遗传工程小鼠冻存卵巢异体原位移植比较研究

目的 对 C57BL / 6 J 为背景的遗传工程小鼠卵巢冷冻及复苏后原位移植进行研究,建立遗传工程小鼠卵巢 冷冻方法,弥补小鼠资源保种体系。 方法 采用 DAP213 方法冷冻保存了 C57BL / 6 J 及 SCARB2、PSGL1、IGB3S 三 个遗传工程小鼠 10 日龄幼鼠的卵巢,将四个品系 10 日龄幼鼠的新鲜卵巢及冻存复苏卵巢原位移植到 4 周龄 C57BL / 6 J 及 C57BL / 6 J( Cg) —Tyrc- 2 J / J( B6 albino)受体雌鼠,术后饲养 5 周与 10 周龄性成熟 C57BL / 6 J 雄鼠交 配,观察移植出生幼仔。 结果 C57BL / 6 J 新鲜卵巢和冻存卵巢,三个品系遗传工程小鼠的冻存卵巢原位移植到 C57BL / 6 J 和 B6 albino 受体中,均可以恢复正常功能,交配后得到仔鼠。 结论 采用 DAP213 方法冻存 C57BL / 6 J 及以 C57BL / 6 J 为背景的遗传工程小鼠卵巢,复苏后原位移植到 C57BL / 6 J 和 B6 albino,交配后产仔,卵巢冻存方 式是小鼠资源库保存的一个重要补充。     

C_(57)BL/6遗传背景下无毛突变基因对胸腺及皮肤结构的影响

目的　探讨在C57BL/6背景下突变基因对胸腺及皮肤结构的影响。方法　观察脱毛规律 ,并用常规组织学方法对 19日龄正常C57BL/6小鼠及C57BL/6无毛小鼠的胸腺及皮肤结构进行了对比观察。结果　C57BL/6无毛小鼠 12日龄左右发生脱毛现象 ,2周左右时间除触须外全部脱净 ,并终生保持无毛状态 ;随年龄增长 ,头部、腹部和体侧形成特别的皱纹和褶痕 ,似犀牛状 ,指甲过度生长。皮肤有黑色素沉着 ,而且表面出现一些小的丘疹。组织学发现 19日龄C57BL/6无毛小鼠皮肤表皮有一层角化的角质层 ,毛干消失 ,毛囊腔宽大 ,在真皮深部可见毛球的残余部分 ,皮脂腺结构正常。 19日龄C57BL/6无毛小鼠胸腺的形态、结构与对照鼠无明显差异 ,但萎缩较早。结论　无毛突变基因影响C57BL/6小鼠的毛发周期和胸腺退化     

动脉粥样硬化模型小鼠血脂与血清胆红素关系的探讨

目的探讨动脉粥样硬化小鼠血脂与血清胆红素之间的关系。方法选取12月龄雄性动脉粥样硬化小鼠及同龄同性别正常对照C57BL/6J小鼠,分别测定血清甘油三酯、胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白B水平、血清总胆红素、直接胆红素。结果动脉粥样硬化小鼠胆固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、载脂蛋白B水平与同龄同性别的C57BL/6J小鼠相比极显著升高(P<0.01);动脉粥样硬化小鼠直接胆红素水平与C57BL/6J小鼠相比极显著降低(P<0.01)。结论动脉粥样硬化小鼠血脂与血清胆红素相关。     

C57BL/6J胚胎冷冻小鼠的遗传监测和分析研究

目的用生化标记和微卫星检测法观察近交系C57BL/6J小鼠胚胎冷冻后的遗传质量是否发生改变。方法采用国标(GB/T 14927.1-2008)生化标记基因检测法对4只玻璃化冷冻、解冻移植后获得的C57BL/6J F1代小鼠的13个生化位点进行预检测,再根据微卫星DNA多态性的遗传监测方法进行多态性分析。结果4只玻璃化冷冻后移植获得的C57BL/6 F1代小鼠的遗传概貌与国标(GB/T 14927.1-2008)中的14个生化位点完全一致;并与本文作者已建立"几种常用近交系小鼠微卫星DNA多态性的分析研究"的遗传监测结果完全相符。结论玻璃化冷冻法(EFS40,straw)对C57BL/6J冷冻胚胎小鼠的遗传物质并未造成影响,其遗传特性保持稳定,是可行的小鼠胚胎冷冻方法。     

