生长因子对牛体外受精卵体外发育的影响

本研究探讨了在成熟培养液和发育培养液内添加ＥＧＦ和ＴＧＦ－α对牛体外受精卵发育的影响，在成熟培养液内分别添加ＥＧＦ和ＴＧＦ－α，经体外受精处理后卵裂率分别为７８．３％和８２．６％，显著高于对照组６０．２％的卵裂率；三个处理组囊胚发育率分别为１９．６％、２４．５％和１８．７％，三者间无显著差异．在发育培养液内分别添加ＥＧＦ和ＴＧＦ－α，其囊胚发育率分别为３０．０％和２３．４％，与对照组２１．０％的囊胚发育率相比差异不显著．在成熟培养液内添加ＴＧＦ－α，在发育培养液内添加ＥＧＦ，经这两种生长因子分别作用后，体外受精卵翼胚发育率为２１．０％，与单独使用其中一种生长因子相比囊胚发育率无明显提高．     

不同种公牛精液对牛卵母细胞体外受精效果影响的研究

分别利用不同个体的海伏特、安格斯和荷斯坦种公牛精液进行体外受精，观察了不同品种不同个体种公牛精液的体外受精效果，利用五种海伏特种公牛精液进行体外受精后卵裂率为１７．６％～７４．７％，囊胚发育率为１．０％～３２．６％，不同个体间差异极显（Ｐ〈０．０１）。利用五种安格斯种公牛精液进行体外受精后卵裂率为３４．７％～８５．３％，囊胚发育率为６．２～４０．５％，不同个体间具极显差异（Ｐ〈０．０１）。利用     

牛胚胎体外生产技术的应用研究

利用屠宰牛卵巢抽出的卵母细胞，以卵裂率和囊胚发育为标准，对牛胚胎体外生产过程进行了简化试验，结果显示：不加卵丘细胞的高密度卵母细胞体外成熟（１００－２００枚／平皿）可代替加卵丘细胞标准密度培养，其卵裂率和囊胚发育率没有显著变化，体外授精时间可从成熟培养后２２小时延长至２７小时，卵裂率和囊胚发育率均没有显著变化。卵母细胞体外成熟后可以不经洗涤直接移入受精滴，原成熟培养皿内残留孵丘细胞再培养４８小时形     

猪卵母细胞体外成熟的研究

从屠宰场收集卵巢,用注射器从卵泡中吸出卵丘－卵母细胞复合体,对猪卵母细胞体外成熟的条件进行研究,根据卵母细胞体外成熟时的核成熟率、胞质成熟及体外受精时精子的穿卵速度,合适的体外成熟培养时间为４２～４５ｈ．卵母细胞周围卵丘细胞的多少及其排列紧密状态与卵母细胞的体外成熟率密切相关。卵泡大小与卵母细胞的体外成熟率有关,大卵泡卵优于小卵泡卵。ＰＭＳＧ促进猪卵母细胞体外成熟。     

完全体外化牛细胞核移植的研究

本研究探讨了用体外成熟卵母细胞和体外受精胚胎进行核移植的可能性。本研究结果在我国首次获得牛核移植的成功。从屠宰场回收的卵巢中抽取卵球－卵母细胞复合体，采用以前报道的方法（石德顺等，广西农业大学学报’１９９４：１３：１－５）进行体外成熟（ＩＶＭ）和体外受精（ＩＶＦ），获得ＩＶＭ卵母细胞和ＩＶＦ胚胎，体外成熟２３－２４ｈ后，在含０．１％透明质酸酶的无钙镁ＰＢＳ（ＰＢＳ）内，用细管反复吹打去掉卵丘细胞。选择具有明显第一极体的卵母细胞通过显微操作移去第一极体及其附近约一半的细胞质进行去核，去核的卵细胞在成熟液内继续培养到ＩＶＭ３０ｈ．体外发育到８－３２细胞期的ＩＶＦ胚胎用作核供体．供体胚胎用含０．２５％Ｐｒｏｎａｓｅ（溶于ＰＢＳ￣－）溶解透明带，并用细管吹打将其分散成单个卵裂球，在ＩＶＭ３０ｈ将单个卵裂球显微注入去核卵母细胞的卵周隙内，并在ＩＶＭ３１ｈ用８０Ｖ／ｍｍ４０μｓ两次电脉冲（间隔１秒）来诱导卵裂球与去核卵母细胞的融合。融合卵在颗粒细胞单层培养滴内共培养，体外培养２４ｈ后观察卵裂结果，经体外培养５－８天后发育到桑椹和囊胚的核移植胚胎移植到同期发情的受体．２个月后直检妊娠情况．本实验中共操作１９４枚卵母细胞，     

