基于外切酶驱动策略构建荧光减弱式T4PNK免标记传感器

T4多核苷酸激酶(T4polynucleotide kinase,T4PNK))是5′-激酶家族的主要成员,可以将三磷酸腺苷(ATP)的γ位点磷酸基团转移到单链或双链DNA/RNA、寡核苷酸或具有3′-磷酸基团的单核苷酸的5′-羟基进行催化。核酸中5′-羟基末端的磷酸化在DNA重组、复制和损伤中起着重要作用,与恶性疾病的生成发展密切相关。因此构建一种灵敏的T4PNK的检测方法对于许多疾病早期治疗具有重要意义。本文提出基于λ核酸外切酶驱动荧光减弱式检测T4PNK活性的策略,拟利用T4PNK可将DNA的5′端由羟基化变为磷酸化的特点,磷酸化DNA能被λ核酸外切酶(λ-exonuclease)特异性识别和切割的特点降解底物双链DNA,导致与荧光染料SGΙ键合位点急剧减少,荧光信号输出由"on"模式切换到"off"模式,荧光强度大大减少。因此,可利用荧光减弱的程度来实现对T4PNK的免标记荧光定量检测。     

以产气肠杆菌催化肌苷5′-位磷酸化的特性

为了分析磷酸酶在菌体细胞内的存在方式、酶反应特征及产物结构,以产气肠杆菌(E.aerogenes IAM1183)细胞作为催化剂,以焦磷酸和肌苷为底物,并采用液相色谱和核磁共振等方法进行了研究。酶促反应产物被证实为5′-IMP。结果表明:该酶为胞内酶,具有可溶性的特点;酶促反应温度范围30~40℃,最适温度为35℃;整细胞酶促反应的最适pH值为4.8,催化16 h可以合成4.79 mg.mL-1的5′-IMP;破碎细胞,酶促反应的最适pH值为7.6,催化10 min可以合成5.85 mg.mL-1的5′-IMP。     

香菇柄中5′-核苷酸的酶法提取及组成分析

为了提高香菇柄中5′-核苷酸的提取得率和提高香菇柄的附加值,研究以香菇柄为原料,通过单因素实验研究了纤维素酶加酶量、液固比、酶解温度、酶解时间、pH值对5′-核苷酸得率的影响,并采用正交试验对纤维素酶酶解提取5′-核苷酸工艺进行优化,最后利用高效液相色谱法(HPLC)对提取得到的5′-核苷酸组成进行分析。结果表明,在单因素实验结果基础上,通过正交试验优化,纤维素酶酶解提取香菇柄中5′-核苷酸的优化,工艺参数为:液固比(mL∶g)20∶1,加酶量0.8%,酶解温度40℃,pH值5.4,酶解时间4h,此时5′-核苷酸得率为4.08mg·g-1,与HPLC检测结果(4.57mg·g-1)相近。纤维素酶酶解提取香菇柄5′-核苷酸由5′-鸟苷酸、5′-尿苷酸、5′-胞苷酸、5′-腺苷酸、5′-肌苷酸、5′-黄苷酸组成,其中呈鲜味核苷酸占5′-核苷酸的62.63%。     

固定化E.coli BL21(pTrc-gsh)细胞催化合成谷胱甘肽

分别以卡拉胶、明胶、海藻酸钠包埋E.coli BL21 (pTrc-gsh)细胞催化合成谷胱甘肽(GSH).从酶活收率及机械强度方面进行比较,选择卡拉胶为包埋载体,其最适pH为7.0,最适温度为40°C.相关物质对GSH的合成均有影响半胱氨酸、甘氨酸的最适浓度为20mmol/L,谷氨酸的最适浓度为60mmol/L;Mg2+/ATP为1～5(V/V)较合适;腺苷二磷酸(ADP)浓度为5mmol/L时对酶活的抑制为20%.优化条件下罐式反应器中GSH的产量为0.84g/L,操作稳定性较好;延迟加入甘氨酸时GSH产量可提高17.5%;与酵母生产ATP体系相耦联的共固定化体系在填充床中反应,GSH合成量达1.24g/L,收率比直接加入ATP提高24.2%.     

