高脂对中华鳖肝脏组织中microRNA及相关基因表达的影响

为研究高脂对中华鳖肝脏组织中micro RNA及相关基因表达的影响,选取180只中华鳖随机分成两个实验组,分别投喂脂肪质量分数为7.98%(对照组)和13.86%(高脂日粮组)的饲料.定制光周期为12 h光照vs12 h黑暗.饲养6周后,每间隔3 h采集一次肝脏样品,研究高脂对中华鳖micro RNA及相关基因节律性表达的影响.结果表明,中华鳖肝脏组织中3个重要的micro RNA均具有节律性表达特征,且与生物钟核心基因(Clock,Bmal1和Bmal2)和脂肪代谢基因(Lxrα,PPARα和Sirt1)之间具有较强的相关关系.但高脂日粮改变了mi R-1a,mi R-21和mi R-34a节律性表达特征和表达水平,从而引起其相应靶基因(生物钟核心基因和脂肪代谢基因)的昼夜节律表达模式、m RNA表达水平及他们之间的相关关系发生相应改变.该结果为micro RNA参与调控中华鳖肝脏中脂肪代谢相关基因的节律表达提供新视角.     

斑马鱼心脏标记基因pitx2的多克隆抗体的制备

pitx2基因是一类bieoid相关的同源异型框因子成员,介导心脏左右不对称发育和内脏器官的偏侧化.pitx2基因位于Nodal信号途径的下游,直接由Nodal信号分子控制.用PCR技术扩增斑马鱼pitx2基因的部分编码区,并将其插入到原核表达载体pGEX-4T-1中,经过酶切和测序鉴定后,将重组质粒(pGEX-4T-1-pitx2)转入B121感受态细胞,通过IPTG诱导表达融合蛋白.用GST珠亲和纯化,将纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,并用Western Blot检测抗体.获得了pitx2原核表达重组融合蛋白及高效价的特异性兔抗pitx2多克隆抗体.提取斑马鱼不同器官和组织蛋白,用自制的多克隆抗体检测pitx2基因在斑马鱼中的表达情况,发现pitx2基因特异性地在心脏、脑、肌肉、小肠和肝脏表达,尤其在心脏中有很高的表达,表明制备的抗体特异性非常好.     

锦鲫Clock基因表达量分析中的内参基因稳定性比较

为研究锦鲫Clock基因表达量分析中的内参基因稳定性,采用qRT-PCR技术进行实时荧光定量分析,并用Ge Norm和Norm Finder软件对5个内参基因(RPL13,GAPDH,18 S rRNA,β-actin和RPS29)进行稳定性评估,筛选出不同组织中最适合的内参基因,以准确定量Clock基因的相对表达水平.实验结果表明,5个内参基因中,18 S rRNA在锦鲫的肌肉、心脏、肝脏中表达最稳定,β-actin在肠中表达最稳定,RPL13在肾中表达最稳定;根据筛选的内参基因定量Clock基因的相对表达水平发现,Clock基因在锦鲫肌肉中相对表达量最高,其次依次是肝脏、肾、肠,心脏中最低.本研究准确定量Clock基因,为锦鲫生物钟节律机制的下一步研究奠定了理论基础.     

二氢丹参酮Ⅰ对人肺癌A549和H1299细胞自噬的影响

以人肺癌A549和H1299细胞为研究对象，探究二氢丹参酮Ⅰ对其自噬的影响．采用qRT-PCR检测不同浓度二氢丹参酮Ⅰ作用人肺癌A549和H1299细胞48 h后自噬相关基因LC3,Beclin-1 mRNA的表达；采用Western Blot检测不同浓度二氢丹参酮Ⅰ作用人肺癌A549和H1299细胞48h后自噬相关基因LC3,Beclin-1蛋白的表达；免疫荧光法检测人肺癌A549和H1299细胞自噬泡．结果表明，经二氢丹参酮Ⅰ处理后，LC3和Beclin-1表达明显高于未加药处理组（P<0.05,P<0.01,P<0.001）,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值增加（P<0.05,P<0.01,P<0.001）；免疫荧光结果显示，经二氢丹参酮Ⅰ处理细胞后，细胞核周围出现集聚的绿色荧光，LC3蛋白集聚形成了自噬泡，表明一定浓度的二氢丹参酮Ⅰ可诱导人肺癌A549和H1299细胞发生自噬．     