羔山羊的超数排卵及体外受精

以ＦＳＨ或ＦＳＨ－ＬＨ四种不同处理方法对２９只６８～１１０日龄羔山羊进行超排处理，结果共采集卵泡卵母细胞７０８枚，平均每只羔羊采卵２４．４枚．卵母细胞经体外培养２４ｈ后有８１．２％的卵发育为成熟卵．分别用经钙离子载体Ａ＿（２３１７８）或肝素进行获能处理的精子对体外培养成熟的卵子进行体外受精，结果精子穿入卵率分别为５４．８％和３４．４％，发育至２～４细胞胚的卵裂率分别为２８．６％和４１．９％．采用ＦＳＨ－ＬＨ（肌注）进行超排处理得到的卵子经体外受精处理后，其卵裂率明显高于采用其它超排方法得到卵子的卵裂率．     

牛体外受精技术研究的现状与展望

系统综述了牛体外受精技术研究的现状及存在的问题．并对今后的研究方向和前景提出了展望。牛卵母细胞可在不含血清的成熟培养液中获得受精及胚胎发育能力，促卵泡素、促黄体素及上皮细胞生长因子均对这一过程具促进作用。肝素是迄今最为有效的精子获能处理方法，但在受精过程中对精子获能起决定作用的是卵丘细胞和卵母细胞本身。提高受精质量可明显提高受精卵的胚胎发育能力。体外受精卵可通过改善培养条件或与体细胞进行复合培养发育到囊胚阶段．但后者更为稳定可靠。目前，牛卵母细胞的体外受精分裂率可达８０％，囊胚发育率达４０％左右．两枚鲜胚的移植妊娠率可达５０％～６０％．而两枚冻胚的移植妊娠率仅３０％～５０％。因此，尚需进一步提高体外受精胚胎的活力和改进胚胎的冷冻保存技术。     

熊胆缓释胶囊的溶出度和生物利用度

为了减少服药次数,方便病人和医护人员,用缓释阻滞剂制备熊胆缓释胶囊。高效液相色谱外标定量法测定熊胆中特有成分熊去氧胆酸(UDCA)的含量,建立校正曲线及方法学考察。用RC-3D溶出仪,转篮法测定12颗胶囊溶出度。家兔16只分成两组,分别灌胃口服熊胆缓释颗粒和熊胆原药100mg/5mL生理盐水液。设定时间点采血后测出血浆中UDCA含量,绘制血药浓时曲线。3P87软件计算曲线峰下面积AUC缓,AUC原和各自的转运速率常数K缓和K原,用公式[AUC缓K缓(/AUC原·K原)]×100%,得出相对生物利用度F。实验结果是(1)体外溶出度按取样时间点为序(h)是05、1、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20。累积溶出百分率(%)为1837、2945、3578、4267、4986、5734、6912、7642、8867、9612、9673、9748。(2)血药浓时曲线在设定时间点(h)1、3、6、9、12、24、36、48,缓释组的浓度(μg·mL-1±SD)59159±2748,68826±4279,66278±3964,60207±3717,54964±4459,61480±4775,51573±6009,42462±4522。原药组41334±2291,67522±4635,51498±4987,37518±4175,36644±3933,35464±2986,25870±1914,22318±2693。曲线峰下面积(AUC缓和AUC原)[μg·mL-1·h)]分别是89852664,35164555,两组清除相转运速率常数K缓和K原分别是(h-1)003、0089。(3)计算出相对生物利用度F为7680%。表明熊胆缓释胶囊有好的体外溶出度和较高的体内生物利用度,可提供48h服药一次,达到缓释目的。     

罗通定双层片的体外释放度研究

建立罗通定双层片释放度测定方法并考察影响释放度的因素。以人工胃液为释放介质,采用紫外分光光度法,检测波长281nm,对其进行常规的方法学研究。本法的平均回收率符合要求,在(6.00-60.00)μg/mL范围内浓度与吸收度线性良好;转速对释放度无显著性影响;硬度对双层片的早期释药行为有显著性影响,对中、后期释药行为无显著性影响。本法适用于该制剂的质量控制;双层片在体外具有良好的速释和缓释特征。     

槐豆胶的急性毒性试验及槐豆胶与长角豆胶、瓜胶流变性的比较研究

用槐豆胶对小白鼠进行了急性毒性试验，并对槐豆胶与长角豆胶、瓜胶的粘度及与黄原胶的协效性进行了对比研究．试验表明，槐豆胶对雌性、雄性小白鼠经口试验均为无毒，并且槐豆胶粘度比长角豆胶稍低，比瓜胶高；槐豆胶、长角豆胶与黄原胶都有强烈的协效增稠性和协效凝胶性，而瓜胶则无此反应．由此表明，槐豆胶可作为食品添加剂，在一定程度上代替长角豆胶和瓜胶，应用于食品工业．     

牛细胞核移植试验初报

体外成熟培养（ＩＶＭ）２３－２４ｈ的牛卵母细胞，去核后用８０Ｖ／ｍｍ，４０μｓ电激活２次（Ｉ组）或不激活（Ⅱ组），然后注入８－３２细胞期体外受精（ＩＶＦ）牛胚胎的卵裂球，再用８０－１００Ｖ／ｍｍ，４０μｓ电激两次诱导卵母细胞与卵裂球融合，两组的融合率（６２．８％与６５．１％）和卵裂率（５５．４％与５１．９％）无显著差异（Ｐ〉０．０５）。全部４１２枚重组卵电激后的融合率是６３．８％（２６３／４１２）     

