蛋白质“酶解度”概念的探究

分析了蛋白质水解度参数在监测蛋白质酶解过程中的不足,并根据蛋白质酶解过程特点提出了酶解度的概念与测定方法。将酶解度定义为一个比值,用于描述蛋白质酶解体系中新增肽链数相对于原有肽链数的变化,可以有效反映酶对蛋白质的酶切过程。根据酶解度的定义,只要分别测定出酶解前的体系中肽链数目与酶解后体系中的肽链增量,通过计算两者的比值就可以计算出该条件下的酶解度。体系中的肽链数目可以通过甲醛滴定法测定出体系中的游离氨基数与新增自由氨基数来计算。     

一种测定大豆蛋白质水解度的简易方法

介绍了一种新的测定大豆蛋白质水解度的方法,G-25色谱层析法。该方法利用快速蛋白纯化系统将大豆蛋白水解多肽溶液进行G-25色谱层析,根据蛋白峰和肽峰面积计算蛋白质的水解度,并与甲醛滴定法进行了比较。结果表明,G-25色谱层析法测定的大豆蛋白水解度略低于甲醛滴定法。该方法快速、简便,可以普遍适用于各种蛋白质水解度的测定。     

胰酶水解黑麦草叶蛋白条件的研究

用胰酶水解黑麦草叶蛋白,甲醛滴定法测定蛋白质含量,单因素及正交实验优化水解工艺条件,高效液相色谱分析最优条件下得到的水解物中各组分的相对分子质量排布及大小。结果表明胰酶对黑麦草叶蛋白水解的最佳工艺条件为:(E/S)0.06μg/mL,温度38℃,pH8,水解时间为7 h。水解液中有8个组分,其相对分子质量分布在29~9 493.     

电位滴定法测定青霉素G酰胺酶的酶活力

采用电位滴定法测定青毒素G酰胺酶的酶活力．     

不同来源氨基移换酶等电点的预测

借助一个经过改进的可预测蛋白质及多肽等电点(pI)的数学模型,并辅以相应的计算机程序求解,我们已对多种蛋白质及酶的pI进行了计算或预测,计算结果和文献报道的pI实验测定值比较吻合。 氨基移换酶,又称转氨酶是一类催化转氨基反应的酶。本文以动物组织中天冬氨酸氨基移换酶(aspanate aminotransferasc)为重点,通过理论计算给出了12种天冬氨酸氨基移换酶及其他4种转氨酶的pI预测值,旨在为有关这些转氮酶的结构与功能研究及其分离、纯化工作提供有益的参考。     

梅花鹿过氧化氢酶基因的克隆与表达

克隆得到梅花鹿过氧化氢酶基因序列,已提交Genbank登录(HQ877674).基因编码区全长1 584 bp,编码527个氨基酸,理论计算分子量为60 027.4 Da,理论计算等电点为6.67,预测蛋白质结构中不含有二硫键,在蛋白质序列中,具有过氧化氢酶家族活性中心保守序列和过氧化氢酶家族亚铁血红素保守序列,其DNA序列和蛋白质序列均与Bos taurus来源过氧化氢酶的同源关系最为接近.使用pPICZαC质粒和毕赤酵母GS115菌株,成功异源表达该基因,对诱导表达的发酵上清液进行活性测定,酶活为463 U·mL-1.     

黄南州软儿梨中蛋白质含量的测定

以青海软儿梨为原料,建立软儿梨中蛋白质的快速测定方法—甲醛值滴定法,测定软儿梨中蛋白质的含量.结果表明,软儿梨果肉中总蛋白质的含量为0.151g/100g,软儿梨果汁中总蛋白质的含量为1.63g/100g,其方法精密度较高.本方法准确、简便、快速,并有效地解决了非蛋白质类的含氮物质对软儿梨中蛋白质测定结果的干扰问题,适用于软儿梨果肉和果汁中蛋白质含量的快速定量检验.     

