小麦易位系基因组DNA甲基化分析中MSAP体系建立及应用

DNA甲基化在真核生物生长发育过程中起着重要调控作用.依据对DNA甲基化敏感程度不同的同裂酶,在AFLP(amplified fragment length polymorphism)基础上发展而来的MSAP(methylationsensitive amplification polymorphism)技术可以方便的检测全基因组DNA胞嘧啶甲基化模式及程度.本文以一套高代分离的小麦黑麦1RS/1BL易位系及其亲本材料为研究对象,采用EcoRⅠ和HpaⅡ(或MspⅠ)双酶切建立适合于小麦易位系基因组的MSAP技术体系,针对研究中出现的问题提出解决方法,并对酶切位点的甲基化模式进行分析,检测易位系及亲本材料间的甲基化多态性,为进一步的基础研究和育种应用提供理论依据.     

节节麦与黑麦间杂种F1胚再生植株及其双二倍体细胞遗传学分析

将节节麦与黑麦杂交,利用Fl胚愈伤组织培养再生杂种植株,对胚再生杂种F1进行秋水仙素加倍获得了节节麦和黑麦的双二倍体(1)DRR),杂种F1(DR)的减数分裂中期Ⅰ(PMCMI)染色体构型平均为2n=10．16Ⅰ 1．86Ⅱ 0．12Ⅲ 0．00625Ⅳ,该双二倍体(DDRR)的减数分裂中期Ⅰ(PMCMI)染色体构型平均为2n=8．676Ⅰ 9．318Ⅱ 0．019Ⅲ 0．004Ⅳ,C1的结实率平均为2．118％．该双二倍体可作为一个新的物种以及作为改良小麦的种质材料。     

黑麦B染色体显微切割和微克隆

显微分离出两条黑麦Ｂ染色体,经蛋白酶Ｋ处理,Ｓａｕ３ＡＩ酶切后,用ＬＡ－ＰＣＲ（ＬｉｎｋｅｒＡｄａｐｔｅｒＰＣＲ）方法进行扩增,得到０．２～２ｋｂ的ＤＮＡ片段．Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析结果表明,此扩增产物来源于黑麦Ｂ染色体．将部分ＰＣＲ产物克隆到ｐＵＣ１９载体中,获得了５０００个克隆．为构建Ｂ染色体ＤＮＡ文库奠定了基础     

F-MSAP： A practical system to detect methylation in chicken genome

By replacing radiation with fluorescent system in the technique of methylation sensitive amplified polymorphism （MSAP） and optimizing reaction conditions, a modified technique to detect DNA methylation called F-MSAP （fluorescent labeled methylation sensitive amplified polymorphism） was developed. In the present study, cytosine methylation patterns of genomic DNA were investigated in two inbred chickens and their F1 hybrids. Three types of methylation patterns were observed in each individual, namely fully methylated, hemi-methylated or not methylated types. The average incidence of methylation was approximately 40%. The percentage that the F1 hybrid individual inherits the methylation for any given sites from either/both parent amounted to 95%, while the percentage of altered methylation patterns in F1 individual was only 5%, including 14 increased and 12 decreased methylation types, demonstrating that F-MSAP was highly efficient for large-scale detection of cytosine methylation in chicken genome. Our technique can be further extended to other animals or plants with complex genome and rich in methylation polymorphism.     

黑麦Rubisco大亚基基因(rbc L)的克隆及其限制性内切酶图谱的构建

以小麦的rbc L为探针,分别与黑麦ctDNA EcoR I,BamH I,Hind III的酶切谱带进行Southern杂交。结果发现,E13(2.15 kb),B2(10.7 kb),H2(10.4 kb)均含有rbc L基因。用pUC9为载体克隆黑麦ctDNA的B2片段,Southern杂交后表明,得到的重组质粒含有rbc L基因,将其命名为pRCB2。设计了一种快速准确的分析方法,构建出pRCB2质粒DNA的限制性内切酶图谱,rbc L被定位在一个2.8 kb的区域内。     

小麦染色体和间期集缩染色质孔洞及内在结构的观察

对小麦根端分生组织进行常规电镜观察的结果表明：小麦染色体和间期集缩染色质中均存在孔洞，里面有由颗粒和纤维构成的、类似于骨架的结构，对有关染色体骨架和染色质骨架之间以及它们与核基质之间的相互关系进行了讨论。     

黑麦花粉母细胞减数分裂异常观察分析

本文通过黑麦花粉母细胞减数分裂过程的观察与分析,首次报道了黑麦花粉母细胞在自然条件下减数分裂后期Ｉ,末期Ｉ,中期Ⅱ,末期Ⅱ等的１８种异常情况,指出细胞分裂的不同步可能是这些异常情况的形成机制,而低温对细胞分裂机制的影响则可能是造成细胞分裂不同步的外部原因。     

