胰岛素样生长因子及其受体在绵羊早期胚胎的表达

旨在研究IGFs及其受体（IGFR）在绵羊卵母细胞和早期胚胎中的表达．对绵羊进行超数排卵处理,手术法采卵得到卵母细胞和着床前早期胚胎,结合荧光免疫染色方法和激光共聚焦成像系统,研究了绵羊未成熟卵母细胞、成熟卵母细胞和着床前各期胚胎中IGF—Ⅰ、IGF-Ⅱ、IGF—ⅠR、IGF—ⅡR的表达情况．结果表明,IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ在未成熟卵母细胞和成熟卵母细胞中均有表达;受精后,直到囊胚的整个早期发育阶段也检测到了这两个因子的表达,且胚胎免疫染色在各卵裂球之间呈现不均匀的分布．IGF—ⅠR和IGF—ⅡR在未成熟卵母细胞、成熟卵母细胞和早期胚胎均有表达,在胚胎期主要分布于卵裂球细胞的顶端（apical surface）,而在囊胚阶段主要在滋胚层细胞中表达,内细胞团没有表达．     

浅谈细胞核移植的两种技术

本文着重概述了细胞核移植的两种技术。国内外科学家对细胞核移植的研究情况，说明了细胞核移植技术在生物学中的重要地位和在医学方面的作用及其经济价值．     

ω-3转基因克隆绵羊诞生

我们构建了含有bfat-1表达载体pIE-bF1,通过脂质体介导转染获得转基因细胞系,再以核移植技术获得转基因克隆胚胎。胚胎移植后,于2010年10月27日出生两只克隆羊。经检测均为转ω-3基因克隆绵羊。     

久效磷对小鼠早期胚胎体外发育的影响

采用小鼠早期胚胎的体外培养技术,研究了久效磷对小鼠着床前胚胎发育的影响。结果表明,剂量低于0.22mmol/L对小鼠早期胚胎无明显作用,剂量为0.34mmol/L时,70.6％的8细胞胚胎能发育至囊胚,剂量达0.45mmol/L,对小鼠早期胚胎有显著的毒害作用,只有5.7％可以发育至囊胚。在经久效磷处理的小鼠早期胚胎电镜照片上可以看到,细胞内网架结构保持完好,线粒体被破坏,数量变少,空泡变大、增多,细胞内不同结构对久效磷的敏感性有一定差异。     

体细胞核移植技术和诱导多功能干细胞技术的研究比较

本文主要对体细胞核移植技术和诱导多功能干细胞技术的具体操作过程、两种技术当前面临的问题以及他们的应用前景进行了简要说明.     

ZNF382多克隆抗体的制备及其在蛋白质水平的表达研究

在筛选心脏发育相关新基因的研究时,本人克隆出了在人类心脏组织特异表达的基因-ZNF382,ZNF382在mRNA水平上的表达情况已经报道,为了阐明该基因在蛋白质水平的表达情况,本研究用质粒DNA注射小鼠法,生产制备得到抗ZNF382蛋白的多克隆抗体,胚胎原位抗体染色结果初步显示ZNF382蛋白主要在心脏和骨骼肌表达,其蛋白质表达水平与mRNA的表达水平基本一致,进一步表明该基因很可能参与心脏的形成或对心脏功能的发挥起重要作用.     

绵羊体外成熟,体外受精卵的体外发育及移植后的产羔

体外成熟、体外受精后的绵羊卵在体外长期培养或在2～4细胞期和桑堪～囊胚期移植给受体母羊,观察了培养卵的发育和移植后的受胎率。方法是将采自屠宰场的绵羊卵巢在1～12小时内带回实验室,抽取卵母细胞。从中选取卵丘细胞层完整的卵子,在二氧化碳培养箱内,用含有10％NSS(或FCS)、hCG和E_2,并以Hepes缓冲的M199培养24～26小时。再用以IonophoreA23187诱导获能处理过的新鲜公羊精于进行体外受精.7～10小时后移入发育培养基,即含有10％FCS(或NSS)和丙酮酸钠的Hepes缓冲的M199内继续培养,受精后将部分发育为2～4细胞胚和桑堪～囊胚期胚手术移植给受体母羊。另一部分卵子则在受精后48～72小时的不同时间内统计其卵裂卵的出现率,并继续培养7～12天详细观察卵裂卵的发育情况。在受精后48～72小时卵裂卵的出现率,FCS和NSS组分别为39.6％145/366)和52.4％(182/347),前者显著低于后者;将61枚2～4细胞期胚和桑椹～囊胚期胚分别移植给20只受体母羊,有10只受胎。共产羔11只,受胎率为50％;在发育培养液内继续培养的482枚卵裂卵中有312枚(64.7％)发育为桑椹～囊胚期胚(其中包括部分孵化囊胚)。     