鼠巨细胞病毒升高血压并引起血管平滑肌的增殖重塑

目的通过构建鼠巨细胞病毒(MCMV)腹腔感染小鼠模型,探讨鼠MCMV与血管平滑肌增殖重塑的关系。方法通过MCMV腹腔感染7月龄C57BL/6J小鼠模型,将C57BL/6J小鼠分为对照组与实验组(MCMV感染组),每组10只;在9月龄及12月龄时使用颈动脉测压比较两组血压变化情况,并分别留取胸主动脉组织切片进行HE、Masson染色,观察小鼠主动脉重塑及纤维化程度,利用image pro-plus软件计算主动脉胶原面积占全部面积比值,通过Western Blot检测血管重塑蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、骨桥蛋白(OPN)、细胞增殖核抗原(PCNA)的表达。结果 MCMV感染组小鼠血压升高,胸主动脉中膜增厚增加,胸主动脉胶原面积百分比增加,血管重塑蛋白由收缩表型向合成表型转化。结论 MCMV感染可引起小鼠血压升高,并导致胸主动脉重塑。     

小鼠白细胞减少症模型的建立

目的为小鼠白细胞减少症模型的建立提供基础资料。方法选用ICR小鼠和C57BL/6J小鼠以5Gy的剂量60Co-γ射线一次性全身照射小鼠,测定小鼠外周血白细胞总数。结果在本实验条件下,ICR小鼠的正常白细胞数量极显著低于C57BL/6J小鼠;雄性C57BL/6J在照射后第3 d白细胞数量显著高于其雌性小鼠。结论小鼠的品系、性别对60Co-γ射线照射建立的白细胞减少症模型具有一定的影响。     

三种麻醉药物对小鼠麻醉效果的比较

目的比较三种常用麻醉药阿佛丁、水合氯醛、乌拉坦的麻醉效果,探索最适合于C57BL/6J品系小鼠的麻醉方法。方法三种麻醉药物分别以剂量梯度对C57BL/6J小鼠进行腹腔注射,比较不同剂量下的麻醉起效时间、麻醉深度、麻醉维持时间及恢复时间。结果阿佛丁(1.2%)以0.60～0.65mL/20g剂量效果最好,水合氯醛(4%)以0.20mL/20g剂量效果较好,乌拉坦不适用于C57BL/6J小鼠的麻醉实验。结论腹腔注射阿佛丁(0.60mL/20g)和水合氯醛(0.20mL/20g)是适合于C57BL/6J品系小鼠全身麻醉的起效时间最短,维持时间和麻醉深度适度,死亡率为0,麻醉效果较佳的麻醉方法。     

表达人二肽基肽酶4(hDPP4)转基因小鼠的主要生物学特性指标测定

目的 分析表达人二肽基肽酶4(hDPP4)的转基因小鼠的生物学特性指标，为将其应用于中东呼吸综合征的相关研究提供基础数据。方法 本实验室构建了表达hDPP4的转基因小鼠C57BL/6J-TgN (UBC-hDPP4-GFP) CLARS,简称Tg^hDPP4。对不同性别(每组5只)的Tg^hDPP4小鼠的10项血液生化指标、18项血液生理指标、4～16周龄生长发育指标和8项脏器指数进行测定，并与不同性别(每组5只)的野生型C57BL/6J小鼠进行比较，用统计学方法进行分析。结果 与野生型C57BL/6J小鼠相比，Tg^hDPP4 F₃雄鼠的丙氨酸转氨酶和碱性磷酸酶均降低，血糖和血尿氨素均升高；与野生型C57BL/6J小鼠相比，Tg^hDPP4 F₃雌鼠的丙氨酸转氨酶和碱性磷酸酶均升高；Tg^hDPP4 F₃雄鼠的体质量自5周龄开始均高于野生型雄鼠。结论 hDPP4的转入对Tg^hDPP4小鼠的血糖、血尿...     