戊型肝炎病毒ORF2片段在毕赤酵母中的分泌表达及活性鉴定

为了寻求新型表达系统来研制戊型肝炎病毒基因工程疫苗，利用Pichia pastoris表达系统表达戊型肝炎病毒(HEV)结构区ORF2基因．利用PCR扩增HEV ORF2基因，然后将ORF2基因按正确的阅读框融合到Pichia postoris分泌型表达载体pPIC9K的a-因子信号肽编码序列3’端，重组表达载体在电击转化毕赤酵母，经过含G418的营养缺陷型培养基(RDB)筛选、重组酵母基因组总DNA进行PCR鉴定后，证实HEV ORF2基因已经整合到酵母基因组中并得到重组转化子．表型鉴定后对G418具有不抗性的重组菌株诱导表达，用双抗体夹心法ELISA筛选了表达外源蛋白的重组菌株，再经SDS-PAGE与Western blot证实ORF2基因在Pichia pastoris中实现了分泌表达，而且重组蛋白具有较强的特异性与生物学活性；同时用双抗体夹心法证实在Pichia pastoris表达的上清中存在衣壳蛋白聚体．     

人类新基因RHBDL8的研究初报

运用计算机克隆的方法获得了一个新的人同源基因，经国际基因命名委员会批准命名为Rhomboid，veinlet-like8(RHBDL8)．该基因位于7号染色体q11．23区域，mRNA全长约1．8kb，3’末端含有ATAAA的加尾信号，编码一段长434个氨基酸的蛋白质．该蛋白质含有一个rhomboid保守区，且高度相似于一个未有研究的小鼠蛋白．其表达在胚胎期(23周)主要集中在大脑、心脏、骨骼肌，而在成体，除脑部依然有大量表达外，上述的其他部位表达量均大大降低．这种在发育过程中的表达变化提示我们该基因可能在这些器官的发育中起到了一定的调控作用．     

小鼠肌肉损伤修复过程中CTPS及细胞周期相关基因表达变化

为研究小鼠肌肉损伤修复过程中CTPS基因及细胞周期相关基因CCND1的变化规律,以8周龄雄性昆明小鼠为实验材料,采用注射盐酸布比卡因制备肌肉损伤及修复模型,通过qRT-PCR,WesternBlot检测CTPS和CCND1基因的表达变化.结果表明,与对照组相比,注射盐酸布比卡因2～8 h小鼠肌肉组织中CTPS和CCND1基因表达快速增高,且CTPS表达升高早于CCND1;在修复24～72 h过程中,随着时间的延长CTPS和CCND1基因表达量逐渐增高,CTPS基因48 h后增加变缓,CCND1基因在48 h时达到最高.综上所述,在小鼠肌肉修复72 h时间范围内,CTPS和CCND1基因表达升高以满足细胞增殖的需要.研究结果为明确CTPS在肌肉损伤修复中的作用提供实验基础.     

半定量RT-PCR法检测Wee1基因在水稻胚乳发育过程中的表达模式

通过半定量RT-PCR研究Wee1基因在水稻胚乳中的表达模式．结果发现Wee1基因的表达伴随水稻种子胚乳的整个发育过程．在所检测的几个时期中,授粉后第4d（4days after pollination,4DAP）的胚乳中Wee1基因表达量最大;以后随着发育的进行,其表达量逐渐降低,直至15DAP的胚乳中仍有微弱表达．     

转美洲拟鲽抗冻蛋白基因(afp)番茄D4代植株可溶性蛋白分析

对转美洲拟鲽抗冻蛋白基因（afp）的第四代番茄及其对照经低温处理后，对幼苗叶片组织可溶性蛋白进行聚丙烯酰胺凝胶电泳分析和紫外吸收法测定含量。发现转基因各组经低温诱导后的可溶性蛋白均比对照明显增加，聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱发生变化。其中A-Ⅲ区电泳谱带迁移率加快，C区和B区语带染色加深．说明导入的afp基因已经表达，并使番茄获得抗寒性。     

细胞凋亡的相关基因及表达调控研究进展

细胞凋亡是由一系列基因控制的主动的细胞学过程．本文概述了细胞凋亡相关基因及表达调控，如ced基因家族、bcl-2基因家族、P53基因家族、ICE基因家族、Fas／Apo基因以及与凋亡相关的癌基因等，同时简介了一个细胞凋亡基因调控的新模式和该领域的研究新动向．     

用Authorware编写交互、可控的动态画椭圆程序

若一动点到两个定点的距离的和为定长,则该动点的轨迹为椭圆,利用Authorware提供的函数和变量,可将椭圆定义形象直观地表现出来,并通过提供的交互功能对动态过程进行控制。     

