临床异种移植百年进展(述评)

美国最近连续报道4例基因工程猪供给人的异种器官移植，这些进展打破了异种移植临床研究领域近30年的沉静。尤其是实验性的猪心脏移植取得初步成功，引发了广泛的关注。异种移植面向未来的临床应用迈出了关键性一步。这4个案例，无论是创新精神、技术进步、审批流程，还是伦理学的同步跟进，都值得我国同行学习和借鉴。30年来，基因工程（GE）动物器官已经能在非人类灵长类动物（NHPs）模型中长时间存活。这些实验中，预存抗体、补体激活、凝血状态等机制参与的超急性排异反应基本上得到有效控制。异种移植已经达到临床应用的起跑点。然而，未来仍然有四大问题需要解决：免疫排斥、生物安全、跨种适配和伦理心理。本文简要概括临床异种移植百年来的主要进展，其困难程度可见一斑，但希望和探索从未终止。     

人体肿瘤的异种移植与抗癌药物研究

免疫缺陷动物的肿瘤异种移植为研究抗癌药物提供了各种人体癌瘤的实验模型。研究证明,药物对异种移植的人体肿瘤的作用与药物的临床疗效有良好的相关性。因此,人体肿瘤异种移植在药物研究中得到广泛应用。在针对某些类型癌瘤的新药筛选中,在评价药物对人体癌瘤的实验疗效以及在肿瘤的导向治疗研究中,此实验模型具有特别重要的作用。     

人体肺腺癌异种移植模型应用于抗癌药物复筛的可能性

人体肺腺癌异种移植于T细胞免疫缺陷裸鼠的模型应用于抗癌化合物的复筛。经同一化合物三次实验结果显示具有较好的重现性及量效关系。应用于复筛命中率较高,即可节约实验经费又对临床实际有一定的指导意义。     

猪作为异种器官移植供体的研究进展

异种器官移植(Xenotransplantation,XT)是未来生物学科中的重要研究领域之一.猪作为为人类提供移植器官的供体源具有得天独厚的条件.文章就器官移植(OrganTransplantation,OT)的历史、原因、移植后的免疫排斥反应和猪内源性逆转录病毒(porcine endogenous retrovirous,PERV)感染问题及可能的解决途径进行了综述.     

人肝癌BEL-7402裸鼠异种移植瘤模型的建立

把BEL-7402细胞株成功地移植于裸鼠,并已传5代。观测瘤体的生长情况,从生长曲线表现出肿瘤有较高的恶性行为——不断膨胀性生长。移植瘤病理形态学上与原细胞株具有相似性,移植瘤细胞核大,细胞多形性,细胞排列有的呈索状或腺样。电镜下移植瘤细胞具肝癌细胞超微结构特征,如细胞之间形成发育不全毛细胆管及其细胞连接,此外,还见到胞浆内存在核膜组装过剩的环孔板、染色质间颗粒、张力原纤维等结构。移植瘤染色体众数为不足三倍体,与原细胞株染色体众数分布大体相同。应用抗7402细胞多抗,PAP染色法表明移植细胞阳性反应,胞浆内有棕褐色沉淀。实验过程中移植瘤未测得AFP。这与原细胞株上清AFP阴性一致,移植瘤是否会出现AFP阳性反应有待于继续观测。     

影响人软组织肉瘤异种移植成功的某些相关因素

在裸小鼠体内移植了１４例肉瘤，成功５例（２例恶性纤维组织细胞瘤，２例横纹肌肉瘤，１例恶性外周细胞血管瘤），失败９例，接种成功率为３６％。分成移植成功群（ｓｕｃｃｅｅｄｅｄｉｎｔｒａｎｓｐｌａｎｔ，Ｓ群）和移植失败群（ｆａｉｌｅｄｔｏｔｒａｎｓｐｌａｎｔ，Ｆ群），对１４例被移植肉瘤的临床状况、组织病理学、免疫特性、ＤＮＡ含量、增殖因子和癌基因蛋白等进行了比较研究。Ｓ群中４例ＡＪＣ分期为Ⅲ或Ⅳ期，５例都是复发病例。Ｓ群的恶性程度明显高于Ｆ群，其中４例为高度恶性肉瘤，表现为细胞密度高，核异形性大，核分裂像显著增多。结果表明与肉瘤异种移植成功有关的某些可能因素为：组织来源，恶性程度高低，间质成份多寡，Ｓ期细胞百分数等。免疫学特性对肉瘤异种移植成功无明显影响。增殖因子Ｋｉ－６７和ＰＣＮＡ在Ｓ群中的表达明显高于Ｆ群，Ｓ群标本通常呈现较强的Ｋｉ－６７和ＰＣＮＡ染色，而Ｆ群通常显示较弱的染色，表明这两者是判定肉瘤生长速率和进展的较理想的指标。癌基因蛋白Ｐ５３在Ｓ群中的阳性表达率（６０％）明显高于下群（１８％）．进一步证明Ｐ５３在肿瘤进展中的重要作用。余癌某因蛋白在两群间的表达率无显著差别。     