线粒体lncRNA IDL影响非小细胞肺癌氧化磷酸化

为了探究线粒体长链非编码RNA(mitochondrial long non-coding RNA,mtlncRNA)IDL在人非小细胞肺癌细胞(human non-small cell lung cancer, NSCLC)代谢和生长中的作用及机制，本研究首先在A549细胞中通过线粒体压力测试发现敲低IDL会导致细胞的氧化磷酸化功能受损，接着通过细胞增殖实验、划痕实验和克隆形成实验，证明了敲低IDL时人非小细胞肺癌细胞A549和H1299的生长速度变慢、迁移能力和克隆形成能力减弱.随后通过RNA沉降实验(RNA pull-down)和RNA免疫沉淀实验(RIP)找到了在体内外均可以与IDL特异性结合的蛋白——ATP合成酶α亚基，即ATP5A1蛋白，并通过免疫共沉淀实验(Co-IP)证明了IDL下调会导致ATP5A1蛋白的O-GlcNAc修饰水平增加，在A549细胞中敲低ATP5A1也得到了与敲低IDL时一致的细胞表型.以上结果说明敲低IDL会导致非小细胞肺癌细胞氧化磷酸化功能受损、细胞生长受抑制.     

自絮凝酵母细胞膜脂肪酸影响乙醇激活 ATP 酶

首次揭示酵母菌细胞膜磷脂脂肪酸组成对影响质膜ATP酶对乙醇刺激的响应.实验结果表明,细胞膜磷脂脂肪酸组成特点,对生长于未添加乙醇条件下的自絮凝酵母的质膜ATP酶活性没有影响,但却明显影响生长于添加乙醇(体积分数为0.01～0.10)的菌体质膜ATP酶对乙醇激活的敏感性.预培养于添加0.6 mmol·L-1棕榈酸、亚油酸或亚麻酸条件下,菌体质膜ATP酶的最大激活水平分别为各自酶的基态水平(未激活)的3.6,1.5和1.2倍,而对照组(预培养于未添加脂肪酸条件下的菌体)的相应值为2.3倍.酶激活后,米氏常数Km、最适pH和对质膜ATP酶特异性抑制剂钒酸钠的敏感性等性质不变,但最大反应速度Vmax明显增加.实验结果还表明,细胞膜磷脂脂肪酸组成特点对提高菌体的耐乙醇能力越有利,其质膜ATP酶被乙醇激活的幅度越大,说明菌体耐乙醇能力的提高,与其质膜ATP酶对乙醇激活的敏感性的增加密切相关.     

益生元对HCT-8细胞炎症和树突状细胞成熟的影响

由于对于不同益生元的功效差异所知甚少,不同益生元往往被当作类似物应用于食品添加及临床干预。通过鉴定市场上常见的6种益生元(蔗果三糖、2′-岩藻糖基乳糖、低聚果糖、低聚半乳糖、低聚甘露糖、菊粉)在调节人体炎症免疫功能上的差异,为益生元的精准化应用提供指导方向和实验依据。用出血性大肠杆菌(enterohemorrhagic Escherichia coli O157:H7,EHEC)刺激人肠上皮细胞系HCT-8细胞构建肠上皮细胞炎症模型,检测6种益生元处理后NF-κB信号通路激活及下游细胞因子TNF-α 和IL-6表达情况以确定其对于细胞炎症的影响；从30名志愿者血液中通过密度梯度离心法分离单个核细胞,并于体外诱导产生树突状细胞以构建免疫细胞成熟分化模型,在诱导分化的过程中分别加入6种益生元,通过流式细胞术分析益生元处理后树突状细胞的成熟比例以确定不同益生元对于免疫细胞成熟分化的影响。研究发现:6种益生元只有2′-岩藻糖基乳糖、低聚半乳糖及蔗果三糖抑制人肠上皮细胞炎症响应,其余无明显影响；2′-岩藻糖基乳糖、蔗果三糖及菊粉促进树突状细胞成熟(促进成熟的志愿者比例分别为73.3%、57.1%、63.3%),而低聚半乳糖抑制树突状细胞成熟(抑制成熟的志愿者比例为73.3%)。这些结果表明不同益生元在调节人体炎症免疫方面具有不同的功能,益生元的添加需要根据人群身体情况特征精准化设计。     