已烯雌酚对蝌蚪抗敌敌畏诱导氧化损伤的作用研究

研究已烯雌酚（DES）对中华大蟾蜍（Bufobufo gargarizans）蝌蚪抗敌敌畏（0,0-二甲基-0-（2,2-二氯乙烯基）磷酸酯,DDVP）诱导的氧化损伤的作用．方法：蝌蚪（30～35期）随机分为5组：I（0mg／LDDVP＋0mg／LDES）为空白组;Ⅱ（12．9mg／LDDVP＋0mg／LDES）为单独DDVP处理组;Ⅲ（12．9mg／LDDVP＋1．0mg／LDES）;1V（12．9mg／LDDVP＋2．0mg／LDES）;V（12．9mg／LDDVP＋3．0mg／LDES）为DDVP和DES联合处理组．在染毒24h和72h时测定蝌蚪肝组织中超氧化物歧化酶（SoD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的活性以及丙二醛（MDA）的含量,计算抗氧化指数．其结果在DDVP（12．9mg／L）存在的条件下,随着DES（1．0mg／L）的加入和浓度的依次加大（2．0mg／L,3．0mg／L）,SOD活性呈下降趋势,72h时具显著性（P〈0．05）;GSH—Px活性呈先升高后降低的变化趋势,在24h和72h均具极显著性（P〉0．01）;MDA含量呈先降低后升高的变化趋势,72h时具显著性（P〈0．05）。其中联合处理组Ⅲ的抗氧化能力最强．结论：DES对DDVP诱导的氧化损伤作用具有拮抗效应,能有效地增强中华大蟾蜍蝌蚪的抗氧化能力．     

D-图的特征

给出图G当def(G)≠0时,level(G)分别为0,1,2的充要条件,并给出路、星图、圈、哈密尔顿图和三正则图的level.     

图的最大度与（p,1）-全标号

图G的一个(p,1)全标号是与频道分配有关的一种染色,它是从V(G)UE(G)到一个整数集合的映射,且满足:1)图G的任意两个相邻的顶点得到不同的整数;2)图G的任意两个相邻的边得到不同的整数;3)图G的任意一个顶点和它所关联的边得到的整数必须至少相差P.一个(p,1)一全标号的跨度是指最大标号数与最小标号数的差.图G的所有(P,1)-全标号函数中最小的跨度,称为图G的(p,1)-全标号数,记为λTP(G).本文我们证明了对任意的图G,其最大度△是偶的且至少是10,则λT2≤2△-1.另外对于任意的简单连通图G,其最大度为△,如果G的最大度点的邻点中至多有△-1个最大度点,则λTP(G)≤p+4.     

镉、铅、铜对梨形四膜虫的毒性作用

研究镉（Cd2＋）、铅（Pb2＋）、铜（Cu2＋）对梨形四膜虫（Tetrahymenapyrifomis）的毒性作用,结果表明Cd2＋、Pb2＋、Cu2＋对梨形四膜虫的24hEC50值分别为0．41mg·L-1、1．88mg·L-1和3．84mg·L-1;48EC50值分别为0．20mg·L-1、1．08mg·L-1和1．21mg·L-1;Cd2＋、Pb2＋、Cu2＋对梨形四膜虫的种群生长具有明显的抑制作用,梨形四膜虫对Cd2＋反应最敏感．     

聚乙二醇催化合成α-丁基苯乙腈

苯乙腈在氢氧化钠、1-溴丁烷及相转移催化剂聚乙二醇作用下可顺利地发生α-丁基化反应,不同分子量的聚乙二醇具有不同的催化效力,溶剂、温度及催化剂用量对本反应均有重要影响.     

RNA干涉的研究进展

RNA干涉(RNA interfering)是目前分子生物学领域的研究热点之一,RNAi是一种极为保守的生物机制,而且已在很多种生物中发现了该现象,或是获得了成功的干涉实验。由于RNAi具有良好的技术优越性,使其在很多领域,如基因功能验证、疾病治疗方面有着广阔的应用前景。     

水相中合成CdSe量子点的研究

分别用Na2SeSO3和NaHSe为前驱体在水相中合成了CdSe半导体量子点（Quantum Dots, QDs）材料，通过紫外吸收光谱（UV-VIS）、荧光发射光谱（PL）、透射电子显微镜（TEM）等手段对制备的样品进行了表征. 实验结果表明：选用同一前驱体，紫外吸收峰、荧光发射峰随反应时间的延长有明显红移，即粒径在不断长大；随反应时间延长荧光发射谱的半峰宽逐渐变宽，选用不同的前驱体，反应相同的时间，可以得到不同粒径的量子点材料，量子点水溶液Zeta电位基本不受前驱体和pH值的影响，始终为负值.     

关于条件(P)和强平坦性

利用新方法,研究了所有满足条件(P)的右S-系是强平坦系的幺半群的刻画,得到了新的幺半群类,并通过举例说明论证,所得的新结果推广了关于该问题的一些主要结论。     

老年性痴呆患者EEG复杂度比较分析

运用非线性动力学方法比较分析了老年痴呆(AD)患者与同龄正常人的脑电(EEG)复杂度特征,初步表明AD患者头皮各导联处EEG信号的复杂度均显著低于同龄正常人的相应值.研究结果提示:可考虑试用复杂度作为AD临床诊断的特异性指标作进一步深入研究.