漆酶对共基质体系下吲哚的去除研究

网络参与是一种体制外民主参与的新形式,完善了公众参与的手段和渠道。但是,由于存在着非理性、道德缺失等诸多问题和局限性,对民主政治发展产生了一定的消极影响。为了使网络参与走上规范性和有效性辩证互动的发展轨道,伦理的引导和规约必不可少,应对网络参与进行认同与反思前提下的伦理省思,使其在道德规范与制度引导下保持理性限度,并在自由与自律的张力中对网民进行道德约束。     

苯酚羟化酶生物转化吲哚及甲基吲哚研究

利用苯酚羟化酶基因工程菌PH_IND对吲哚及甲基吲哚进行生物转化.结果表明,除了3-甲基吲哚外,PH_IND能将吲哚、2-甲基吲哚、4-甲基吲哚和7-甲基吲哚转化成靛蓝类色素.采用薄层色谱和液相-质谱等手段对转化产物进行鉴定,结果表明,PH_IND转化吲哚和4-甲基吲哚得到的蓝色产物分别为靛蓝和4,4′-二甲基靛蓝,并推测了PH_IND转化吲哚及4-甲基吲哚的反应途径.采用表面响应法对PH_IND转化吲哚、2-甲基吲哚及4-甲基吲哚的条件进行了优化,在最优条件下,菌株PH_IND转化吲哚合成靛蓝的最大产量为93.74mg/L,其吲哚的转化效率为52.63%,且菌株PH_IND对2-甲基吲哚和4-甲基吲哚的最大转化率分别为67.66%和95.61%.     

漆树漆酶的催化氧化作用：Ⅵ.漆酶的催化氧化反应机理研究

在静止条件下，用分光光度法研究了底物２，３－二氟基－５，６二卤氢醌的漆酶催化氧应，考察了底物离解与反应的关系，考察了半醌自由基的形成和衰减动力学，测定了不同ｐＨ条件下的表现反应速度常数、米氏常数、半醌自由基的形成速度常数和半醌自由基的衰减速度常数，探讨了环境对半醌自由基形成与衰减的影响，鉴定了反应最终产物的结构，结果证明：１）、底物的一级离解种是底物参与反应的必要形式；２）、半醌自由基阴离子是酶反     

吲哚乙酸氧化酶和过氧化物酶关系的同工酶研究

用细胞质雄性不育系小麦和普通小麦中国麦与鄂恩１号为材料，用Ｄａｖｉｓ和Ｒｅｉｓｆｅｌｄ不连续聚丙烯酰胺垂直析以凝胶电泳技术进行吲哚乙酸氧化酶和阴、阳离子过氧化物酶同工酶分析，并用ＳＣ９１０型双波段薄层扫描仪进行扫描，记录其谱带数及强弱，结果表明阳离子过氧化物酶同工酶谱与ＩＡＡ－氧化酶同工酶谱十分相似，而阴离子过氧化物酶酶谱相差甚远，由此表明具有吲哚乙酸氧化酶活性位点的过氧化物酶，应主要是阳离子过氧     

漆树漆酶的催化氧化作用：Ⅺ原儿茶酸酯类的漆 …

用分光光度法对原儿茶酸甲酯，正丁酯，正辛酯底物在不同ｐＨ条件下的离解和漆酶催化氧化反应进行了考察，测定了它们在ＰＨ＝８．０时的反应速度常数。结果表明，不为漆酶所喜爱的亲水性底物，经过适当疏水化处理，可以有效地改善其反应性和提高漆酶的催化活性。     

