合物(TCR/CD3)的一个成员,在此复合物的组装和介导细胞激活信号的传递中起重要作用,其信号传递的功能与其胞内区称之为免疫受体酪氨酸依赖的激活基序(ITAM)有关,已有报道人CD8分子的膜外区-跨膜区的CD3ε分子的胞内区组成的融合分子(CD8-ε)能介导T淋巴细胞激活后凋亡,表明单独的CD3 ITAM可传递细胞凋亡信号。进一步以CD8-ε为模板和点突变PCR技术制备了 相似文献