肉苁蓉水提液对猪早期体外发育胚胎中NO浓度含量的影响

目的探讨肉苁蓉水提液对猪早期体外发育胚胎中一氧化氮浓度的影响,以研究肉苁蓉促进猪胚胎发育的药理作用。方法将采集的猪卵母细胞随机分为试验组和对照组,试验组在胚胎培养时在基础液中加入50μg/mL肉苁蓉水提液。将培养至囊胚阶段的胚胎取出,用Griess试剂法测定囊胚细胞中NO含量。结果细胞中NO含量显著低于对照组(P<0.05)。结论肉苁蓉水提液减少了胚胎细胞中NO含量,这可能是其促进细胞体外发育的作用机理之一。     

基因组印迹的调控机制及其对动物克隆的影响

基因组印迹是一种表观遗传学调控方式．依据亲源性的不同机体仅表达来自亲本一方的等位基因,而来自另一方的等位基因不表达,这类基因称为印迹基因．印迹基因成簇存在,受该簇内的印迹控制区（imprintingcontrolregion,ICR）调控．基于ICRs的功能,研究者提出两种模式解释基因组印迹的机制：绝缘体印迹模式和非编码RNA印迹模式．印迹基因的正确表达对哺乳动物的正常发育极为重要,错误的印迹会引起严重的遗传性疾病和癌症．克隆动物发育异常也可能与之相关．结合本研究组最近的研究,文中综述了基因组印迹的调控机制及其对动物克隆的影响．     

基因组印迹的调控机制及其对动物克隆的影响

基因组印迹是一种表观遗传学调控方式.依据亲源性的不同机体仅表达来自亲本一方的等位基因,而来自另一方的等位基因不表达,这类基因称为印迹基因,印迹基因成簇存在,受该簇内的印迹控制区(imprinting Ccontrol region,ICR)调控.基于ICRS的功能,研究者提出两种模式解释基因组印迹的机制:绝缘体印迹模式和非编码RNA印迹模式,印迹基因的正确表达对哺乳动物的正常发育极为重要,错误的印迹会引起严重的遗传性疾病和癌症.克隆动物发育异常也可能与之相关.结合本研究组最近的研究,文中综述了基因组印迹的调控机制及其对动物克隆的影响.     

致绵羊脑炎型粪肠球菌tuf和esp基因的克隆及序列分析

根据GenBank公开序列分别自行设计粪肠球菌保守基因tuf及表面蛋白基因esp二对引物,采用RT-PCR扩增出致绵羊脑炎型肠球菌tuf及esp基因,并将其克隆于pMD18-T Vector,对PCR产物进行测序及分析。该tuf序列及esp序列在GenBank上注册（注册登录号分别为EU239535,EU239534）。应用DNAStar软件对扩增esp基因与GenBank上已发表的粪肠球菌esp基因序列比较,同源性都达99．0％以上。     

绵羊MHC区段BAC克隆探针的制备

为了摸索适用于高通量核酸杂交筛选的探针的制备方法,采用GeneQuest软件分析并选取限制性内切酶BseDⅠ酶切MHC区段BAC克隆374N21,对酶切产物32P末端标记,并采用Omega E.Z.N.A DNA Probe Purifi-cation Kit纯化后放射自显影检测的方法。结果显示:酶切结果与软件分析一致,纯化后探针分布为0.5～2.0kb,纯化回收效率为60%。探针的分布合理,质量较高,可满足高通量杂交筛选的需要。     

