一株凝结芽孢杆菌的筛选及鉴定

<正>凝结芽孢杆菌是一种美国FDA批准用于食品的益生菌,可定殖于肠道中并产生乳酸,同时由于其可产生芽孢,不良环境耐受性好,菌体在通过肠前消化道时可保持较高的存活率,是一种有重要价值的益生菌。但目前我国尚未批准用于食品中,相关研究较少。本文从土壤中筛选得到一株芽孢杆菌,经16s r DNA和生理生化鉴定,确定其为凝结芽孢杆菌,命名为Bacillus coagulans HXP-1。     

一株嗜酸氧化亚铁硫杆菌的鉴定及浸矿性能

从西藏甲玛某多金属矿的酸性矿坑水中分离获得一株浸矿细菌(命名为XZ).该菌为革兰氏阴性菌,短杆状,菌体长约1~1.5μm,直径约0.5μm,两端钝圆,能够氧化Fe~(2+)和单质硫,最适生长pH为2.0,最适生长温度为30℃,经过对其生长特性进行研究及16S rRNA基因测序鉴定其为一株嗜酸氧化亚铁硫杆菌.利用XZ菌对西藏某低品位铜矿角岩矿进行了摇瓶浸出试验研究,结果表明,在接种量体积分数为10%,矿浆质量分数为10%,矿石粒度为-45μm占100%,培养温度30℃,振荡强度160 r/min的浸出条件下,经过15 d,Cu~(2+)的浸出率达72.15%.     

一株抗烟草赤星病解淀粉芽孢杆菌的筛选及鉴定

从土壤中分离出82株细菌,通过平板对峙法初筛和双层平板法复筛,筛选出对烟草赤星病菌有较强拮抗作用的细菌B11菌株,其无菌发酵液对烟草赤星病菌(Alternaria alternata)的抑菌带达到26.55mm.对B11菌株进行生理生化和分子鉴定,结果表明B11菌株生理生化特征与Bacillus amyloliquefaciens最为接近;16SrRNA基因序列分析结果表明该菌株与B.amyloliquefaciens(NR-116022)聚类呈一支,同源性为99%,因此把该菌株鉴定为解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens).进一步研究表明B11菌株对几种植物病原真菌的生长均有抑制作用.     

对一株青霉的筛选、诱变及形态鉴定

从大自然中分离到的菌种因为生境不同,其生理特性等并不为人类生产所实用,所以要对其进行诱变、筛选以得到合适的工程菌种,该类微生物已在我们的生产、生活中占据了重要的地位。     

一株解磷细菌菌株的筛选、鉴定

根据不同地区的生态环境,采用广泛性筛选,用解离目标矿物复筛方法,寻找开发出性能优异的具有良好应用前景的解磷细菌。采用该方法,从贵州铜仁万山钾矿产区分离培育出一株解磷菌株,命名为TK.1。通过细菌生理生化测试,形态学观察,16S r DNA同源性分析,NCBI数据库对比分析研究,该菌属于节杆菌属。TK.1菌株与商业菌巨大芽孢杆菌解离煤矸石的对比研究表明:TK.1菌株解磷指标及效果优于巨大芽孢杆菌,是一株性能优异的解磷细菌。新型解磷细菌的开发,使煤矸石有可能成为生产微生物矿物肥料的原料,解决煤矸石污染问题,对环境保护和可持续性发展具有重要意义。     

一株产NAD+依赖型甘油脱氢酶嗜热杆菌的筛选

将采集于清源山、华大后山果园、华大南浦果园、实验室附近等多处的高温堆肥样品在60℃、pH7.0条件下进行富集培养,其中南浦果园堆肥样品菌体长势较好,菌株呈暗绿色;逐步提高培养基中甘油浓度(0.5g/L~3g/L),进行菌株产甘油脱氢酶(GDH)的驯化培养与复筛,经8个批次的复筛,获得一株产GDH酶活达0.201U/mL的棕色菌株,编号TB8-5;经镜检分析同时结合菌落生长特性并经生理生化实验反应鉴定,初步判断筛选出的菌株属嗜热芽孢杆菌属;菌株发酵液中产物组分鉴定为二羟基丙酮(DHA),含量为0.597mg/mL,相应的GDH酶活也最高,其最适反应温度为50℃,最适反应条件pH为8.0,Zn2 对酶活有一定的促进作用.     

