荧光定量PCR技术及其在动物病毒病定量检测中的应用

荧光定量PCR技术是一种核酸定量技术,该技术在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法.该技术具有特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等特点,因此在动物病毒病的检测中,荧光定量PCR技术不但能定量检测病原体感染的强弱和在机体内的分布,还具有灵敏、快速、省力的特点.     

实时荧光定量PCR技术研究进展及其应用

实时荧光定量PCR（Real Time Quantitative PCR）是把酶动力学、核酸扩增与杂交、光谱分析和实时检测技术巧妙结合的一项技术；并且广泛应用于病毒学、遗传性疾病、肿瘤和癌症的诊断等方面．因此成为分子生物学研究中的重要工具，本文就此技术研究进展及其应用做一综述．     

荧光定量PCR技术及其在预防兽医学研究中的应用

荧光定量PCR（fluorescencer quantitive polymerase chain reaction,FQ-PCR）技术是20世纪90年代中期发展起来的一种新型核酸定量技术。该技术具有实时监测、快速、灵敏、精确等特点,是对原有PCR技术的革新,扩大了PCR的应用范围。本文综述了FQ-PCR技术的基本原理及其在预防兽医学研究中的应用。     

荧光定量PCR检测HBV DNA及临床意义

目的:了解HBV感染者的常见血清学组合的HBV DNA阳性情况,探讨其临床意义。方法:对260份血清同时用荧光定量PCR与ELISA方法进行检测并进行评价。结果:40例HBsAg(+)/HBeAg(+)/抗-HBc(+)组血清HBV DNA全部阳性,阳性率为100％,含量为10~(7.62±0.69)cps/mL;110例HBsAg(+)/抗-HBe(+)/抗-HBc(+)组血清58例阳性,阳性率为52.7％,含量为10~(4.64±1.31)cps/mL;35例HBsAg(+)/抗-HBe(-)/抗-HBc(+)组血清20例阳性,阳性率为57.1％,含量为10~(4.93±1.42)cps/mL;75例HBsAg(-)组血清中,5例HBV DNA阳性,阳性率为6.7％,含量为10~(3.68±0.46)cps/mL。结论:乙型肝炎患者HBV荧光定量检测是病毒复制最直接可信的指标,动态荧光定量PCR检测HBV DNA,对动态监测乙型肝炎感染的病原学变化及判断有关药物抗-HBV复制是否有效具有一定的临床意义。     

鸽圆环病毒荧光定量PCR检测方法的建立及应用

目的 建立鸽圆环病毒(PiCV)TaqMan探针荧光定量PCR方法并对其进行初步应用。方法 通过比对NCBI发表的PiCV各分离株序列,选取其polymerase基因保守序列设计引物探针,建立PiCV的荧光定量PCR方法,对方法的特异性及敏感性进行验证;取浓度为3.48×10⁵和3.48×10⁴copies/μL的质粒标准品,每个浓度做6个平行,重复检测3次,计算组内和组间变异系数,验证方法的重复性和稳定性;用该方法检测采自北京某养殖场的鸽肝、脾、肺、法式囊样本各40份及鸽盲肠样本36份,以验证此方法在实际应用中的检测能力。结果 建立的PiCV荧光定量PCR方法在3.48×10⁷～3.48×10¹ copies/μL范围Ct值与质粒浓度呈线性关系,标准曲线Slope为-3.381,R²值为1,扩增效率为97.61%。可检测到的PiCV最低浓度为34.8 copies/μL,与常规PCR法相比,检测灵敏度高2个数量级;以猪圆环病毒2型、禽腺病毒I型及III型、禽白血病病毒、禽网状...     

实时荧光定量PCR技术在转基因食品检测中的应用研究进展

随着转基因食品的快速发展,转基因食品的大规模商业化引起了对安全性问题的广泛争议.为了对转基因食品作出综合的评价,建立灵敏、快速、准确、高通量的检测方法十分必要.本文综述了实时荧光定量PCR技术的基本原理、优缺点及其在转基因食品检测中的应用与研究进展,并探讨了该技术存在的问题和应用前景.     

实时荧光定量PCR的原理及应用研究进展

实时荧光定量PCR（real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR）是在定性PCR技术基础上发展起来的核酸定量技术,已成为分子生物学和其它领域的重要技术工具。本文对实时荧光定量PCR技术的原理及其在食品、医学、环保领域的应用进行综述。     

实验动物常见支原体荧光定量PCR检测方法建立

目的 建立能对实验动物常见支原体进行检测的荧光定量PCR方法。方法 针对多种大、小鼠易感支原体的16 s rRNA基因中较保守的区域设计1对引物和探针,建立荧光定量PCR方法并检测其特异性、灵敏性及重复性。结果 该方法在模板浓度为5×100～5×106 copies/μL之间呈良好的线性关系(R2=0.9972)且扩增效率为98.11%;特异性强,能够区分检测金黄色葡萄球菌等常见的病原菌;灵敏性高,检测下限为5 copies/μL,比常规PCR的检测灵敏性高100倍;重复性好,对不同浓度模板进行组内和组间重复性试验的变异系数均低于2%。用荧光定量PCR和普通PCR方法对不同来源不同类型的120份临床样品进行检测,结果表明小鼠支原体检测阳性率分别为3.33%(2/60)、1.67%(1/60),细胞样品支原体检测阳性率均为5%(3/60)。结论 本研究建立的荧光定量PCR方法快速、特异强、灵敏性高、重复性好,可用于实验动物常见支原体的快速诊断。     