绵羊ISG15基因的克隆表达与纯化

为了克隆并表达绵羊ISG15,且对其表达产物进行纯化,首先从绵羊外周血单核细胞(PBMC)中提取总RNA,通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR),扩增出ISG15的基因;再通过基因克隆技术,构建ISG15在pET28a中的重组表达质粒pET28a-ISG15,在大肠杆菌BL21(DE3)用IPTG进行诱导表达,得到ISG15的原核表达蛋白;最后采用Ni 2+-NTA亲和层析方法纯化目的蛋白。结果显示:克隆的绵羊ISG15基因序列长度为541bp,编码157个氨基酸。重组表达产物通过SDS-PAGE可检测到相对分子质量为25ku的重组蛋白,且表达的目的蛋白能被Ni 2+-NTA亲和层析方法所纯化。该研究为后续深入研究绵羊ISG15奠定基础。     

新疆绵羊β-乳球蛋白(BLG)5′端调控区的克隆与序列测定

用聚合酶链式反应(PCR)技术,从新疆绵羊全血中扩增了β-乳球蛋白5′端调控区890bp的片段.通过T4 DNA连接酶将其连接于质粒载体pGEM-T上,转化至受体菌DH5α中.提取质粒经PCR扩增、酶切鉴定,证明重组质粒pT-BLG中含有β-乳球蛋白5′端调控区基因片段.经核苷酸序列测定,克隆的片段与发表的基因序列高度一致.     

《数学规划》课程教学中可引入的若干数据挖掘问题

数据挖掘技术用于在海量数据中发现有用的知识，它涉及许多领域，其中数学规划方法成为数据挖掘领域的重要工具．对《数学规划》课程教学中可以引入的分类、特征选择、聚类和回归等数据挖掘基本问题进行了讨论．     

关于高校在经济活动中涉及法律问题的思考

社会主义市场经济是法制经济，即以各种法律、法规和制度界定市场经济行为主体的活动范围，各种利益主体都必须在各自的范围内遵循市场规律、依法进行活动。随着教育体制改革的不断深入，高等学校已逐步融入市场经济活动中，法律法规在给高校经济活动提供各种便利和保障的同时，对高校依法理财、规范管理、正确履行法律义务也提出了更高的要求，高校需要在各种经济活动中严格遵守相关的法律规律，实现高校规范发展的目的。     

计算机模拟系统中若干问题的研究

本文结合“传真机开发计算机模拟系统”课题研究的体会，就虚实屏交换、多进程控制、中西文自动切换等问题进行了探讨     

Analysis of the Internal and External Factors Involved in Second Language Acquisition

Materialist dialectics holds that internal causes are the basis of change and the external causes are the condition of change, and that external causes become operative through internal causes. This law can be applied into SLA. The internal causes and external causes influence SLA greatly. This paper mainly discusses the factors involved in SLA process.     

对硝基酚磷酸酶pNPPase的基因克隆和序列分析

对硝基酚磷酸酶（p-nitrophenylphosphatase pNPPase)是一种对硝基酚磷酸盐（p-intophenylphosphate)为底物的酶，被广泛地应用于核酸标记，通过菌落原位显色法成功地从脂肪芽孢杆菌（Bacillus stearothermophilus)中克隆到了编码耐热pNPPase的基因，序列分析表明它是一个编码255个氨基酸的酶。     

蓖麻PsbO基因的克隆与序列分析

用实验室栽培的蓖麻新鲜叶片为材料,Trizol法提取总RNA,参照GenBank公布的植物PsbO氨基酸序列,进行序列比对找出氨基酸序列保守区设计简并引物,通过RT-PCR扩增目的片段,纯化后克隆到T-Vector中测序,获得蓖麻的PsbO基因,对其基因序列进行分析。了解到其长度为1081bp,5＇非编码区为10bp,3＇非编码区为273bp,编码区长798bp,编码266个氨基酸。序列分析结果表明,蓖麻PsbO基因编码的氨基酸序列与已公布的其他植物中克隆到的PsbO氨基酸序列有较高的同源性。