ApoE基因敲除小鼠和C57BL/6J小鼠血脂及主动脉组织病理学的对比观察

目的高脂饲养的雄性载脂蛋白E基因缺陷小鼠动脉粥样硬化模型的建立。方法选取8周龄雄性ApoE-/-小鼠,以C57BL/6J小鼠为对照组,高脂饲养8周后测定血清中总胆固醇、甘油三酯、高密度胆固醇脂蛋白、低密度胆固醇脂蛋白含量;小鼠心脏主动脉根部石蜡切片,常规HE染色,观察和测量动脉粥样硬化斑块的组织学特点及病变面积。结果ApoE-/-小鼠血清中总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇的含量显著高于同年龄同性别C57BL/6J小鼠,高密度脂蛋白的含量显著低于同龄同性别C57BL/6J小鼠;高脂饲养下16周龄ApoE-/-小鼠主动脉根部切面可见明显的脂质斑块。结论在该浓度的高脂饲料饲养条件下,ApoE-/-小鼠在16周龄已形成脂质斑块,是研究动脉粥样硬化等心血管疾病较佳的动物模型。     

IVC笼盒原位实施小鼠二氧化碳安乐死方法的建立

目的 建立一种在原饲养IVC笼盒中实施小鼠二氧化碳安乐死的方法。方法 将4～5周龄BALB/c小鼠、4～5周龄C57BL/6小鼠和2周龄C57BL/6小鼠各10只,按照5只/笼的标准饲养。以28%容器体积/min气体置换率,将二氧化碳通入小鼠饲养笼实施安乐死。结果 4～5周龄BALB/c小鼠和C57BL/6小鼠均在2～3 min之间失去意识,5～6 min之间死亡,与美国国立卫生研究院指南中要求的一致。2周龄C57BL/6小鼠死亡需要的时间长于4～5周龄C57BL/6小鼠,并有显著性差异。结论 成功建立了小鼠在原饲养IVC笼盒中实施二氧化碳安乐死的方法。该方法有效降低了小鼠应激反应,提高了动物福利;且有利于操作人员身心健康。     

三种小鼠血液生理生化正常值的测定

本文通过对三种小鼠－ＢＡＬＢ／ｃ、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ近交系小鼠和昆明远交群小鼠的血液学和血液生化指标进行测定。其结果：⑴血液学指标：ＢＡＬＢ／ｃ近交系小鼠的嗜中性白细胞、淋巴细胞雌雄间差异显著;Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ近交系小鼠、昆明小鼠雌雄间差异不显著;昆明小鼠的白细胞比ＢＡＬＢ／ｃ、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ近交系小鼠的低;ＢＡＬＢ／ｃ近交系小鼠的单核细胞、嗜酸性白细胞、嗜碱性白细胞记数比Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ近交系小     

雄黄对MRL／lpr小鼠脾细胞分泌干扰素-γ、白细胞介素-6的影响

目的：探讨雄黄（As4S4）对MRL／lpr狼疮鼠脾脏细胞分泌干扰素-γ（IFN-γ）、自细胞介素-6（IL-6）的影响。方法：将20周龄MRL／lpr狼疮小鼠和正常C57BL／6J小鼠无菌条件下取出脾脏,制成脾脏淋巴细胞悬液,体外经植物凝集素P（PHA-P,终浓度20mg／L）、白细胞介素-2（IL-2,终浓度10^6IU／L）常规刺激48h后,随机分组进行如下实验：（1）不同浓度As4S4溶液（6．5、12．5、25、50mg／L）作用24h;（2）As4S4对MRL／lpr小鼠和C57BL／6J小鼠作用：①PBS组：空白对照;②As4S4组：25mg／L;以上各组继续培养24h,酶联免疫吸附法（ELISA）测定各组培养液IFN-γ、IL-6表达量。结果：（1）MRL／fpr狼疮鼠PBS组IFN-γ的分泌高于C57BL／6J小鼠PBS组（P〈0．01）。（2）在MRL／加狼疮鼠中,与PBS组相比,As4S4组（25mg／L）IFN-γIL-6的分泌水平下降。（3）在C57BL／6J小鼠中,PBS组和As4S4组之间IFN-γ、IL-6浓度水平无明显差异。结论：As4S4下调MRL／lpr狼疮鼠IFN-γ、IL-6的分泌,而对C57BL／6J小鼠脾细胞IFN-γ、IL-6的分泌无明显影响。     