人体移植猪器官

在生物技术和医学科学迅速发展的今天,给濒临死亡的患者换心、肝、肾、肺、胰等器官已不是稀罕之事,然而这些脏器如果是猪的,那就是个奇迹了。因为人体的免疫系统总是迅速而强烈地排斥异类的器官。     

异种核移植技术与线粒体遗传

线粒体具有自身的遗传物质,在细胞生长发育过程中起着重要作用,但同时自身的增殖又受到细胞核的严格调控．克隆动物的线粒体遗传牵涉到治疗性克隆中干细胞的线粒体来源与组成,对干细胞在临床医学的应用有着重要影响．文中综述了线粒体遗传学的研究和异种细胞核移植中的线粒体遗传问题上,提出了异种细胞核移植研究的策略．     

裸鼠异种移植瘤激活c型RNA病毒的机理探讨

裸鼠因胸腺先天发育不良、T细胞免疫功能缺损而成为移植异种肿瘤的理想动物模型。然而,裸鼠c型RNA病毒有被移植瘤活化的可能,国外已发现了几十例。从1981年起,我们对10余株长期传代的裸鼠移植瘤模型进行了比较系统的电镜检测,先后在大鼠BERH-2肝癌移植瘤(RL-1)、人肺鳞癌移植瘤(LSX-83)以及人肝癌移植瘤(LTNM_4)三株裸鼠模型中检出c型RNA病毒,进而对它们的活化,侵染机理进行了探讨,现报告如下。一般认为,裸鼠内源性c型RNA病毒在活化初期仅在包围移植瘤的基质中显现,而后2—3代,才侵染进入移植瘤的结缔组织、瘤细胞的间隙及其胞浆内。我们在RL-1中所见基本与之相符,但c型病毒的侵染范围似更大——瘤细胞的核周隙萌生芽孢以及毛细血管腔出现病毒颗粒,以往未见有报道。LTNM_4株的瘤细胞质膜上病毒芽孢多见,但胞浆内却查无病毒颗粒;LSX-83株从40代起,连续l5代c型病毒仅局限于瘤细胞的间隙。上述种种,提示裸鼠c型RNA病毒活化侵染过程的复杂性。 c型RNA病毒对移植瘤的侵染导致移植瘤生物学特性的改变。RL-1被侵染后,瘤细胞的间隙和内质网小池出现异常致密的有形物质;移植瘤生长缓慢;瘤组织回种大鼠皮下不能成活,而传代早期能生长。对LSX-83的侵染影响表现为移植瘤呈分化升级的趋向;瘤细胞核仁出现典型的核仁微分离。LTNM_4株的主要改变是暗细胞消失;线粒体内嵴有较多囊泡。长期传代的裸鼠异种移植瘤,其形态学特征会出现某些变化,但较c型病毒的侵染影响则小得多。内源性,c型病毒的基因组通常整合于宿主的染色体中,其潘化、侵染的机理同前尚不太清楚。订人认为,功能性肿瘤产生的蛋白质类活性物质可能对c型病毒有较强的诱导作用。RL-1与LTNM。株均乃高AFP含量的移植肝癌,c型病毒的激活可能与AFP有夫。至于淆化的e型病毒较长时期滞留在LSX-83瘤细咆的间隙,推测LSX-83瘤细胞表面可能缺乏c型病毒受体抑或具有某种抵御机制。三株裸鼠异种侈植瘤中查见c型病毒均在连续传代40代后。对于长期传代裸鼠肿瘤模型的病毒检测是鉴定模型质量的必要手段。     

人小细胞肺癌NCI-H446细胞裸鼠异种移植瘤模型的建立

目的　建立成瘤稳定、潜伏期短的人小细胞肺癌NCI_H4 4 6细胞裸鼠移植瘤模型。方法　初代移植后 ,通过皮下埋块法进行裸鼠体内连续传代移植 ,并对移植瘤的生长、组织形态和超微结构、染色体核型进行观察和检测。结果　通过连续传代移植建立了成瘤稳定、潜伏期短的人小细胞肺癌NCI_H4 4 6细胞裸鼠移植瘤模型。移植瘤的组织形态和超微结构特点符合NCI_H4 4 6细胞特点 ,染色体核型属人类染色体     

基于内生经济增长的我国养老保险制度模型

结合我国现行的养老保险制度安排,在一般均衡的框架下构建了一个三期的动态内生经济增长模型,模拟计算了我国2000～2060年的经济增长路径,发现人口老龄化对物质资本积累和人力资本投资具有不同的效应.完全基金制下的人力资本投资低于现收现付制,而物质资本积累高于现收现付制.完全基金制下的经济增长速度先是高于现收现付制,而后则低于现收现付制.     