曲霉型糖化酶等电点的理论计算

该文介绍了一种根据蛋白质的氨基酸组成,应用计算机数据处理技术从理论上计算蛋白质、酶及多肽的等电点的新方法。和传统的生物化学研究方法相比,该法不仅简单、方便,而且结果可信度较高,除对已知其pI的蛋白质或酶的实测值印证外,还可预测蛋白质或酶的等电点。这在蛋白质化学、酶学等研究领域具有一定应用价值。文中计算了8种曲霉型糖化酶的pI,计算结果和文献报道基本吻合。     

日本开发出高精度甲醛探测器

日本产业技术综合研究所东北中心和船井电机新应用技术研究所的研究小组最近研制出一种酶探测器，这种探测器利用一种只与甲醛反应的酶，可短时间、高精度地测定甲醛。研究人员将只与甲醛反应的酶封闭到二氧化硅上直径仅为8nm的吸管状空间内，并在盛放有这种二氧化硅的容器中注入需要检测的空气或水。如果从连接二氧化硅的电极接收到酶反应的电信号，就证明检测对象中存在甲醛。     

甲醛与NaOH对污泥EPS中蛋白质和多糖测定的影响

甲醛-NaOH法广泛应用于污泥胞外多聚物(extracellular polymeric substance,EPS)的提取,但提取过程中残留的化学物质会干扰后续胞外多聚物组分的测定,通过改变甲醛用量和NaOH浓度研究了其对EPS中蛋白质和多糖测定的影响。结果表明:提高甲醛投加量和NaOH浓度,会降低蛋白质测定标线的线性、斜率及数据的精密度。但当甲醛投加量为12~20μL,NaOH浓度为1 mol/L时,蛋白质标线的斜率和线性与不加甲醛和NaOH时相差不大,测试数据有较好的精密度。甲醛投加量与NaOH浓度对多糖测定几乎没有影响,因而在EPS提取之后不需要透析去除残留的甲醛,可直接进行测定。     

微波辅助酶解-超高效液相色谱串联质谱联用法快速检测尿液中的1-羟基芘

 利用微波辅助酶解结合超高效液相色谱串联质谱联用法,建立了人体尿液中1-羟基芘的快速检测方法.通过对比酶解与碱解、恒温水浴酶解与微波辅助酶解、液液萃取与固相萃取等前处理方法对1-羟基芘检测的影响,最终采用微波辅助酶解、固相萃取作为样品检测的前处理方法.考察了基质效应,对比了纯溶剂与空白尿液配标准溶液2种不同的标准溶液配制方法,最终选用空白尿液来配制.方法的标准曲线方程为y=1.24107x-0.130042,相关系数为0.9972,样品回收率在88.6%～97.1%之间,相对标准偏差在2.7%～12.6%之间,日内精密度为6.1%,日间精密度为6.2%,方法检测限为0.08ng/mL,定量限为0.28ng/mL.     

微波辅助酶解-超高效液相色谱串联质谱联用法快速检测尿液中的1-羟基芘

利用微波辅助酶解结合超高效液相色谱串联质谱联用法,建立了人体尿液中1-羟基芘的快速检测方法.通过对比酶解与碱解、恒温水浴酶解与微波辅助酶解、液液萃取与固相萃取等前处理方法对1-羟基芘检测的影响,最终采用微波辅助酶解、固相萃取作为样品检测的前处理方法.考察了基质效应,对比了纯溶剂与空白尿液配标准溶液2种不同的标准溶液配制方法,最终选用空白尿液来配制.方法的标准曲线方程为y=1.241 07x-0.130 042,相关系数为0.997 2,样品回收率在88.6%～97.1%之间,相对标准偏差在2.7%～12.6%之间,日内精密度为6.1%,日间精密度为6.2%,方法检测限为0.08 ng/mL,定量限为0.28 ng/mL.     

膨化饲料中粗脂肪含量测定方法的研究

目的探讨膨化饲料中粗脂肪含量最适的测定方法。方法采用酸水解法和索氏抽提法分别测定膨化猴料、膨化犬料、颗粒鼠料和颗粒兔料的加工前粉料及其成品料中粗脂肪的含量。结果酸水解法测定的膨化猴料粗脂肪含量极显著高于索氏抽提法的测定结果(P<0.001),膨化犬料粗脂肪含量的测定值酸水解法显著高于索氏抽提法(P<0.05)。而对于膨化前的犬混合粉料和猴混合粉料,两种方法的脂肪含量测定结果均差异不显著(P>0.05)。索氏抽提法和酸水解法测定颗粒料加工前粉料及加工后成品料中粗脂肪含量值均差异不显著(P>0.05)。酸水解法测定的饲料加工前后粗脂肪损失率均低于索氏抽提法的测定值。结论酸水解法能更准确的测定膨化饲料中粗脂肪的含量。     

金属Ce离子(Ⅲ)-Tris体系催化磷酸二酯水解研究

利用紫外-可见分光光度法研究金属离子Ce(Ⅲ)-Tris(三羟甲基氨基甲烷)体系催化双(对硝基苯酚)磷酸酯(BNPP)的动力学,探索不同催化反应条件对催化效率和体系稳定性的影响和催化作用机理.结果表明,在金属离子Ce(Ⅲ)与Tris具有适当的配比,反应体系在适当的酸度和温度条件下,催化体系对双(对硝基苯酚)磷酸酯(BNPP)的水解有显著的催化作用,并且催化体系稳定,具有重现性,其催化活性基是由金属离子Ce(Ⅲ)和Tris形成的配合物.     