仙台病毒荧光定量 PCR 检测方法的建立及初步应用

目的 建立敏感特异的仙台病毒( SeV)荧光定量 PCR 检测方法,并初步应用。 方法 将不同株 SeV 病毒序 列进行比对,选择对保守区域设计合成引物。 人工合成 SeV 基因组 12 181 ~ 12 480 DNA 序列,转入质粒中,作为仙 台病毒质粒标准品,建立 SYBR 染料法荧光定量 PCR 方法,并对样本进行 SeV 测定。 结果 建立了特异性的检测 SeV 的 SYBR 荧光定量 PCR 方法,该方法对 SeV 最低检测限度为 10 copies / μL。 将所建立的实时荧光定量 PCR 方 法用于 40 只 SPF 小鼠和 58 只裸鼹鼠的肺组织样本的检测,检测结果为仙台病毒核酸阴性;检测 4 只成年屏障环 境饲养黄鼠肺组织和 5 只清洁级小鼠肺组织,检测结果为仙台病毒核酸阳性率 100% 。 结论 该研究建立的 SYBR Green 染料法荧光定量 PCR 方法能特异敏感地检测仙台病毒。     

人GABRA1实时荧光定量TaqMan PCR检测方法的建立

根据GenBank上人GABRA1基因的序列,设计并合成特异性的引物及探针,采用TaqMan探针法建立了荧光定量PCR法,以常规PCR产物为标准品,建立标准曲线．结果表明,标准曲线Ct值检测范围为12．07-32．72,相关系数为0．999,扩增效率为96．4%.建立的GABRA1TaqMan探针实时荧光定量方法具有线性范围广、扩增效率高、检测时间短、敏感性高等特点．     

王瓜根蛋白的柱层析分离及其抗生育作用

应用Ambelie.IRC.50柱层析分离纯化王瓜根抗早孕蛋白,图谱显示抗早孕蛋白达到基线分离,用SDS.PAGE不连续电泳证实是电泳纯。应用本工艺生产的王瓜根抗早孕蛋白作小白鼠抗着床试验,其ED_(100)(100％抑制率)为1.5mg/kg,是结晶天花粉ED_(100)(10mg/kg)的6倍以上,提示这种蛋白有可能作妇女房事后避孕的新药。对应用王瓜抗早孕蛋白注射后的小白鼠子宫作组织学鉴定,由显微组织切片显示王瓜根抗早孕蛋白较天花粉蛋白作用强,子宫组织发生了变化。用王瓜根做抗早孕蛋白口服试验,也证实其效果好。这提示王瓜根蛋白可制成简便口服避孕片。     

Sonography: dizygotic twin survival in early pregnancy

It has been suggested that losses of twin conceptuses in very early pregnancy are high, and that for every liveborn twin pair there are a further 10-12 twin pregnancies that end up as a singleton birth. Here we show that in a group of women who had double-ovulated and conceived, the probability of the second egg also becoming fertilized and developing is 20-30% - which is comparable to the probability of conception and survival of a single conceptus. We conclude that the presence of one embryo does not affect the development of its twin.     

岩石SHPB劈裂分析理论研究

为了分析岩石在冲击载荷下的动态劈裂破坏情况,通过分析巴西圆盘在动态劈裂和静态劈裂时表面应力分布均匀化的相似性,可以将静态劈裂时的弹性理论应用到动态劈裂当中,得到巴西圆盘在动态劈裂下的动态抗拉强度、动态抗压强度、应变率和应变的计算公式.应用三维非线性动力学分析软件ANSYS/LS-DYNA,模拟巴西圆盘在分离式霍布金逊压杆实验装置上受冲击时动态劈裂的整个实验过程.基于动态抗拉强度公式和动态抗压强度公式,对试件的实际拉应力曲线与计算拉应力曲线进行对比,以及对实际压应力曲线与计算压应力曲线进行对比,通过对比曲线的相互吻合性证明数值模型适用于对岩石冲击劈裂破坏性质的研究.通过分析试样表面的应力均匀化过程以及试样表面对心压缩轴线上拉应力方向的应力分布情况,得出试样在对心压缩轴线表面上的破坏顺序是由从两个冲击端部向中心发展的;通过分析试样沿对心压缩轴线所切剖面上的拉应力分布,得出试样在厚度方向上的破坏顺序是由表面向内部发展的.     

瘢痕子宫切口妊娠的临床观察

目的探讨瘢痕子宫切口妊娠（CSP）的临床诊断和治疗。方法回顾性分析28例我院2007年6月。2009年6月确诊的CSP病例资料。结果28例CSP中,保守治疗成功20例（71．4％）,经手术治疗后痊愈8例。B超是临床早期诊断CSP首选方法,宫腔镜技术是诊治CSP有价值的方法。结论CSP可行保守治疗,必要时则应行手术治疗。     

现场总线控制系统在应用中存在问题的分析

现场总线控制系统（FCS）主要由新型智能传感器、现场总线以及相应管理软件组成。同传统的集散控制系统（DCS）相比,现场总线控制系统（FCS）具有更高的可靠性和精度。当前现场总线控制系统在国内的应用中尚存在着包括价格、冗余及维护等方面的问题。但是这一系统正在不断飞速发展中。     

数字化校园建设中数据分析的研究

在数字化校园建设中将既有业务系统的数据整合形成数据中心,并在此基础上进行数据分析,形成决策支撑系统,为相关管理部门提供服务．数据分析中ETL（数据抽取、转换与加载）是非常关键的技术．本文就ETL的分析和设计进行了一些基本的研究和探讨．