肌酸激酶的生理功能与运动

肌酸激酶(creatine kinase,CK)是催化磷酸肌酸和ATP间高能磷酸基团转移的关键酶,它保持ATP/ADP比例平衡和ATP的供给。肌酸激酶家族共有5种同工酶,分布于全身各种组织的需能部位。研究发现,CK酶在能量代谢中有重要作用,与肌肉收缩、神经功能、细胞膜的稳定性、细胞的能量反馈调节、有氧耐力有关。一些研究认为,CKM(肌型肌酸激酶,creatine kinase,muscle)基因多态性影响个体有氧运动能力和个体对耐力训练的敏感性。本文对这些成果作一综述,并对未来研究进行展望,以期为进一步的研究提供参考。     

绵羊角蛋白关联蛋白KAP6-1基因5′端调控区的分子克隆及测序结果比较

根据绵羊毛囊角蛋白关联蛋白(KAP 6-1)基因已知DNA序列设计合成了两个特异性引物,以绵羊基因组DNA为模板,PCR扩增出1 042 bp的特异性片段,连接到pM D 19T载体中获得该片段克隆.经过快速提质粒法筛选、限制性内切酶分析表明该克隆包含所需的目的片段.DNA测序结果也证明该克隆片段与原基因5′端调控区序列相比具有很高的一致性.研究结果为今后制备转基因克隆动物,在毛囊细胞中特异性表达绒毛生长调控基因奠定了基础.     

miR-128通过靶向p38调控树突细胞中IL-6的产生

p38 MAPK作为MAPK信号通路中关键的一类,对于树突细胞的成熟及激活等都具有至关重要的调节作用.首先利用生物信息学的方法预测了p38可能受到一系列microRNA的调控,进一步利用双荧光素酶报告载体系统证实了miR-128可直接作用于p38基因的3′非编码区域并抑制p38的表达.转染miR-128可以很显著地降低树突细胞中p38的蛋白水平,进而引起细胞因子IL-6分泌的减少.因此,利用miR-128可能是改善树突细胞抗肿瘤免疫治疗的一个新策略.     

鸟类胃肠道内分泌细胞

本文综述了鸟类胃肠道内分泌细胞的形态，分布及研究意义。     

干细胞技术进展

干细胞技术是人类后基因组计划的一部分。随着这一技术的科研和应用的快速发展,人们开始认识到这一技术的具大诱惑。本文对干细胞的概念、种类、技术原理、进行了概括,对干细胞技术应用领域、发展前景等进行了研究。     

诱导性多潜能干细胞(iPS)研究：现状与展望

通过特定的基因组合与转染可以将已分化的体细胞诱导重编程为多潜能干细胞（iPS）,是近年来干细胞研究领域最令人瞩目的一项新的干细胞制造技术。与胚胎干细胞（ES）不同,iPS细胞的制造不需要毁损胚胎,因而不会涉及更多的伦理学问题。iPS的出现不仅为体细胞重编程去分化机制的研究注入了新的活力,而且为疾病发生发展相关机制研究与特异的细胞治疗,特别是再生医学带来新的曙光。目前,iPS的研究尚处于初级阶段,文章就iPS的研究现状与应用前景进行综述和展望。     

一种测定动物细胞平均沉降速率的新方法

通过构建细胞沉降过程的理想化模型，提出了一种简易的细胞沉降速率测定方法。标准颗粒沉降实验结果验证了这种方法的准确性。利用该方法测定杂交瘤细胞的沉降速率，定量描述了杂交瘤活细胞与死细胞之间的沉降速率差异，活细胞的沉降速率(15．5mm／h)大约是死细胞(9．36mm／h)的1．67倍，约是细胞碎片(1．46mm／h)的10倍；把该方法用于不同种类不同培养时期的脐血造血细胞，发现它们具有不同的沉降速率。这些数据将为细胞连续灌注培养过程的细胞截留研究提供依据。     

干细胞研究国际发展态势分析

干细胞以其自我更新和多向分化的能力得到了国际社会的普遍关注,为干细胞疗法的临床应用带来了希望.该文结合文献计量方法,对干细胞以及诱导多能干细胞、胚胎干细胞和间充质干细胞等3个干细胞研究重点领域的科研现状进行了分析,总结了这些领域的发展趋势和重点研究方向,并根据分析结果,对我国干细胞领域采取的措施、今后发展的方向提出了建...     