一株抗黄芪根腐病芽孢杆菌的筛选、鉴定及抑菌物质的初步研究

从河西走廊敦煌盐碱土中分离筛选出有效拮抗黄芪根腐病病原菌尖孢镰刀菌的细菌,以期能为黄芪根腐病的生物防治提供菌种资源.采用平板对峙法和琼脂扩散法筛选拮抗菌,通过其形态特征、生理生化特征和16S rRNA基因序列进行分类学鉴定;对其产抑菌物质的发酵条件进行优化,探讨其抑菌谱与稳定性;用有机溶剂进行抑菌物质的初步提取和抑菌效...     

一株产细菌素物质芽孢杆菌的筛选和鉴定

从石油污染的土壤中筛选出一株能产生细菌素类物质的芽孢杆菌,命名为SLY—3。该菌株分泌的活性物质抑菌活性好,对细菌主要是革兰氏阳性菌、霉菌都有抑制作用。从表型、生理生化反应及16S rDNA序列比对方面进行分析,最终确定菌株SLY—3为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。培养基初始pH为7.0,28℃振荡培养24 h后,发酵产物抑菌活性最高。     

嗜酸性氧化亚铁硫杆菌对单质硫的生物氧化作用研究

为了进一步完善嗜酸性氧化亚铁硫杆菌（简称A. f菌）的硫氧化途径,实验研究了A. f菌对单质硫的氧化行为,分析了L-半胱氨酸对单质硫生物氧化的影响,通过接触角测定、Zeta电位测定与硫的K边X-射线近边结构光谱分析(XANES)等方法研究了A. f菌作用前后单质硫表面性质的变化. 结果表明： A. f菌以单质硫为能源时,其生长延滞期约为100h,培养240h达到最大细菌浓度（约为6.0×10⁸个/mL）;A. f菌作用后,单质硫由疏水性变为亲水性,等电点由2.5增大到3.0,在硫样品表面发现了链状硫与含巯基的有机物质的存在;在培养基中添加0.5g·L^-1的L-半胱氨酸能够促进单质硫的生物氧化,XANES结果表明生物作用后的硫样品表面链状硫与巯基物相对含量均有所提高,分别从39.2%和15.4%增大到48.5%和27.7%.     

一株高温酸性淀粉酶产生菌的分离、筛选、鉴定及其酶学性质研究

淀粉酶作为水解淀粉和糖原的酶类,在生物的新陈代谢和工业化生产中起着广泛而重要的作用,尤其是高温淀粉酶在利用过程中备受关注.从云南大理市弥渡县石夹泉热泉的43℃底泥中分离并筛选到1株高温淀粉酶的高产菌,进行显微形态及生理生化特征、16S rRNA基因序列分析,将其初步鉴定为芽孢杆菌属(Bacillus sp.)的一株菌,命名为Bacillus sp. Amy-43.对其生长条件及酶学性质进行了研究,结果表明:该菌株耐高温性较好,菌株在55℃仍能生长,菌株最适生长温度为37℃.所产淀粉酶最适酶活温度为75℃,最适反应p H值为4.0.在37℃以下,能保持良好的稳定性,Zn2+和Mn2+对该酶有一定的抑制作用,而Ca2+、K+、Mg2+、Fe2+、Cu2+均对该酶活力起到促进作用,其中Cu2+的促进效果最为明显.这些特性预示着Bacillus sp.Amy-43来源的淀粉酶为工业运用提供了重要的酶源.     

糖胺聚糖类物质产生菌的筛选及其鉴定

利用糖胺聚糖能与氯代十六烷基吡啶反应产生白色混浊的性质,从不同来源的菌种中,筛得4株菌种,再通过琼脂糖凝胶电泳,筛选得到一株糖胺聚糖产生菌GS36．根据形态及生理生化试验鉴定,初步判定为坚实芽孢杆菌．其发酵产物经纯化后通过红外光谱测定初步鉴定为硫酸软骨素．     

抗克伦特罗噬菌体单链抗体库的构建、筛选及鉴定

利用噬菌体展示技术构建克伦特罗(CBL)单链抗体(scFv)库,从中筛选CBL特异性噬菌体scFv,从而成功扩增出抗CBL的VL,VH基因片段并采用重叠延伸PCR拼接为全长的scFv基因片段,抗体库库容约为1.6×104,经4轮吸附—洗脱—扩增的富集,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法筛选到6个具有CBL结合活性的噬菌体scFv,为进一步大量表达CBL单链抗体奠定了基础.     