核酶的化学合成及其对烟草花叶病毒RNA片段的体外剪切

设计并用化学方法合成了针对烟草花叶病毒ＲＮＡ的核酶ＲＺ－１及ＲＺ－１小型化的核酶ＲＺ－２以及它们的底物ＲＮＡ片段Ｓｂ,研究了两种核酶对底物Ｓｂ的体外催化活性,并把核酶Ｒｚ－１与生物合成的相同组成的核酶Ｒｚ－１’进行了比较试验。     

冬虫夏草体外溶出度研究

依据《药典》中的溶出度测定法进行冬虫夏草纳米粉胶囊、冬虫夏草粗粉胶囊及冬虫夏草药材的体外溶出实验.实验显示,冬虫夏草药材在10 min时溶出最多,冬虫夏草纳米粉胶囊及冬虫夏草粗粉胶囊都在40min时达到溶出最高点,而纳米粉溶出度高达100%.结果表明,装入胶囊的冬虫夏草粉比未装入胶囊的冬虫夏草药材,溶出度稳定,且冬虫夏草纳米粉溶出度最高.     

柽柳的组织培养与快速繁殖

初步建立了柽柳（Tamarix chinensis Lour)一次成苗的组培技术,嫩枝在MS＋Kt 3.0mg.L^-1上经过50d可得到完整植株,但MS＋BA 1．0mg.L^-1更适于增殖,并讨论了激素对于柽柳增殖和生根的影响。     

2种红豆杉的离体胚培养

建立了2种红豆杉的离体胚培养和植株再生系统.结果表明,4℃保存和流水冲洗能够在一定程度上破除红豆杉胚的休眠,不同培养基对种胚培养的影响没有明显的差别,经过低温处理的种胚萌发率由41.7%提高到69%,成苗率由33.3%提高到44.8%;流水冲洗预处理对种胚萌发也有促进作用,处理2 d后种胚的萌发率和成苗率都有明显的提高.     

哈密瓜花粉离体萌发特性的研究

通过哈密瓜花粉在固体培养基上进行离体培养，对哈密瓜品种金皇后的离体萌发特性进行研究。结果表明，培养基中硼酸的不同浓度对哈密瓜花粉离体萌发具有明显的影响，适宜的硼酸浓度为20mg／L；在不同的温度条件下，哈密瓜花粉的萌发率不同，25℃时哈密瓜花粉的萌发率达到了最大值，花粉萌发的适宜温度范围为10．35℃，随着温度的升高，花粉管的长度也相应的增加；另外，不同的贮藏时间和贮藏温度对哈密瓜花粉的萌发率也有一定的影响，一般在低温条件下贮藏花粉，可以较长时间保持花粉较高的萌发率。     

羔山羊卵泡的发育及卵母细胞体外成熟的研究

为利用羔羊作供胚羊，采用三种超数排卵的方法，对出生后４０～１５０日龄的羔山羊进行超数排卵处理以后，从活体采集卵巢卵母细胞在体外进行了培养．研究结果表明，采用超数排卵的技术能够诱导未性成熟羔山羊的卵巢卵泡的发育，由超排后采集到的羔山羊卵泡卵母细胞经体外培养有继续发育成熟的能力．适宜的超排方法为ＦＳＨ１０ｍｇ＋ＬＨ１．５ｍｇ（肌肉注射），羔山羊适宜的超排日龄为４０～９０ｄ，卵母细胞的体外适宜培养时间为１８～２８ｈ．     

平衡方法及平衡和解冻温度对牛体外受精胚胎玻璃化冷冻保存效果的研究

以体外成熟、体外受精并体外发育的牛囊胚为实验材料进行玻璃化冷冻保存，分别探讨了防冻剂的平衡方法以及平衡和解冻温度对胚胎冷冻效果的影响．实验结果显示，在室温下（１８℃）以二步法或三步法添加防冻剂的冷冻效果，明显优于在４℃下，以二步法添加防冻剂的效果，其冷冻—解冻胚的发育率分别为６２．８％（５９／９４）、５３．１％（５２／９８）和１４．６％（１２／８２）（Ｐ＜０．０１）；另外，室温下以二步法玻璃化冷冻的胚胎，在２０℃水浴中解冻的发育率明显高于３７℃解冻的效果，６２．７％（３７／６２）、２６．２％（１６／６１）（Ｐ＜０．０１）．结果表明：体外成熟、体外受精的牛胚胎可以进行玻璃化冷冻保存，并能得到较高的培养存活率，在室温下，以二步法添加防冻剂，并于２０℃下解冻的玻璃化冷冻保存方法是一种快速、简便而有效的方法．