产漆酶真菌的筛选、培养及对苯酚的降解

提出了一种新的从土壤中筛选产漆酶真菌的方法．将51个土壤样品分别分散于无菌水中,接种至含有底物A的固体培养基上,培养3d后,当菌落周围的培养基变成褐色时表明该菌株可能产生漆酶．将筛选出的若干菌株与市购的几种真菌分别接种于LB液体培养基中培养7d后,测定培养液中漆酶的活性,表明从土壤样品中筛选得到的真菌L1产酶活性最高．研究了各种培养条件对真菌L1产漆酶能力的影响,并且对该漆酶的性质及其对苯酚的降解进行了研究．结果表明,从产漆酶真菌中筛选出的自选菌(L1),在苯酚作为诱导剂、30℃下PYGM培养基中培养7d,产酶活性最高．该漆酶的最适pH为8．0,最适温度为33℃,Cl^-对其活性抑制较大．该漆酶对浓度为(50-250mg／L)的苯酚有较好的催化降解效果,在24h内最大降解率可达60％以上．     

Triton X-100对漆酶处理苯酚的影响

研究了Triton X-100对漆酶氧化去除水溶液中苯酚的作用.苯酚和漆酶浓度分别是50 mg/L和 0.05 mg/mL时,提高苯酚去除率的Triton X-100最佳浓度是155 μM．Triton X-100的浓度从31~930 μM时漆酶活性随之增长,在930 μM Triton X-100存在时有最大增值17%.苯酚的初始浓度分别为50, 100, 200, 400和600 mg/L 时,155 μM Triton X-100作用下6 h后,苯酚去除率分别是对照组的1.2, 1.6, 3.4, 4.5和5.7倍.结果表明Triton X-100可以作为水处理或修复过程的添加剂来提高由漆酶催化的苯酚去除率.     

废水中铁离子对漆酶催化降解2,4-二氯苯酚的影响

探讨了水中铁离子对固定化漆酶和自由漆酶催化去除水中2,4-二氯苯酚反应的影响。结果表明,Fe²⁺和Fe³⁺离子对于自由漆酶催化去除2,4-二氯苯酚的反应均表现出一定程度的抑制作用,但对固定化漆酶降解2,4-二氯苯酚的影响要小,表明经过固定化之后,由于受到固定化载体的保护作用,酶的稳定性明显增加。     

漆树漆酶的催化氧化作用：Ⅷ.四卤代氢醌的漆酶催化氧化

在静止条件下，对四卤代氢醌（ＴＸＱＨ２，Ｘ＝Ｃｌ，Ｂｒ，Ｉ）的漆酶催化氧化行为进行了考察结果证明，四卤代氢醌的酶反应具有几个明显特征：１）一级离解种是底物参与反应的必要形式；２）半醌自由基阴离子是反应的产物；３）半醌自由基经歧化转变成相应的醌；４）整个反应过程呈现出连串反应属性，这些特征反映了漆酶催化氧化反应的共性，结果还表明，由于卤原子的吸电子作用不强，不能使自由电子有效地离域，生成的半醌自由基     

吲哚乙酸氧化酶和过氧化物酶同工酶的分离及其对底物的特性

用CM-纤维素柱从花椰菜的游离型过氧化物酶提取液中分离得到6个酶峰,分别出现于不同洗脱浓度的NaCl洗脱液中,它们都具有过氧化物酶和吲哚乙酸氧化酶活性。从结合型过氧化物酶提取液中分离得到5个酶峰,其中被115mmol.l~(-1)NaCl洗脱的为一高活性吲哚乙酸氧化酶峰,它的过氧化物酶活性很低。其余的酶峰都具有两种酶的活性。用不同的底物测定同工酶的活性,得到很不相同的结果。不同的同工酶的最适pH因底物不同而异,愈创木酚为pH5.0～6.0,咖啡酸为pH4.5～5.0,阿魏酸为pH8.5～9.0,但各同工酶之间没有明显差异。     

吲哚乙酸氧化酶和过氧化物酶同工酶的分离及其对底物的特性

用CM-纤维素柱从花椰菜的游离型过氧化物酶提取液中分离得到6个酶峰,分别出现于不同洗脱浓度的NaCl洗脱液中,它们都具有过氧化物酶和吲哚乙酸氧化酶活性。从结合型过氧化物酶提取液中分离得到5个酶峰,其中被115mmol.l~(-1)NaCl洗脱的为一高活性吲哚乙酸氧化酶峰,它的过氧化物酶活性很低。其余的酶峰都具有两种酶的活性。用不同的底物测定同工酶的活性,得到很不相同的结果。不同的同工酶的最适pH因底物不同而异,愈创木酚为pH5.0～6.0,咖啡酸为pH4.5～5.0,阿魏酸为pH8.5～9.0,但各同工酶之间没有明显差异。     