新基因hSSB1逆转录病毒载体的构建、鉴定和稳定株的筛选

 hSSB1 (Human Single strand DNA binding protein) 是参与细胞DNA损伤应答的一个重要信号分子。根据GenBank 提供的hSSB1基因序列扩增其cDNA序列,插入到pBABE逆转录病毒载体中, 连接后的质粒转化后经过双酶切,PCR扩增及测序来鉴定pBABE-hSSB1阳性克隆。将阳性表达的pBABE-hSSB1和包装质粒转染到HEK293T细胞中,产生病毒液。将包装好的病毒感染细胞并用嘌呤霉素(puromycin)筛选稳定表达hSSB1的细胞株。重组pBABE-hSSB1质粒经双酶切,PCR扩增鉴定及DNA测序分析等方法证实克隆成功。Western blotting检测发现转染重组质粒pBABE-hSSB1的细胞株中hSSB1蛋白的表达水平高于对照组。该研究成功构建了针对hSSB1基因的逆转录病毒载体(pBABE-hSSB1),并得到了稳定高表达hSSB1的细胞株, 为深入研究其功能奠定了基础。     

Retrovirus transfer of a bacterial gene into mouse haematopoietic progenitor cells

The haematopoietic system is made up of a hierarchy of cells with different developmental, functional and proliferative capacities. Although cellular diversity appears to arise from the commitment and maturation of stem cells, the molecular basis for this differentiation process is unknown. The introduction of cloned DNA sequences into haematopoietic progenitor cells would provide a novel approach for studying this differentiating in vivo system. One laboratory has reported DNA-mediated transfer of genes into mouse bone marrow cells. However, retroviruses offer a number of advantages over DNA-mediated gene transfer procedures, including high efficiency infection of a wide range of cell types in vitro and in vivo, stable and low copy integration into the host chromosome, and a defined integrated provirus structure. For these reasons recombinant DNA techniques have been utilized to construct high efficiency retrovirus vectors expressing foreign genes. We demonstrate here, using such a retrovirus vector, the transfer of a dominant selectable drug-resistance gene into defined classes of mouse haematopoietic progenitor cells. These observations should facilitate the development of molecular genetic approaches to fundamental and clinical problems in haematopoiesis.     

图书馆信息系统的安全分析与安全策略

分析了影响图书馆信息系统安全的因素,提出了保障信息系统安全的解决策略。     

单采猪血浆的质量研究

研究单采猪血浆的质量情况,为建立猪血浆的质量标准提供参考依据。参照中国药典、欧洲药典及猪源性生物制品相关要求检测血浆的外观、pH、渗透压、总蛋白含量、枸橼酸盐含量、钠钾钙离子含量、是否无菌以及对猪细小病毒进行PCR检测方法的建立与应用。结果显示单采血浆外观正常,渗透压、总蛋白含量、枸橼酸盐含量、钾离子、钙离子、钠离子分别为315±34 mOsnlol/kg、53.7±3.2 g/L、15.98±4.88 mmol/L、3.00±0.45 mmol/L、2.35±0.38 mmol/L、151.3±22.4 mmol/L,检测结果均符合人血浆制品或者人血浆标准,但pH 7.81±0.21,其与人血浆规定含量稍有差异。单采血浆样品中只有1个样品检出细菌阳性。建立了猪细小病毒特异敏感的PCR检测方法,检测结果显示单采猪血浆猪细小病毒阳性率为0。实验为单采猪血浆质量基本符合现有人血浆或血浆制品质量标准。     

网络安全协议的一般框架及其安全性分析

分析了计算机网络中存在的安全风险,建立了网络安全协议的一般框架,讨论了网络安全协议中密码技术的安全性,指出了网络安全协议在具体实时应注意的问题。     

猪繁殖与呼吸综合症的血清学调查

猪繁殖与呼吸综合症(PRRS)是由PRRS病毒引起的一种传染病.文章报告了我市部分县市猪繁殖与呼吸综合症的血清学调查情况,发现阳性率为8.97%,为本地该病的防治提供了依据.     

猪病毒性脑心肌炎的诊断与防制

对一猪场的病猪进行了临床检查、免疫学检测、病理解剖及组织学观察,结果表明：经ELISA脑心肌炎病毒抗原检测,抗原阳性;临床检查显示急性出血性热性败血症、不典型神经症状;组织学检查显示急性心肌炎、非化脓性脑炎、急性出血性淋巴结炎;结论为猪病毒性脑心肌炎。