Comparative study on the effect of integrin αvβ3 on secretion of matrix metalloproteinases in human normal and carcinoma trophoblasts

The invasion of cytotrophoblast cells into the maternal endometrium during embryonic implantation is very similar to the metastasis of carcinoma cells. However, the significant difference is that the former is a highly controlled process. In this report, the effects of integrin αvβ3 on the secretion of matrix metalloproteinase (MMP) were compared between normal cytotrophoblast cells and choriocarcinoma cells by RT-PCR, gelatin zymography and immunocytochemistry. The results reveal that both normal cytotrophoblast cells and choriocarcinoma cells can express integrin αvβ3. The secretion of MMPs in normal cytotrophoblast ceils is up-regulated by anti-αvβ3 antibody, whereas, decreased in choriocarcinoma cells. It was suggested that αvβ3 can modulate the expression of MMPs in trophoblasts, and this action is carried out through distinct mechanisms in normal and carcinoma cytotrophoblast cells.     

2种骨髓间充质干细胞生物性状的比较

比较老人和胎儿骨髓间充质干细胞(MSCs)的生物学性状,为选择抗砷细胞的种子细胞提供实验依据。取老人和胎儿骨髓MSCs,在α-MEM培养液中进行骨髓MSCs培养,测定生长曲线,细胞贴壁率及NaAsO2对骨髓MSCs的细胞毒作用。从老人和胎儿骨髓中可培养出骨髓MSCs,二者在细胞形态、生长特性等方面相似,胎儿骨髓MSCs的扩增潜能明显强于成人骨髓MSCs,胎儿骨髓MSCs对NaAsO2的耐受性比老人骨髓MSCs高。因此,从老人及胎儿骨髓中可分离培养出骨髓MSCs,在体外保持有效扩增能力。胎儿骨髓MSCs比老人骨髓MSCs更原始,具有更大的体外扩增潜能,可做为抗砷细胞的种子细胞。     

新型除草剂异丙脂草醚对小鼠细胞DNA损伤的比较研究

应用单细胞凝胶电泳试验，测试了新合成的除草剂——异丙酯草醚对小鼠骨髓细胞和睾九细胞的DNA损伤情况．实验结果显示：与对照组比较，异丙酯草醚对小鼠骨髓细胞和睾丸细胞DNA均有一定损伤（p〈0．05），且对小鼠睾丸细胞的作用更为敏感，呈剂量-反应关系。     

一种基于Voronoi Cells的C∞插值基函数及其在计算流体力学中的若干应用

根据自然邻点插值(NNI)方法的思想,基于Voronoi cells的几何特性,从自然邻点(Natural Neighbors)的概念出发,对C^∞插值基函数N_i(x)的数学性质进行了研究,给出了N_i(x)的一阶导数的一种数学表达式及其数学性质。将Voronoi cells和C^∞插值基函数应用于流体力学有限元方法(即自然元方法),通过对二维Burgers方程的数值算例说明了该方法在计算流体力学中的良好应用前景。结合实例讨论了该基函数的插值效果,同时说明了插值方法可很好地应用于计算流体力学的可视化(Visualization)处理。     

人间充质干细胞抑制乳腺癌细胞增殖作用的实验研究

应用人间充质干细胞作用肿瘤细胞,拟揭示间充质干细胞对肿瘤细胞的作用,为今后应用人间充质干细胞进行肿瘤细胞治疗奠定理论基础.应用胎儿真皮来源的Z3间充质干细胞和胎儿骨髓来源的BMMS-03间充质干细胞的条件培养液作用于乳腺癌MCF-7细胞,观察MCF-7细胞增殖和迁移能力的变化.结果显示,应用BrdU掺入分析和流式细胞仪测定等方法发现,在间充质干细胞条件培养液的作用下,MCF-7细胞的增殖受到了明显抑制;应用划痕实验和琼脂糖滴实验发现,MCF-7细胞的迁移能力也受到明显抑制.结果表明,人间充质干细胞对乳腺癌细胞的增殖和迁移具有抑制作用.