普通小麦与天蓝偃麦草杂交第一代的细胞学研究

普通小麦(Triticum aestivum)与天蓝偃麦草(Agropyron glaucum)远缘杂交第一代无性繁殖第七年花粉败育表现完全不育。在花粉母细胞减数分裂的各个时期中,能观察到单价体、落后染色体、染色体桥以及三分体、五分体、六分体,花粉粒呈教育型。这些异常变化是导致后代不育的原因所在。     

应用基因组原位杂交鉴定杂交后代中的簇毛麦染色体

用地高辛（Digoxigenin-11-dTup)标记的簇毛麦染色体组DNA为探针,以普通小麦“中国春”总DNA作封阻进行基因组荧光原位杂交,对小麦和簇毛麦杂交和回交后代进行检测。结果显示,在杂交后代的28条染色体中有7条簇毛麦染色体,在发生部分染色体加倍的回交代后鉴定出含7条簇毛麦染色体重的易位系。GISH的准确鉴定以及易位系的获得为向小麦导入簇志麦的有用基因提供了宝贵材料。     

Molecular cytogenetic analysis of Triticum aestivum-Leymus racemosus reciprocal chromosomal translocation T7DS·5LrL/T5LrS·7DL

In order to induce chromosome translocation between wheat chromosomes and chromosome 5Lr of Leymus racemosus, the mi- crosporocytes during meiosis of T. aestivum-L. racemosus disomic addition line DA5Lr were irradiated by 60Co γ-rays 800 R (100 R/min). Before flowering, the treated spikes were emasculated and bagged. After 2-3 d, the emasculated flowerets were pollinated using pollens from T. aestivum cv. Chinese Spring. One plant with two translocation chromosomes involved in both the long and short arm of...     

小麦三雌蕊基因Pis1的多效性研究初报

利用小麦三雌蕊突变体与绵阳29杂交,再以绵阳29为轮回亲本,多次回交,并结合人工选择,构建了小麦三雌蕊性状的近等基因系.对小麦三雌蕊突变体,绵阳29以及小麦三雌蕊性状近等基因系的小穗数﹑穗长﹑穗粒数﹑叶长﹑叶宽﹑茎粗﹑千粒重和单株粒重等8个农艺性状进行了分析,结果表明:其中除小穗数和穗长没有显著性差异,其余6个农艺性状均表现出显著性差异.近等基因系在穗粒数、叶长、叶宽、茎粗和单株粒重这5个农艺性状明显高于轮回亲本,而千粒重明显低于轮回亲本.由此可见Pis1基因有增加穗粒数、叶长、叶宽、茎粗和单株粒重的效应,有降低千粒重的副效益.     

黑麦——遗传学实验的常用材料

黑麦属于禾本科小麦族的黑麦属,含有一个染色体组R,体细胞染色体多为二倍体,2n=2x=14。文中介绍了黑麦的形态、分布及其优良特性;重点阐述了黑麦在细胞有丝分裂、细胞减数分裂、多倍体的诱导鉴定以及染色体分带和带型分析等遗传学实验教学中的应用;并探讨了黑麦在小麦遗传育种研究中的利用价值和利用前景。     

卵巢癌中的表观遗传修饰

介绍了在卵巢癌的发展和治疗中表观遗传学的重要性，特别强调了在卵巢癌中内源性和获得性耐药性遗传途径中异常的DNA甲基化和组蛋白去乙酰化的重要性．通过表观遗传治疗反转肿瘤抑制基因沉寂和其他参与药物级联反应的基因沉寂为出现耐药性的卵巢癌患者带来了新的希望．     

抗白粉病小麦近等基因系DNA甲基化的MSAP分析

应用甲基化敏感扩增多态性（MSAP）技术检测小麦抗白粉病代换系6A／6V与感病品系京411的近等基因系NILs,及其亲本6A／6V和京411的基因组DNA甲基化变化．结果表明,NILs的整体甲基化水平（22．9％）略高于6A／6V（21．2％）,低于京411（23．4％）．分析其甲基化模式发现,NILs相对京411甲基化水平降低条带比例（2．89％）明显高于甲基化提高条带（0．55％）,而相对抗病亲本6A／6V,NILs甲基化水平降低条带比例（2．96％）明显低于甲基化提高条带（4．20％）,说明NILs的整体基因表达水平低于6A／6V,高于京411．     

水稻表观遗传的研究进展

从DNA甲基化、组蛋白修饰的形成条件及其作用机制等方面,对表观遗传学的一些常见的发生机制进行了简要综述,并对表观遗传在水稻中研究的前景作了展望．