钙蛋白酶和钙蛋白酶抑制蛋白系统在雄性生殖调控中的研究进展

钙蛋白酶（calpain）是一族钙离子依赖性的、水解半胱氨酸的蛋白酶,钙蛋白酶抑制蛋白（cal-pastatin）是钙蛋白酶的特异性抑制蛋白.钙蛋白酶-钙蛋白酶抑制蛋白系统在多种细胞中发挥作用,本文就国内外对该系统在雄性生殖调控中的作用的研究情况作一概括,为人们进一步了解该系统奠定基础.     

小麦巯基蛋白酶抑制剂的纯化和性质研究

将小麦麦胚和麸皮的浸取液，经加热和利用ｐＨ沉淀，获得疏基蛋白酶抑制剂粗品；再经ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ，Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００分子筛层析，在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＨＰＬＣ柱上得到均为单一蛋白带的小麦ＣＰＩ纯品。其纯化度为原料浸液的４２倍。由ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得ＣＰＩ分子为单一肽链     

组织蛋白酶L抑制剂抗骨质疏松作用的研究进展

组织蛋白酶L的小分子抑制剂能有效地抑制骨吸收,抗骨质疏松作用明显。这些小分子抑制剂主要包括肽基环氧化物、肽基重氮甲烷、肽醛和肽基卤甲烷,此外肽腈、肽基迈克尔受体等的研究近年来也得到人们的关注。     

钙蛋白酶及其在内耳的研究进展

钙蛋白酶（calpain）是一类Ca2＋依赖性的半胱氨酸蛋白酶,可参与细胞骨架重构、细胞分化、信号转导、胚胎发育以及调节神经递质释放等多种生理活动。近年来的研究表明,calpain在各种因素引起内耳细胞死亡的病理过程中具有重要的作用。本文就calpain的结构、特性、功能以及在内耳方面的研究进展做一综述。     

冠状病毒主蛋白酶及其化学抑制剂研究进展

一个新的冠状病毒已经被鉴定为急性呼吸道综合症(SARS)的病原体,控制该病毒复制复合体活性的主蛋白酶(Mpro或3CLpro)将很可能成为开发针对SARS特效治疗药物的靶位点.综述了人冠状病毒株229E(HCoV 229E)和一种在猪体内引发传染性胃肠炎的病毒(TGEV)的Mpro的晶体结构以及以此为基础构建的SARS冠状病毒(SARS-CoV)同源蛋白酶的空间结构模型.通过对这些同源蛋白酶的结构及其与已知的蛋白酶化学抑制剂的结合特征进行分析后发现Mpro的底物结合位点具有惊人的保守性,这种保守性也被重组SARS-CoV Mpro能介导的TGEV Mpro的底物剪切实验所进一步证实.分子模型表明已有的鼻病毒3Cpro抑制剂经过改进后或许能用于SARS的治疗.     

钙调抑制剂对Ce—ratocystis ulmi两种形态的影响

不同浓度的Ｃａ＾２＋调抑制剂和Ｃａ＾２＋调抑制剂作用时间长短的不同，对Ｃ．ｕｌｍｉ生长过程中两种形态的影响。结果表明：Ｃａ＾２＋调抑制剂可使Ｃ．ｕｌｍｉ由多细胞形态转变成单细胞形态，随着抑制剂浓度的升高和抑制作用时间的增长，这种转变程度也增大，反之则小，这进一步说明了Ｃａ＾２＋在Ｃ．ｕｌｍｉ由多细胞形态转变为单细胞形态时，具有明显的调节作用。     

赤小豆胰蛋白酶抑制剂抑制人体精子顶体蛋白酶的动力学

通过一系列酶促反应动力学的研究，结果表明赤小豆胰蛋白酶抑制剂对人体精子顶体蛋白酶（Ａｃｒｏｓｉｎ）有较强的不可逆竞争性抑制作用．其Ｋｍ和Ｋｉ值分别为１．８６×１０－３ｍｏｌ／Ｌ和２．１×１０－５ｍｏｌ／Ｌ．     

