大肠杆菌O157:H7基因组研究进展

对大肠杆菌O157：H7基因组的结构、特点等近年来的研究进展进行了综述。     

大肠杆菌O157∶H7胶体金免疫层析快速检测法的建立

建立一种大肠杆菌O157∶H7的胶体金免疫层析快速筛查方法.利用胶体金免疫层析技术,采用双抗体夹心法检测大肠杆菌O157∶H7,对该法进行敏感性、特异性和食品样品的适用性分析.该法能在10 min内完成检测;该试纸条仅与O157∶H7阳性样品发生特异性反应;大肠杆菌O157∶H7的最低检出浓度为1×105 cfu/mL.新建立的大肠杆菌O157∶H7胶体金免疫层析试验简便、快速,特异性和灵敏度较好,适用于现场样品的快速筛查.     

冻融循环下大肠杆菌O157:H7在长春市南湖岸边水中的存活行为研究

北方地区的初春、晚秋,水体表层的夜冻昼融过程是典型特征。冻融循环过程影响水体自身理化性质,理化性质的变化对水中微生物,尤其是潜在的致病微生物的存活也会产生一定的影响。实验在室内模拟了大肠杆菌O157:H7在冻融循环条件下,在长春南湖水中的动态存活特征;并通过线性模型和Weibull模型,计算大肠杆菌O157:H7在污染水体后衰减达到最低检测限的时间(ttd);并运用多元线性回归进行相关性分析,找出影响实验菌种存活的关键因素。研究表明,南湖水的p H和氨氮与大肠杆菌O157:H7的存活相关。研究结果可为调查大肠杆菌O157:H7在湖水中的存活趋势,评估其可能带来的环境健康风险,为制定相应的环境管控措施提供科学依据。     

肠出血性大肠杆菌O157:H7感染小鼠动物模型的初步建立

目的　建立肠出血性大肠杆菌O15 7:H7感染小鼠动物模型。方法　选用离乳小鼠随机分组 ,先以丝裂霉素和萘啶酮酸处理 ,提高小鼠对肠出血性大肠杆菌O15 7的敏感性 ,再分别以不同剂量口服接种肠出血性大肠杆菌O15 7:H7EDL933W ,进行临床和病理学检查。结果　利用对O15 7不易感的小鼠 ,复制出人类感染O15 7所出现的主要病理变化和部分临床症状 ,初步建立了动物模型。讨论　该动物模型对探索肠出血性大肠杆菌O15 7:H7的感染机制、毒力因子的作用有重要意义 ,并为O15 7:H7的疫苗侯选株安全性的评价打下初步基础。     

大肠杆菌O157：H7的活的非可培养状态

将大肠村菌O157：H7培养于低温养条件下,以涂布平板法（PC）和最大近似值法（MPN）检测可培养细菌数,95－115d后表明可培养菌数下降为零,吖啶橙荧光显微镜直接计数法（AODC）检测细胞总数,表明细菌总数始变化不大,而活菌直接镜检计数（DVC）检测到的活菌数保持在10^6个／ml,实验证明了大肠杆菌O157：H7在一定的条件下可进入活的非可培养状态（VBNC）。     

间接酶联免疫吸附技术检测活的非可培养状态的大肠杆菌O157：H7

大肠杆菌O157：H7在低温贫营养的条件下可进入的非可培养状态（Viable but nonculturable state,VBNC),用常规的培养法无法将其检出。作者利用间接酶联免疫吸附技术（Indirect Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测VBNC的大肠杆菌O157：H7,发现此方法可以快速有效地将其检出,最小检测浓度为10^5个／mL。     

畜禽产品沙门氏菌和大肠杆菌O157快速检测试剂盒:快速、敏感又特异

近日,由省微生物研究所和广东环凯微生物科技有限公司共同承担的广州市科技攻关项目———畜禽产品沙门氏菌和大肠杆菌O157快速检测试剂盒的研制与开发通过了由广州市科技局组织的验收。该项目建立的三种检测方法具有     

EHEC O157:H7紧密黏附素C300与LTB融合基因克隆与序列分析

目的构建肠出血性大肠埃希菌(EHEC)O157:H7紧密黏附素C-端免疫保护片段与肠黏膜佐剂大肠埃希菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)的融合基因克隆载体,为进一步研究EHEC O157:H7重组疫苗奠定了基础.方法设计引物采用PCR技术从EHEC O157:H7基因组中扩增Intimin C300的编码基因,从肠产毒性大肠埃希菌基因组中扩增LTB的编码基因,分别构建克隆载体pUC18-C300和pUC18-LTB,采用酶切位点相连技术,构建pUC19-C300-LTB克隆载体,并测序.结果从EHEC O157:H7基因组中扩增出了900 bp的目的片段,从肠产毒素大肠埃希菌基因组扩增出了275 bp的目的片段,分别插入载体pUC18和pUC19,经酶切及测序鉴定与目的序列一致.结论克隆出EHEC O157:H7的紧密黏附素C-端免疫保护片段与不耐热肠毒素B亚单位基因,并成功构建融合基因克隆载体,测序正确.     

The Escherichia coli O157:H7 DNA detection on a gold nanoparticle-enhanced piezoelectric biosensor

This paper presents development of a quartz crystal microbalance (QCM) biosensor for real-time de- tection of E. coli O157:H7 DNA based on nanogold particles amplification. Many inner Au nanoparticles were immobilized onto the thioled surface of the Au electrode, then more specific thiolated sin- gle-stranded DNA (ssDNA) probes could be fixed through Au-SH bonding. The hybridization was in- duced by exposing the ssDNA probe to the complementary target DNA of E. coli O157:H7 gene eaeA, then resulted in a mass change and corresponding frequency shifts ( △f ) of the QCM. The outer avidin-coated Au nanoparticles could combine with the target DNA to increase the mass. The electro- chemical techniques, cyclic voltammetry (CV) and electrochemical impedance spectroscopy (EIS) were adopted to manifest and character each step. The target DNA corresponding to 2.0×103 colony forming unit (CFU)/mL E. coli O157:H7 cells can be detected by this biosensor, so it is practical to develop a sensitive and effective QCM biosensor for pathogenic bacteria detection based on specific DNA analy- sis. The piezoelectric biosensing system has potential for further applications, such as food safety and environment monitoring, and this approach lays the groundwork for incorporating the method into an integrated system for in-field bacteria detection.