蒺藜多糖铁的制备及铁含量测定

目的：制备蒺藜多糖铁并确立铁含量的测定方法．方法：在一定的pH值和温度下合成蒺藜多糖铁,观察其稳定性,同时采用滴定分析法（常量和微型间接碘量法）测定铁含量,并以相对标准差判别测定方法的可靠性和稳定性,同时比较这两种滴定分析法的优越性．结果：合成的蒺藜多糖铁具有良好的水溶性和稳定性,以常量和微型间接碘量法测定3次产品的铁含量分别为29．2％、29．7％、28．6％和28．5％、29．0％、28．9％．其RSD分别为0．02％和0．01％．结论：滴定分析法是测定蒺藜多糖铁中铁含量的稳定且可靠的方法．但从节省试剂或经济效益方面考虑采用微型滴定．     

复酶水解鹅血工艺条件的优化

研究了中性蛋白酶和木瓜蛋白酶对鹅血液的水解作用,并分析了酶用量、温度、时间、pH值等因素对鹅血酶水解的影响。结果表明,双酶水解效果较好,确定了其最适宜的酶解条件：中性蛋白酶,酶底物浓度比（E／S）为4000U／g,pH值为7．0,温度为55℃,时间为5h;木瓜蛋白酶,酶底物浓度比（E／S）为6000U／g,pH值为7．5,温度为50℃,时间为4h。     

曙红Y在牛血清白蛋白表面上的Langmuir吸附反应研究

应用微相吸附-光谱修正技术研究了曙红Y(EY)与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用,并讨论了反应时间、离子强度、温度,以及金属离子干扰等因素对该作用产生的影响.结果表明,EY与BSA间的作用符合Langmuir单分子层吸附,结合产物最大结合数NEY∶NBSA=5∶1;计算了不同温度下(30,45和60℃)反应的结合常数K,发现K随温度的升高而减小;并测定了蛋白质的工作曲线,该方法的检出限为20 mg/L.     

高钛冷固球团矿中全铁和TiO_2联合测定方法的研究

目的确定高钛冷固球团矿(以下简称钛球)中全铁和TiO2联合测定的简便可靠方法。方法采用无水Na2CO3和H3BO3(2+1)混合熔剂一次熔解样品,提取定容后分别移取一定量的试液。全铁采用K2Cr2O7溶液滴定法测定,TiO2采用二安替比林甲烷分光光度法测定。结果通过多种方式对比实验,27组测定结果显示,全铁测定结果绝对误差在-0.30%~0.18%之间,相对偏差在-0.59%~0.35%之间;TiO2测定结果绝对误差在-0.26%~0.40%之间,相对偏差在-2.03%~3.14%之间,表明实验结果准确可靠,完全可以代替传统分析方法;并给出了TiO2含量与吸光度(A)之间的线性关系式:A=1 307.35mTiO2-5.86或者mTiO2=7.649 1×10-4 A+0.004 5,此方程式的线性相关系数R2=0.999 9。结论本法通过一次熔样,可实现全铁和TiO2的联合测定,不仅节省大约2/3单位样品的分析时间,提高了工作效率,而且节约了大量试剂的使用量,降低了分析成本,过程分析准确可靠,可控性强,能够满足企业生产之需要。     

偶氮氯膦-Ⅲ分光光度法测定蛋白质

基于酸性介质中OP 100存在条件下蛋白质与偶氮氯膦 Ⅲ（CPA-Ⅲ）可迅速反应生成复合物(CPA-Ⅲ) BSA, 并产生特征吸收峰的特征, 结合分光光度法精确检测蛋白质的质量浓度. 结果表明: （CPA-Ⅲ） BSA最大吸收波长为674 nm; 蛋白质质量浓度在0~300 μg/mL内与吸光度差值（Δ A）呈良好的线性关系, 其线性回归方程为Δ A=0.003 1ρ+0.003 9 （ρ： μg/mL), 相关系数r=0.996 4; 检出限为1.55 μg/mL. 利用该方法测定人血清和鸡蛋清样品中蛋白质的质量浓度, 相对标准偏差为2.43%~4.35%, 加标回收率为97.97%~103.07%.