蛋白酶抑制剂在肿瘤治疗中的作用研究

蛋白酶及其抑制剂是非常重要的信号分子,涉及多个关键的人体生理代谢途径,在体内受到严格的调控.蛋白酶抑制剂活性的紊乱可导致多种疾病,诸如心血管和炎症疾病、癌症和神经系统障碍等.已知蛋白酶在肿瘤细胞侵袭和转移过程中扮演着重要的角色.细胞外基质和基底膜重塑是癌细胞侵袭转移过程中的关键环节,这个过程需多个蛋白水解酶的表达和激活.蛋白酶抑制剂的应用在一定程度上可减少由蛋白酶水解引起的肿瘤细胞的侵袭和转移,且它的抑制作用具有不同程度的特异性,可以减缓肿瘤恶性发展的进程.文章对蛋白酶及其抑制剂的靶向治疗药物及临床应用研究进展进行了综述.     

玉米巯基蛋白酶抑制剂的纯化及部分性质

从玉米种子纯化的两种巯基蛋白酶抑制剂（ＣＰＩ－Ｉ和ＣＰＩ－Ⅱ）分子量分别为９５００和１３０００,经们都只抑制巯基蛋白酶的水解活性,而对丝氨酸蛋白酶则无抑制作用,属于巯基蛋白酶水解抑制剂,它们在ｐＨ３．０～１１．０或１００℃温度范围内保有１００％的抑制木瓜蛋白的抑制活性,表明在这些外界条件下其分子非常稳定。     

棉花半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因的克隆、表达与活性研究

通过从已构建好的突变体湘棉-18的cDNA文库中筛选分离出一个半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因的全长cDNA序列,经测序和序列分析,发现该片段包含一个完整的开放阅读框,长378个碱基,编码125个氨基酸,氨基酸序列中包含了一个半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族的保守区段Gln-Val-Val-Ala-Gly;信号肽预测发现该序列包含一个N端信号肽,保守区分析该基因编码的氨基酸包含一个半胱氨酸蛋白酶抑制剂相似区域.半胱氨酸蛋白酶抑制剂在大肠杆菌中表达重组蛋白,在条件为30℃,IPTG 5mmol/L,时间24～36h时,CPI实现最优表达,Western Blotting分析表明表达的蛋白正确.通过木瓜蛋白酶活性抑制实验,结果表明该重组CPI具有一定的酶活抑制作用.     

钙信使系统抑制剂对伸长生长有关的细胞壁酶的影响

钙信使系统抑制剂，ＥＤＴＡ、异博啶、ＬａＣｌ３、Ａ２３１８７和ＣＰＺ抑制ＩＡＡ诱导的小麦黄化芽鞘切段细胞壁纤维素酶的活性，增加细胞壁ＰＯ和ＩＡＡ氧化酶的活性。结果暗示钙信使系统可能参与ＩＡＡ诱导的小麦芽鞘伸长生长有关的细胞壁酶的活性调节。     

猪血浆巯基蛋白酶抑制剂的分离纯化及性质研究

用(NH_4)_2SO_4分段盐析,DEAE-纤维素离子交换和Papain—Sepharose亲和层析,从猪血浆纯化了一种巯基蛋白酶抑制剂(SUlfhydryl proteinase inhibitor;简称SPI);纯化倍数为54.36倍.经高pH、低PH不连续电泳呈一条区带.含糖量为7.77％;PI为4.80.氨基酸组成分析表明,猪血SPI富含酸性氨基酸、芳香族氨基酸和含硫氨基酸.用SDS-PAGE和SephadexG-100层析,测得分子量为130000d和131000d,由两个分子量略有差别的亚基组成.对木瓜蛋白酶有强烈抑制作用,对胰蛋白酶无作用。α-螺旋结构含量高。     