一株降解小麦秸秆丝状真菌的筛选、鉴定及初步研究

利用涂布平板法从腐烂秸秆及枯枝烂叶中分离出71株丝状真菌.通过比较菌株秸秆粉降解产物对小麦生长的促进作用,获得一株可有效降解秸秆并促进小麦生长的菌株2-5-2.对其进行形态分析和rRNA序列鉴定,结果显示,该菌株为木霉属真菌.该菌株可产生纤维素酶、木质素酶、半纤维素酶、几丁质酶、蛋白酶、壳聚糖酶.平板对峙培养显示,该菌对多种病原真菌的生长有抑制或阻碍作用.固态发酵培养时,纤维素酶、半纤维素酶酶活在第11d达到最高;第28d,纤维素降解率达到21.13%,半纤维素降解率达到28.53%.     

产脂肪酶菌株的筛选、鉴定与产酶条件优化

以橄榄油为唯一碳源,采用平板变色圈法,从土壤中筛选到1株脂肪酶高产菌XYU-6,经生理生化试验鉴定及16S rDNA序列分析,XYU-6被鉴定为洋葱假单胞菌(Burkholderia cepacia).设计单因素试验,对其产酶条件进行优化,优化后的培养条件为:葡萄糖1.00;,蛋白胨2.00;,豆油1.00;,KH2 PO40.35;,K2 HPO4 0.15;,MgSO40.05;,初始pH值为7.0,培养温度30℃,培养48 h,酶活可达24.1U·mL-1,是优化前的1.65倍.     

一株降胆固醇作用乳酸菌KF5的分离与鉴定

利用邻苯二甲醛法,从源于西藏Kefir粒的56株乳酸菌和实验室保存的9株乳酸菌中,筛选得到了一株降胆固醇效果明显的乳酸菌KF5.经生理生化实验及分子遗传学鉴定,该菌株为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum).为了能够进一步研究KF5的降胆固醇功能,对其进行了生物学特性的考察.结果表明,KF5具有较好的耐酸性以及一定的胆盐耐受力.     

一株高产丁二酮菌株的筛选与鉴定

以湖南省湘西地区土家腊肉中分离的41株细菌为出发菌,采用平板显色法和邻苯二胺比色法筛选高产丁二酮的微生物菌种.通过菌落形态观察、生理生化特征测定和基于16S rRNA基因序列分析,对分离菌株进行鉴定.结果表明,7株细菌能产生较高含量的丁二酮,其中菌株BCL-8产丁二酮量最高,在葡萄糖蛋白胨水培养基中发酵20 h,丁二酮质量浓度达68.9 mg/L,该菌经鉴定为地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）.菌株BCL-8是一株优良的产丁二酮的微生物种质资源.     

一株橙色黏球菌的筛选及初步鉴定

从土样中通过菌体诱导和纤维素诱导法来富集和选择性分离黏细菌,将初筛菌株进行抗菌谱测定,挑选抑菌活性强的一株(编号为hg59)进行系统分类鉴定.结果表明:该菌株革兰氏染色阴性,营养细胞呈杆状,两头稍尖,大小(5～8)μm×(0.3～0.6)μm,黏孢子为卵圆形或椭圆形,菌落生长初期为淡黄色,渐变成橙黄色,薄而向边缘扩展,有滑动痕迹,对G+,G-菌均具有抑菌活性,其中对枯草芽孢杆菌和醋酸杆菌抑菌效果明显,对米曲霉则较差.经形态观察、生理生化测定和16SrDNA序列分析,初步鉴定为橙色黏球菌(Myxococcus fulvus strain).     

耐有机溶剂脂肪酶产生菌的筛选和鉴定

从国内各地采取土样分离筛选产耐有机溶剂脂肪酶的新菌株,通过形态和生理生化特征以及系统进化树分析,筛选到的新菌株命名为Pseudomonas aeruginosa CS-2.来自Pseudomonas aeruginosa CS-2的粗脂肪酶液在乙腈中酶活提高,在苯、氯仿、正己烷、石油醚和异辛烷中表现出较高的稳定性.