漆酶的分子生物学研究及其应用

白腐菌所分泌的木质素降解酶主要有3种：木质素过氧化物酶、锰依赖过氧化物酶和漆酶．漆酶是近年来研究较多的一种含铜的多酚氧化酶，在白腐菌中普遍存在，也存在于少数低等真菌和植物中．漆酶多为酸性蛋白，含4个铜离子，形成3个活性区域；表面一些氨基酸被不同程度地糖基化．漆酶可催化的底物迭250种，铜离子结合区域在其催化氧化过程中起决定性作用．运用PCR技术cDNA文库技术，越来越多的漆酶基因被克隆，目前已克隆到的漆酶基因有大约20个．许多来源地基因都是以家族地形式存在于染色体上的．已研究的漆酶基因中都含有10个左右的内含子，这些内含子在活性域位置上有比较高的保守性．一些特珠序列存在与否决定了该酶的表达形式-诱导型或组合型．目前已有部分漆酶基因的异源表达获得成功．本文还介绍了漆酶在环境保护、造纸工业、食品工业等方面的应用．对近年来漆酶的研究进展进行了综述．     

漆树漆酶的催化氧化作用Ⅺ原儿茶酸酯类的漆酶酶催氧化

用分光光度法对原儿茶酸甲酯、正丁酯、正辛酯底物在不同ｐＨ条件下的离解和漆酶催化氧化反应进行了考察，测定了它们在ｐＨ＝８．０时的反应速度常数．结果表明，不为漆酶所喜爱的亲水性底物（原儿茶酸），经过适当疏水化处理，可以有效地改善其反应性和提高漆酶的催化活性．ＥＳＲ结果证明，这些底物的漆酶催化反应都经历了半醌自由基阴离子阶段；酯基的存在不能保证底物顺利地氧化成相应邻醌，用二苯乙二胺只能捕获到少量羟基化的邻醌     

吲哚乙酸结合辣根过氧化物酶对K562细胞增殖的影响

应用MTT实验、细胞计数法检测吲哚乙酸结合辣根过氧化物酶,流式细胞仪(FCM)和DNA末端标记法(TUNEL)检测IAA/HRP对细胞增殖周期和细胞凋亡的作用,研究了吲哚乙酸(indole-3-acetic acid IAA)结合辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase HRP)对K562细胞增殖的影响.结果表明,与对照组相比,IAA和HRP单独处理组对K562细胞的生长具有部分抑制作用,但无显著性差异;而IAA与HRP结合后对K562细胞的抑制作用明显增强.流式细胞仪检测结果表明,K562细胞阻滞于G2/M期.IAA/HRP具有明显的诱导K562细胞凋亡的作用,且诱导凋亡的作用与IAA浓度呈正相关(r=0.971,P<0.01).IAA/HRP能明显抑制K562细胞生长,将细胞周期阻滞于G2/M期,诱导细胞凋亡.     

漆树漆酶催化氧化对苯二胺反应的微量热法研究

在厌氧条件下，０．１ｍｏｌ／Ｌ的磷酸盐缓冲溶液中，用微量热法测定了２９８．１５Ｋ的漆树漆酶与对苯二胺反应的摩尔反应焓ΔｒＨｍ＝－１６３．３６±０．３６ｋＪ／ｍｏｌ米氏常数Ｋｍ＝５．５８×１０＾－３ｍｏｌ／Ｌ和表现一级反应速率常数ｋ１＝８．６３×１０＾－３ｓ＾－１及此条件下用对苯二胺作底物时的漆酶活性值ＥＡ＝０．０４５ＩＵ。     