水稻巯基蛋白酶抑制剂的圆二色谱研究

水稻巯基蛋白酶抑制剂(CPI)圆二色性谱(CD)显示206nm和222nm处的双负峰,CPI分子以α 螺旋构象为主;当CPI与木瓜蛋白酶等摩尔结合后,CPI完全丧失抑制活性,复合物CD谱发生显著变化,α 螺旋含量降低.CPI具有较高的结构稳定性,但在100℃处理时间延长以及pH向酸碱两极变化时,其CD谱发生较大改变,α 螺旋含量减少;而抑制活性仅在pH>9时逐渐下降,在酸性条件下保持不变.用不同试剂修饰CPI分子中的巯基和二硫键,CPI的活性不受影响;DTT、PCMB修饰CPI,其CD谱发生显著变化,NEM修饰CPI,其CD谱变化甚微.4mol/L的脲中,CD谱仅显示206nm负峰、214nm和225～235nm处新的负肩,并在240～250nm之间出现新的负峰,分子中无规卷曲增加,CPI活性未受影响;经NBS修饰,CPI分子中α 螺旋减少,无规卷曲增加较多,CPI完全丧失抑制活性.     

丝氨酸蛋白酶抑制剂可抑制昆虫细胞表达的蛋白质降解

干细胞因子是一种多功能细胞因子,能在多级造血水平与其他细胞因子协同作用促进造血干/祖细胞及各种血细胞的存活、增殖和分化.重组人二连体干细胞因子具有比干细胞因子单体更高的比活,可以避免副反应.重组人二连体干细胞因子在Sf9细胞和大肠杆菌中表达时,发现有特异性降解.片段缺失实验证实切割位点位于重组人二连体干细胞因子的145位到165位氨基酸之间.丝氨酸蛋白酶抑制剂aprotinin和PMSF能抑制这种特异性降解.试验了不同浓度的aprotinin和PMSF对Sf9细胞存活和重组人二连体干细胞因子产量的影响,显示当aprotinin的浓度为1.0μg/mL时,重组人二连体干细胞因子的产量是没有加aprotinin时产量的2倍,而且aprotinin可以完全抑制这种特异性降解.     

钙蛋白酶在肉嫩化中的作用及其活性测定

介绍了与肉成熟有关的钙激活蛋白酶及其在肉嫩化中的作用、并对钙蛋白酶的活性测定方法、影响酶活性的因素等作了介绍.     

马铃薯天冬氨酸蛋白酶抑制剂基因克隆和结构分析

以马铃薯基因组ＤＮＡ为模板并基于天冬氨酸蛋白酶抑制剂基因的ｃＤＮＡ序列所设计的两个引物，通过ＰＣＲ扩增得到６６６ｂｐ的天冬氨酸蛋白酶抑制剂基因编码区，并将此片段克隆到ｐＵＣ１８的ＳｍａＩ位点．序列分析结果表明该基因除去末端一终止密码子外其可译框架编码２２１个氨基酸残基，前导肽包括３２个氨基酸残基，故该抑制剂的成熟蛋白由１８９个氨基酸组成，第６７位的精氨酸为抑制胰蛋白酶的活性中心．与ｃＤＮＡ相比核苷酸的同源性为９４．３％，氨基酸的同源性为９０％．基因ＤＮＡ无内含子．     

马铃薯天冬氨酸蛋白酶抑制剂基因5‘上游调控区的分…

利用单一特异引物聚合酶链反应技术，将马铃薯ＤＮＡ中天冬氨酸蛋白酶抑制剂家族一员的５＇上游区分离，并克隆进ｐＵＣ１８质粒ＳｍａＩ位点中。用＾３２Ｐ标记的单一特异引物－Ｐｒｉｍｅｒ Ａ为探针，经斑点杂交得一阳性克隆。ＤＮＡ测序获得含有马铃薯天冬氨酸蛋白酶抑制剂基因５＇上游区的插入物的核苷酸序列。从这序列结构中见到ＴＡ富含区，并发现典型的调控序列ＴＡＴＡ和ＣＡＡＴ。此上游序列与国外所得到的天冬氨酸蛋白酶