冷藏雄鼠尸体应用于小鼠运输及意外死亡后品系恢复的可行性

目的 基于小鼠尸体4 ℃冷藏不同时长后精子的体外受精(IVF)效率,探讨低温冷藏小鼠尸体应用于小鼠运输及意外死亡后品系恢复的可行性。方法 实验组为5月龄C57BL/6 J雄鼠,脱颈处死后4 ℃冷藏24、48、72 h和96 h,取附睾尾精子IVF,对照组为正常5月龄C57BL/6 J雄鼠IVF,统计各组IVF受精率。结果 冷藏24 h后附睾尾精子具备正常受精能力,受精率为73.0%、60.0%和77.0%;48 h 组内差异大,受精率为0%、55.4%和3.2%;72 h受精率极低,受精率为3.2%、0%和1.7%;96 h 精子有活力,但无受精能力。所有受精卵均可发育至2细胞,冷藏24 h组和对照组分别移植受体妊娠率分别为60%和66%,证明4 ℃冷藏对胚胎发育无影响。结论 C57BL/6J鼠经4 ℃冷藏的附睾尾,在24 h内具备稳定的受精率,可用于小鼠运输及特殊情况品系恢复。     

基于Cre-LoxP系统的条件性定点敲入人源hRas基因小鼠的建立

目的 构建基于Cre- LoxP系统的条件性定点敲入人源hRas基因(c-Ha-ras)的小鼠,以获得hRas基因在特定组织器官条件性表达的小鼠模型,用于药物的临床前致癌性安全评价及相关机制研究。方法 首先构建hRas打靶载体,电击法转染入小鼠胚胎干细胞(ES细胞),用正负法筛选阳性ES细胞,通过PCR、 Southern鉴定后,将正确重组hRas基因的ES细胞导入C57BL/6 J小鼠囊胚,移入同步发育的受体鼠子宫,妊娠足月出生的嵌合体小鼠与C57BL/6 J小鼠交配获得杂合子hRasfl/+小鼠。再将杂合子hRasfl/+小鼠间交配获得纯合子小鼠hRasfl/fi,然后与全身组织细胞表达Cre重组酶的Tg (EIIa-cre)小鼠进行交配,获得全身细胞表达hRas基因的hRas-EIIa-cre小鼠,并通过荧光定量PCR方法检测不同日龄胚胎期仔鼠的hRas基因表达水平。结果 成功构建了基于Cre- LoxP系统的人源hRas基因条件性定点敲入小鼠模型的载体,筛选得到的一个正确克隆,电转ES细胞后进行Southern blot鉴定,经过初筛和复筛,共获得12个阳性克隆,挑选A11号克隆ES细胞进行囊胚注射,移植了48枚胚胎,出生9只小鼠,其中6只为嵌合鼠,将嵌合率>50%的雄鼠与野生型C57BL /6 J雌鼠进行交配,出生21只后代,其中鉴定有4只hRasfl/+小鼠;hRasfl/+小鼠间交配出生29只小鼠,其中有14只纯合子hRasfl/fi小鼠;hRasfl/fl小鼠与Tg (EIIa-cre)工具鼠交配6次,未有仔鼠出生;跟踪不同发育时期胚胎中hRas基因的表达发现,E10.5～15.5 d胚胎中检测到hRas基因表达。结论 成功建立运用Cre- LoxP系统建立了带有hRas基因敲入的纯合子小鼠hRasfl/fl,未能得到全身细胞高效表达人源hRas基因的hRas-EIIa-cre小鼠,但为进一步利用hRasfl/fl小鼠模型建立其他组织特异性的条件性基因敲入小鼠模型做好技术储备。     

噬菌体展示的白色念珠菌热休克蛋白90特异表位在小鼠体内诱发的免疫应答

将展示白色念珠菌热休克蛋白(HSP)90特异表位的杂合噬菌体作为抗原免疫C57BL/6J小鼠,以检测该抗原在小鼠体内诱发的体液免疫和细胞免疫.实验结果表明:抗原PA刺激机体产生了较强的抗白色念珠菌HSP90特异性抗体;脾CD4 T和CD8 T淋巴细胞出现率明显增高;脾细胞分泌IL-2的能力有增高趋势.此外,将免疫后的小鼠通过尾静脉进行系统性白色念珠菌感染,采用组织病理学方法观察了抗原对小鼠肾脏白色念珠菌寄居数量的影响,实验结果表明,抗原对系统性白色念珠菌感染具有明显的保护作用.