漆酶/木聚糖酶体系去除废新闻纸脱墨浆中胶黏物的研究

废纸浆因含有大量的细小组分和阴离子杂质,极大地影响了纸机网部的滤水性能和成纸质量。笔者应用漆酶处理废新闻纸脱墨浆,研究其去除胶黏物的效果。结果表明：漆酶/木聚糖酶体系（LXS）处理废纸脱墨浆,能有效去除浆料中胶黏物,尤其是漆酶/木聚糖酶体系处理后碱抽提（LXS+E）去除效果更佳。在酶用量为15 μmol/(min·g)时,LXS和LXS+E处理后与原浆相比,浆中胶黏物分别降低了51.91 %和68.43 %,减轻了后续工序除胶黏物的负荷,改善了浆料滤水性。当漆酶用量为15 μmol/(min·g)时,LXS和LXS+E处理浆与原浆相比,打浆度分别降低了15.22 %和28.26 %。此外通过这两种方法处理还能提高浆料的强度,而浆料得率却稍有下降。     

一种改进的漆酶酶活检测方法

以 2 ,2′ -连氮 -双 (3-乙基苯并噻唑 - 6 -磺酸铵 ) (简称ABTS)为漆酶A、B的底物 ,采用UV - 2 2 0 1型紫外 -可见分光光度计连续记录酶反应在 2 5℃ ,4 2 0nm波长下的时间历程曲线 ,并求取最初部分的斜率以计算漆酶酶活的方法 .该方法直观、方便、准确且可靠 .在 2 5℃的 0 .0 4mol/LBritton Robinson缓冲溶液中 ,漆酶A、B的最适 pH值分别为 4 .0和 4 .5 .在 2 5℃最适 pH值的Britton Robinson缓冲液中 ,由双倒数作图法求得漆酶A、B的米氏常数Km 分别是 6 .6 4× 1 0 - 5mol/L和 2 .2 1× 1 0 - 5mol/L ,漆酶A、B的最大米氏反应速度Vmax分别是 1 4 2 5μmol.M (L·min)和 32 5μmol.M (L·min) .漆酶A、B的酶活分别为 2 2 99μmol·min- 1·L- 1和 1 1 4 8μmol·min- 1·L- 1.     

壳聚糖铜固定化漆酶研究

用壳聚糖与CuSO2.5H2O溶液络合成的壳聚糖铜为载体,固定化白毒鹅膏菌胞外漆酶,测定了铜盐浓度、络合时间、固定化时缓冲液的pH值、固定化时间、给酶量对固定化酶性质的影响。实验得出固定化最佳条件是在20℃、pH7.0的磷酸缓冲液中,固定2个小时,这种条件下酶活保持率为50.2%。固定化酶的最适pH值4.0比游离酶的4.6偏酸;固定化酶的最适温度24℃。     

多孔菌漆酶性质研究

研究了多孔菌漆酶的产酶曲线及酶作用最适条件;结果表明在该培养条件下,多孔菌第9天达产酶高峰,峰值酶活为412u/ml,酶作用的最适pH值为4.2,最适酶解温度为25℃,Mg2 、Mn2 对漆酶有激活作用,而Ag 、Fe3 和Cl-则能明显抑止漆酶活性.     

漆树漆酶的催化氧化作用：Ⅶ.稀土金属离子对漆酶催化…

以５，６－二溴－２，３－二氰基氢醌为底物，在ｐＨ４．０－６．０条件下，用分光光度法考察了稀土金属离子对漆酶催化活性的抑制作用，探讨了抑制特征，抑制位点和作用方式。结果表明，稀土金属离子对漆酶催化活性的抑制属竞争性抑制过程。稀土金属离子的抑制作用是通过它 与漆酶活性中酸性氨基酸残基中的ω－羧基阴离子的配位相互作用实现的；在这种作用下，ω－羧基阴离子于对底物酸羟基的氢键或碱化催化作用补削弱，使酚羟基中